【产品名称】
通用名称：
江苏中行英文名称：
【包装规格】
【预期用途】
【检验原理】
【主要组成成分】
【储存条件及有效期】
【适用机型】
【样本要求】
【检验方法】
【参考值（参考范围）】
【检验结果的解释】
【检验方法的局限性】
ourcm【产品性能指标】
【注意事项】
【参考文献】
【生产企业】
【医疗器械生产企业许可证编号】
【医疗器械注册证书编号】
【说明书批准及修改日期】
【产品名称产品名称】】
妈妈的恶作剧
百花悬念故事通用名称：苯丙氨酸定量检测试剂盒（荧光法） 英文名称：Phenylalanine Kit （FA ） 【包装规格包装规格】】
96人份/盒 480人份/盒 【预期用途预期用途】】
用于定量检测采集在S&S 903# 滤纸上的新生儿全血样品中苯丙氨酸的浓度。适用于新生儿苯丙酮尿症（PKU ）的筛查，仅用于体外检测。
苯丙酮尿症（简称PKU ）是一种较常见的常染体隐性遗传性氨基酸代谢病，发病率约1/10,000。本病可因苯丙氨酸羟化酶缺乏引起，也可因辅酶因子BH 4缺陷引起。这些缺陷致使苯丙氨酸不能被转化为酪氨酸，导致大量的苯丙氨酸及其代谢产物在体内堆积，引起中枢神经系统损害。其临床主要表现为：发育迟缓，毛发、皮肤及虹膜变浅，癫痫，进行性智力低下等。由于本病的早期发现早期，对患儿的生长发育、智力发育不受影响，因此被我国列为新生儿疾病筛查项目之一。检测方法还有细菌抑制法、酶法等。 【检验原理检验原理】】
在含有琥珀酸缓冲液、二肽溶液和茚三酮溶液的混合液中，茚三酮可以和苯丙氨酸反应，产生一种荧 光物质，其中二肽可提高此荧光反应，琥珀酸缓冲液控制PH 5.8±0.1，可保证理想的荧光值和最大的特异性，加入铜溶液后可以使荧光化合物更加稳定并终止反应。使用荧光读数仪（激发光390nm ，发射光486nm ）测定荧光物质的强弱，即可反映苯丙氨酸的浓度。 【主要组成成分主要组成成分】】 名称
96人份/盒 480人份/盒 包装
琥珀酸缓冲液 （琥珀酸）
5ml /瓶 25ml /瓶
无透明玻璃瓶 或白塑料瓶
二肽溶液 （L-leucyl-L-alanine ） 1 ml /瓶 5ml /瓶 茚三酮溶液（茚三酮）
2 ml /瓶 10m l/瓶 铜溶液（碳酸钠、酒石酸钾纳、硫酸铜） 25ml /瓶 125m l/瓶
96孔微孔板（透明） 1块 5块
无透明塑料袋
96孔微孔板（白）
1块 5块 标准血片S 1～S6 （0.24、1.06、2.76、5.32、8.34、13.47 mg/dl ） 1份 2份 铝箔袋
质控血片C1、C2 1份
2份
说明书 1份 质量验证单
1份
注：标准品或质控血片的浓度若有改变，将在试剂盒内放通知单，同时电话通知。
【储存条件及有效期储存条件及有效期】】 储存条件：2℃～8℃，防止冷冻。
有效期：12个月。本试剂为一次性使用产品，开启后一次性使用。 【【适用机型机型】】 芬兰PE 公司WALLAC 1420型荧光仪（激发波长390nm，发射波长486nm）。 【【样本要求样本要求】】
遵循卫生部新生儿筛查血斑采集常规采集和保存血斑。 【检验方法检验方法】】
1. 实验前将试剂盒先放在室温（18℃～25℃）平衡，铜溶液仍放在2～8℃冰箱内，即取即
用。配制80％乙醇溶液：无水乙醇和双蒸水按4：1比例混合，即配即用；
2. 反应混合液：琥珀酸缓冲液、二肽溶液和茚三铜溶液按5∶1∶2比例混合，避光保存，4小时内用完；
3. 用专用打孔器打下直径3mm 标准品、质控品、样本的滤纸血斑，放入透明微孔板相应的孔中；
4. 每孔加入80％乙醇80ul，盖膜，室温振荡30分钟（振荡时避免血片上下跳动，以免萃取不完全)；
5. 每孔取出萃取液50ul 转移到白微孔板的相对应孔中；
6. 每孔加入反应混合液50 ul ，盖膜，振荡15秒，60℃温育1小时或37℃温育2小时；
7. 从温育箱中取出微孔板，放入冰箱（-18～-20℃）冷冻3～5分钟；
8. 每孔加冷的铜溶液200ul （2～8℃冰箱内取出），避光在室温温育15～30分钟；
9. 上机测定，荧光仪使用的激发波长390nm，发射波长486nm 。 10. 结果计算：
可利用荧光仪提供数据自动处理软件，自动绘制标准曲线计算样品的苯丙氨酸浓度。 手工计算：
（a ）坐标纸上以标准品荧光值（纵轴或Y 轴）和与其相对应的浓度（横轴或X 轴）绘制标准曲线。 （b ）质控品和样品的苯丙氨酸浓度值：首先在Y 轴上查荧光值，横向延伸至标准曲线，以标准曲线上的点拉垂直线与X 轴相交，得出苯丙氨酸浓度值，判断结果。
铁
计算公式：y = ax ＋b （a ＝标准曲线斜率，b＝标准曲线在y 轴上的截距） 单位转换：1mg/dl=60.6umol/L
【参考值参考值】】（参考范围）
对1013例正常新生儿血斑样品使用本试剂盒进行检测，95％的百分位数为1.5 mg/dl ，97.5％的百分位数为1.7mg/dl ，99％的百分位数为2.0mg/dl 。参考值即切值（Cut off ）：≤1.7mg/dl 。见分布图1
图1
建议每个实验室根据所在地区新生儿样品，建立适合本地区自己实验室的正常参考值。 【检验结果的解释检验结果的解释】】
1.如果血斑的苯丙氨酸浓度大于1.7 mg/dl，为 "可疑阳性"，应进行原血斑复检，如果复查的结果仍高于1.7mg/dl, 应采集新的血斑，进行确认实验。
2.结果本身不能成为的惟一因素。必须与其他的临床观察和诊断试验相联系。
3.质控品的结果必须控制在要求范围之内，否则实验结果不符合可接受范围视为无效。
4.血样采集时间为出生72小时，并充分哺乳6次以上，否则会导致假阴性结果。 【检验方法的局限性检验方法的局限性】】
1. 任何高浓度值的结果都要视为‘可疑阳性’须复查。存在任何苯丙氨酸病历或临床症状都要复查。
2. 不排除药物对病人苯丙氨酸的直接影响。若病人有PKU 临床症状或相关病历，即使苯丙氨酸的值正常也要复查。
3. 应使用新生儿筛查专用S&S 903#滤纸采集血斑。使用其它滤纸结果将不同。 【产品性能产品性能指标指标指标】】
1. 试剂盒外观整洁，文字符号标识清晰
2. 液体组分的外观： 琥珀酸缓冲液、二肽溶液应为无透明液体；
茚三酮溶液应为淡黄透明液体； 铜溶液应为淡蓝透明液体；
以上溶液均应性状均一，无颗粒物，无絮状物。
3. 血制品经抗-HIV 、HBsAg 、抗-HCV 、梅毒抗体、转氨酶检测呈阴性
4. 剂量－反应曲线的线性范围0.24 mg/dl ～13.47 mg/dl （其确定值以随行质量验证单为准）。
5. 批内精密度 不大于10 %；
6. 批间精密度 不大于15 %；
7. 准确性 回收率为85%～119%；
8. 特异性 与酪氨酸、组氨酸和甘氨酸无交叉反应； 9 灵敏度 最低可检出限小于0.6 mg/dl ；
10. 相关性 实验中分别使用60℃温育1小时和37℃2温育小时的温育条件，共检测47例未知样品，其相关性R ＝0.989 见图2 图2
【注意事项注意事项】】
1. 仅用于体外诊断。一次性使用产品，供专业人员使用。
2. 不同批号的试剂不可混用；超出有效期的试剂不可使用。
3. 按照检测程序加样，不可颠倒顺序，否则会导致实验失败。
4. 试剂和样本应视为存在潜在的生物危害，实验结束后作为潜在传染源处理。
5. 茚三酮溶液对皮肤有刺激作用，进行操作时应戴手套。
6. 自备实验材料：荧光仪、振荡器、温育箱、无水乙醇溶液、移液器、一次性手套等。 【参考文献参考文献】】
1．Guthrie R, Susi A. (1963) 小儿科
2．McCaman M W, Robins E (1962) J.Lab.临床医学 59 885
3．Wendel U, Hummel W, Langenbeck U (1989)生物化学年鉴 180.9. 【生产企业生产企业】】
钒矿企业名称：北京协和洛克生物技术研究开发中心 地址：北京市海淀区恩济庄18号院4－2－302 ：100036
电话：010－51295656 传真：010－88140690
网址：www.unionluck 【医疗器械生产许可证编号医疗器械生产许可证编号】】 京药管械生产许20040085号 【医疗器械医疗器械注册证书注册证书注册证书编号编号编号】】
【注册产品标准编号注册产品标准编号】】
【说明书批准及修改日期说明书批准及修改日期】】
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