一．糖、醇发酵试验
1.糖、醇发酵试验
原理：各种细菌因含有发酵不同糖、醇的酶，所以分解糖、醇的能力个不一样。有的能分解某些糖、醇类，有的那么不能分解。有的分解某些糖、醇类发酵产酸产气，有的仅产酸，而不产气。根据这些特点，可鉴别细菌。 培养基：糖发酵试验应用的培养基种类很多，大致可分为液体，半固体，固体〔高层、斜面〕等几类。可根据试验的要求和细菌的特性来选择。 2.乙酰甲基甲醇试验〔V-P试验〕
原理：某些细菌如产气杆菌，分解葡萄糖产生丙酮酸，并将丙酮酸脱羧，变为乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在碱性环境下，被空气中的氧氧化成二乙酰，二乙酰与培养基内蛋白胨中精氨酸所含的胍基起作用，生成红的化合物。故在培养基中参加少量含胍基的化合物，如肌酸、肌酐可增加胍基含量。试验中参加的α-萘酚为催化剂，可加速此反响，使反响颜增加，提高反响的敏感性。大肠埃希菌不能将丙酮酸脱羧，故V-P试验呈阴性。 培养基：磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基
3.甲基红试验〔MR试验〕
原理：许多细菌如大肠埃希菌等，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸再次被分解，产生甲酸、乙酸、乳酸等，这样使培养基的PH降至4.5以下。这时参加甲基红指示剂呈红。假设细菌分解葡萄糖产酸量少，或产生的酸进一步转化为其他物质〔如醇、酮、醛、气体和水等〕，那么培养基的酸度仍在PH6.2以上，故参加甲基红指示剂呈黄，为阴性反响。
培养基：磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基
MUG葡萄糖醛酸苷酶试验
原理：细菌的葡萄糖醛酸苷酶在碱性条件下，作用于4-甲基伞形酮-β-D葡萄糖醛酸甘〔4-Methylumbelliferyl-β-D-glucuronide简称MUG〕的β葡萄糖醛酸甘键，使其水解，释放的4-甲基伞形酮在366nm紫外灯下产生蓝白荧光。
培养基：MUG培养基
4.β-半乳糖苷酶试验
原理：肠杆菌科细菌发酵乳糖，依靠半乳糖苷渗透酶和β-半乳糖苷酶两种不同的酶作用，能水解邻硝酸酚-β-D半乳糖苷〔O-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside,ONPG〕，而释放出黄
的邻硝酸酚。发酵乳糖的细菌具有上述两种酶，可迅速分解乳糖。缓慢发酵乳糖的细菌只有β-半乳糖苷酶，而缺少半乳糖苷渗透酶或是其活性很弱，不能将乳糖很快运送到菌细胞内，通常需要延长培养时间数天，乳糖才被分解。本实验主要鉴别肠道细菌，乳糖发酵及乳糖缓慢发酵菌为阳性反响，非乳糖发酵酶为阴性。本试验可作为缓慢发酵乳糖的细菌的快速鉴定方法。
5.葡萄糖氧化-发酵〔O/F〕试验
原理：细菌对糖的代谢分为氧化型和发酵型两种。在有氧环境下氧化完全，生成二氧化碳和水。在无氧环境下，进展不完全的分解〔发酵〕，生成酸类、醇类和气体。氧化型的细菌在无氧环境中，不能分解糖。发酵型的细菌无论在有氧或是无氧的环境中均可分解糖。葡萄糖氧化-发酵试验有助于假单胞菌、硝酸盐阴性杆菌、粪产碱杆菌的鉴别。
培养基：氧化发酵试验培养基
6.石蕊牛乳试验
原理：牛乳中含有大量的乳糖和酪蛋白，营养丰富，一般细菌均能在其生长，但各种细菌对这些物质
的分解能力不同，可观察的反响也不同，在培养基中参加石蕊是作为酸碱指示剂和氧化复原指示剂，可观察到不同的反响结果。
产气荚膜梭菌对牛乳具有强烈的发酵反响，产酸、产气、凝固、胨化几乎同时发生。所产生的气体，可将培养基表层的凡士林冲至管口，牛乳可全被胨化变清，这种“暴风雨〞样的发酵现象称为“汹涌发酵〞，为该菌所特有。乳链球菌可使牛乳培养基产酸、凝固，并可使石蕊复原。斩杀图纸
培养基：石蕊牛乳培养基
霍顿二．氨基酸和蛋白质代谢试验
1.靛基质试验
原理：某些细菌，如大肠埃希菌、变形杆菌等，能分解培养基蛋白胨中的氨酸，形成靛基质〔吲哚〕。靛基质无，与试剂对二甲氨基苯甲醛作用后，形成红化合物-玫瑰靛基质。本试验常用于肠杆菌科种属鉴别，大肠埃希菌98%为阳性反响，肺炎克雷伯菌、沙门菌为阴性反响。
培养基：胰蛋白胨水培养基
2.硫化氢产生试验
原理：检查肠杆菌科娥硫化氢试验，是利用细菌对于培养基中硫代硫酸钠或硫酸钠、亚硫酸
钠的复原作用，生成硫化氢。硫化氢是无气体，遇硫酸亚铁或枸橼酸铁铵，产生不溶性黑沉淀物硫化亚铁。
按此原理设计的硫化氢试验，适用于肠杆菌科细菌的鉴定。沙门菌，弗劳地枸橼酸杆菌，缓慢爱德华菌，莱克勒菌属和变形杆菌属为阳性反响，其他细菌均为阴性反响。在沙门菌属中，亦有硫化氢阴性的菌型，如甲型副伤寒、仙台、猪沙门菌等，伤寒沙门菌中亦有局部菌株为硫化氢阴性。
培养基：三糖铁琼脂或克氏双糖铁琼脂培养基。
3.尿素酶试验
原理：某些细菌，如变形杆菌具有尿素酶，能分解培养基中的尿素而产生大量的氨，使培养基成碱性，培养基中的酚红指示剂呈红。
本试验常用语鉴别变形杆菌属。变形杆菌属能分解尿素呈阳性反响，其他肠道细菌的尿素酶试验多数为阴性反响。
培养基：尿素培养基
4.明胶液化试验
原理：明胶是一种胶原蛋白，不具有一般蛋白质加热凝固的特性，其水溶液在24摄氏度以下为凝胶状态。明胶可被细菌的胶原酶分解为氨基酸，分解后的明胶，凝固力降低，低于20摄氏度不再凝固，呈液化状态。
本试验为细菌鉴定的常规实验法。铜绿假单胞菌，荧光假单胞菌，腐败假单胞菌等为阳性反响，肠杆菌科细菌很少液化明胶。
培养基：明胶培养基。
DRS
5.氨基酸脱羧酶试验
原理：细菌分解氨基酸使其脱羧，生成胺和二氧化碳，此为脱羧反响，需要细菌所产生的脱羧酶完成反响。各种细菌产生的脱羧酶不同，对各种氨基酸底物所产生的胺亦不一样，但均可使培养基变碱，由培养基中的指示剂显示出来。
大型纺织厂培养基：氨基酸脱羧酶培养基
6.精氨酸双水解酶试验
原理：细菌分解精氨酸产碱不限于精氨酸脱羧酶。精氨酸可通过精氨酸脱酰胺酶及瓜氨酸酶，经两次水解，先生成瓜氨酸和氨，后形成鸟氨酸、氨及二氧化碳。鸟氨酸又在鸟氨酸脱羧酶的作用下生成腐胺及二氧化碳。
氨和腐氨均为碱性，由培养基中的指示剂显示出来。
培养基：含精氨酸的氨基酸脱羧酶培养基或用Thomley精氨酸培养基，后者常用于假单胞菌属鉴定。
7.苯丙氨酸脱氨酶试验
原理：变形杆菌属可产生苯丙氨酸脱氨酶，使苯丙氨酸脱去氨基，形成苯丙酮酸，参加三氯化铁试剂后产生绿反响。
本试验主要用于肠杆菌科细菌鉴定，变形杆菌属均为强阳性反响，而肠杆菌科其他细菌那么为阴性反响。
培养基：苯丙氨酸琼脂培养基。
三．碳源和氨源利用试验
1.枸橼酸盐利用试验
原理：枸橼酸盐培养基是一综合性培养基，其中枸橼酸钠为碳的唯一来源，磷酸二氢铵为氮的唯一来源。有的细菌如产气肠杆菌等，可以利用枸橼酸盐作为碳源，能在此培养基上生长，并且分解枸橼酸盐而最后产生碳酸盐，使培养基变为碱性。这样培养基中的溴麝香草酚蓝指示剂由绿变为蓝，为枸橼酸盐利用实验的阳性反响。假设细菌不能利用枸橼酸盐作为碳源，那么在此培养基上不能生长，培养基不变，为枸橼酸盐利用实验的阴性反响。
本试验主要用于肠杆菌科细菌鉴定，大肠埃希菌、志贺菌属、爱德华均属和耶尔森菌属均为阴性，沙门菌属，克雷伯均属，枸橼酸杆菌和魔秀变形杆菌通常为阳性反响。此外，铜绿假单胞菌、洋葱假单胞菌和嗜水气单胞菌亦为阳性。
培养基：西蒙枸橼酸盐培养基
中国盐业协会
2.丙二酸盐利用实验
原理：当细菌利用丙二酸盐作为唯一碳源时，丙二酸钠可被分解成碳酸钠，使培养基变碱。沙门菌亚属ⅡⅢ及肺炎克雷伯菌为阳性反响，枸橼酸杆菌属、肠杆菌属和哈夫尼亚菌属有不用生物型反响，其他各菌属为阴性反响。
培养基：丙二酸钠培养基。
湖北省经济管理干部学院
3.其他有机酸盐利用试验
原理：酒石酸受细菌酶的作用，可分解为乙酸，草酸等比拟简单的有机酸。枸橼酸经细菌酶的作用进入三羧酸循环被分解为琥珀酸、乳酸、乙酸等。这些有机酸的生成，使培养基的PH值下降，这可由培养基中的指示剂变化显示出来。同时未分解的酒石酸和枸橼酸可与参
加的醋酸铅试剂形成铅盐沉淀，故可判断反响程度。
细菌的酒石酸分解酶对各种酒石酸光学异构体的分解具有特异性，故可用于细菌的鉴别，此外，粘液酸经分解后也可形成简单的有机酸，亦可由PH降低时指示剂颜变化进展判断。本试验用于肠杆菌科细菌鉴别。沙门菌属大局部菌属的右旋酒石酸盐利用试验为阳性，志贺菌属为阴性，沙门菌属对左旋酒石酸盐有不同反响，其他菌属均为阴性，不分解粘液酸的只有志贺菌属。
培养基：有机酸盐培养基
四．酶类试验
1.氧化酶试验
原理：某些细菌如奈瑟球菌和铜绿假单胞菌，具有氧化酶，能将盐酸二甲基对苯二胺四甲基对二胺试剂氧化成红的醌类化合物。
2.细胞素氧化酶试验
原理：某些细菌如铜绿假单胞菌，具有细胞素氧化酶，在有分子氧存在的情况下，将试剂盐酸二甲基对苯二胺氧化，并与α-萘酚生成吲哚芬蓝，而出现蓝。次试验常与氧化酶同时进展。
3.触酶试验〔过氧化氢酶试验〕
原理：细胞代谢产生的过氧化氢对细菌细胞有毒，而细胞内的过氧化氢酶能催化过氧化氢，使其分解为分子态氧和水，使其解毒。在含有过氧化氢酶的细菌培养物上滴加过氧化氢溶液后，立即产生大量气泡，为阴性反响。绝大多数细菌的琼脂培养物均产生过氧化氢酶，但链球菌属为阳性，故用于鉴别葡萄球菌、微球菌〔阳性〕与链球菌。乳酸菌及梭菌为阴性。
4.硝酸盐复原试验
原理：某些细菌如肠道杆菌，能复原培养基中的硝酸盐为亚硝酸盐，亚硝酸盐与试剂中的醋酸作用，生成亚硝酸，亚硝酸与试剂中的对氨基苯磺酸作用生成重氮苯磺酸，在与试剂中的α－萘酚结合成N－α－萘酚偶氮苯磺酸〔红〕。本实验在细菌鉴定中广泛使用，肠杆菌科均为阳性反响。
培养基：硝酸盐培养基
5.硝酸盐复原产气试验
原理：有些细菌可将硝酸盐复原成亚硝酸盐，并将亚硝酸盐分解成氮气，观察有无产气现象，即为亚硝酸盐复原产期试验。本试验常用于鉴别铜绿假单胞菌和其他假单胞菌，前者为阳性
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