主要目的:
主要原理:
——自由基清除剂与DPPH单电子配对而使其吸收逐渐消失,其褪程度与其接受的电子数量成定量关系,因而可用酶标仪进行快速的定量分析。 实验室签章
一、试剂
——1 ,1-二苯基-1-苦味肼基自由基(DPPH)
——甲醇(分析纯)
二、仪器设备
——96孔酶标板
——UV-Vis可见多功能酶标仪
——移液
—
—200 µL量程头
三、实验方法
◆前期准备
配置2 g/L 的DPPH甲醇标准溶液。
◆DPPH自由基清除能力
参照Brand-Williams (1995)哈尔滨电视台都市零距离[1] 报道的方法,将其稍加改动后应用在96孔酶标板中[2]。在酶标板的每孔中,依次加入不同体积(10、20、30、40、50、60、70、80、90和100 µL)的样品溶液和200 μL的DPPH标准溶液(2 g/L),最后用甲醇溶液补齐至总体积300 µL。
室温反应30 min后,于515 nm小鸡对话下用UV-Vis可见多功能酶标仪测定其吸光度(EL 340, Bio-T
ek Instruments, Inc., Winooski, VT, USA)。番茄样品消除自由基的能力表示为EC50(清除1 µg DDPH至50 %所需的样品用量(µg干重))。
EC50越小,表示抗氧化活性越高。平行测定三次,取平均值计算。
清除DPPH自由基能力用如下公式计算:
清除率%=(1-热看网)×100%
其中:Ai为样品溶液加DPPH试剂混合液的吸光度,Aj为样品溶液加甲醇的吸光度,Ac为DPPH溶液加样品溶剂的吸光度。
[1] Brand-Williams W, Cuvelier M E. Berset C. Use of a free radical method to evaluate antioxidant activity [J]. LWT - Food Science and Technology, 1995, 28(1): 25-30.
起死回生术[2] Verma A R, Vijayakumar M, Rao C V. Mathela C S. In vitro and in vivo antioxidant properties and DNA damage protective activity of green fruit of Ficus glomerata [J]. Food and Chemical Toxicology, 2010, 48(2): 704-709.