一．实验原理：DPPH（11-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical）即11-二苯基-2-苦基肼基自由基，DPPH自由基是一种较稳定的含氮自由基，有一个单电子，在517nm下有强吸收，如果有其他物质提供一个电子使此单电子配对，其吸收会消失褪，褪程度与接受电子的量呈正比。即反应物清除氮自由基的能力与试剂在517nm的吸光值成反比。 二．实验仪器：分光光度计
三．实验试剂：试剂一：DPPH试剂1mL×1瓶
试剂二：100μg/mL 维生素C标准溶液 20mL×1瓶
四．溶液配制：
试剂一：37℃平衡20min以上，待试剂融化后，在试剂瓶中加入100ml 95%乙醇或无水乙醇，剧烈震荡使试剂充分溶解。
注意：溶解一定要充分，如有条件可采用超声波助溶。
试剂二应用液：根据是否需要制作阳性对照标准曲线有两种配制方法。
1. 如仅需要将维生素C作为质控品，可取100μL 试剂二，加入900μL样品稀释液，充分混匀； 2. 如需测定维生素C的IC50，可分别移取0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，4.0，5.0mL 试剂二于空离心管中，再依次加入10.0，9.5，9.0，8.5，8，7.5，7.0，6.0，5.0ml样品稀释液，充分混匀。配制成0，5，10，15，20，25，30，40，50 μg/mL 维生素C样品。
五．实验步骤:
| 空白孔1 | 测定孔报告与请示 | 对照孔2 | 质控孔 |
吉林市苏宁天润城试剂一（mL） 模具抛光机 | 1 | 错位关系1 | 0 六甲基二硅氧烷 | 1 |
样品溶液（mL） |
| 知识与能力训练1 | 1 |
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试剂二应用液（mL） |
|
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| 1 |
样品稀释液（mL） | 1 |
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充分混匀，室温避光静置30min使之充分反应。选用0.5mm比皿3，517nm处测定吸光值。
六．清除能力计算：
氮(DPPH)自由基清除清除能力(%)=[空白孔吸光值-(测定孔吸光值-对照孔吸光值)]/空白孔吸光值*100%
七．注意事项：
1. 如样品中素物质不是分析对象，建议先通过SEP C18柱进行脱处理，处理后样品可不做对照孔；
2. 如不确定样品的氮自由基清除能力，可先做不同浓度的稀释液进行摸索，并选择适宜浓度进行测定，高浓度下，浓度与清除率间并不线性相关。
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