(完整版)抗氧化试验方法

一、试验方法
1、DPPH自由基清除率的测定
本实验采用1,1-diphe残酷的欲望nyl-2-picryhydrazyl(DPPH)法测定样品清除自由基活性。
1.1实验原理
  1,1-二苯基-2-苦肼基(1,1-diphenyl-2-picryhydrazyl(DPPH))是一种稳定的以氮为中心的自由基,其乙醇溶液显紫,最大吸收波长为517nm。当DPPH溶液中加入自由基清除剂时,其孤对电子被配对时,吸收消失或减弱,导致溶液颜变浅,显黄或淡黄,在517nm处的吸光度变小,其变化程度与自由基清除程度呈线性关系,故该法可用清除率表示,清除率越大,表明该物质清除能力越强。
1.2溶液的配制
0.08mmol/L DPPH溶液的配制:精密称取DPPH8.0mg,用无水乙醇溶解并定容至200ml棕容量瓶中,得浓度为0.004%的DPPH溶液,避光保存,备用。
1.3实验步骤:分别取不同浓度的各样品溶液(0.24,0.48,0.72,0.96,1.20mg/ml)1.0ml,置10ml离心管中,加入3.0ml的DPPH溶液,室温避光反应30min,同时以无水乙醇为空白,于517nm波长处测定吸光值。按下列公式计算DPPH自由基清除率。聚氨酯改性环氧树脂
DPPH自由基清除率(%)= A0-(As-Ac)/ A0×100%
公式中,A0—1.0ml蒸馏水+3.0mlDPPH溶液的吸光度值
        As—1.0ml样品溶液+3.0mlDPPH溶液的吸光度值
Ac—1.0ml样品溶液+3.0ml无水乙醇的吸光度值
将实验重复三次,求得清除率的平均值。
2、总的抗氧化活性的测定
总的抗氧化活性实验采用改良后的Prieto法。
2.1实验原理:磷钼络合物测定方法的原理是Mo(VI)被抗氧化物质还原成绿的Mo(V)络合
物,其最大吸收波长为695nm。抗氧化物质活性越强,测定的吸光度值越大。此方法操作简单,所用试剂低廉、方法重现性好,非常适合抗氧化性的测定。
2.2溶液的配制
样品液:同上
磷钼试剂:0.6mol/L浓硫酸溶液、28mmol/L磷酸钠溶液和4mmol/L钼酸胺溶液混匀,即得。
2.3实验步骤
分别取不同浓度的各样品溶液(0.24,0.48,0.72,0.96,1.20mg/ml)1.0ml,置10ml离心管中,加入3.0ml试剂溶液(试剂溶液中包括0.6mol/L的硫酸、28mmol/L的磷酸钠、4mmol/L的钼酸铵)。混合液于95℃水浴锅中分别水浴30min60min90 min120 min150 min
放冷至室温,695nm处测吸光度值。以蒸馏水为空白,吸光度值越大,表明抗氧化能力越强。BHT康复舞春满人间做为阳性对照。将实验重复三次,求平均值。喷嘴设计
三、还原力的测定
3.1 实验原理
功率放大器  以普鲁士蓝[Fe4(Fe(CN)6)3] 之生成量作为指标,将六氰合铁酸钾[K3 Fe(CN)6] 还原成K4Fe(CN)6,再利用Fe3+形成Fe4(Fe(CN)6)3,由700nm处吸光值变化检测还原力大小。吸光值愈高表示样品的还原力也就越强。
3.2 溶液的配制
3.2.1样品的配制:用乙醇配制浓度分别为0.24,0.48,0.72,0.96,1.20mg/ml各样品溶液,浓度分别为0.06,0.12,0.18,0.24,0.30mg/mlBHT溶液,Vc溶液。
3.2.2 0.2mol/LPBS,PH=6.6:
A溶液:0.2mol/L Na2HPO4溶液:称Na2HPO4.2H2O35.63g,定容至1000mL;
B溶液: 0.2mol/L NaH2PO4溶液:称NaH2PO4.2H2微冻技术O31.21g,定容至1000mL;
取A溶液37.5mL加B溶液62.5mL,即为pH=6.6的0.2mol/L PBS。
3.3 实验步骤
不同浓度的各样品溶液(0.24,0.48,0.72,0.96,1.20mg/ml)1.0ml,加入0.2moL/L的磷酸盐缓冲液(pH=6.6)2.5mL和1%的铁溶液2.5 mL,得混合物于50℃水浴保温20分钟,然后加入2.5ml10%(w/v)三溶液,混合溶液3000rpm离心10min,精密吸取上清液2.5ml,加入2.5ml蒸馏水和0.5ml0.1%的三氯化铁溶液,在700nm处测吸光度(吸光度值越大,还原力越强)。BHT做为阳性对照。将实验重复三次,求平均值。

本文发布于:2024-09-23 10:18:32,感谢您对本站的认可!

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