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抗生素效价

用管碟法（2.2）法，测定链霉素活菌剂的效价，估计效价为1 000 000 u/g，供试品最终浓度为1.4u/ml及0.7u/ml。
链霉素的效价测定
                        抗生素微生物检定法
  本法系在适宜条件下，根据量反应平行线原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效性）的方法。
  抗生素微生物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。
  测定结果经计算所得的效价，如低于估计效价的90%或高于估计效价的110%时，应调整其估计效价，重新试验。
  除另有规定外，本法的可信限率不 得大于5%。
                              第一法  管碟法
  本法系利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。
                              菌悬液的制备
枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）悬液
  取枯草芽孢杆菌［CMCC（B） 63501］的营养琼脂斜面培养物，接种于盛有营养琼脂培养基的培养瓶中，在35～37℃培养7日，用革兰氏染法涂片镜检，应有芽孢85％以上。用灭菌水将芽孢洗下，在65℃加热30分钟，备用。
短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)悬液　
取短小芽孢杆菌［CMCC(B)63202］的营养琼脂斜面培养物，照上述方法制备。                                       
金黄葡萄球菌（Staphylococcus aureus）悬液 
取金黄葡萄球菌［CMCC（B）26003］的营养琼脂斜面培养物,接种于营养琼脂斜面上，
在35～37℃培养20～22小时。临用时，用灭菌水或0.9％灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下，备用。
藤黄微球菌（Micrococcus luteus）悬液 
取藤黄微球菌［CMCC（B）28001］的营养琼脂斜面培养物，接种于盛有营养琼脂培养基的培养瓶中，在26～27℃培养24小时，或采用适当方法制备的菌斜面,用培养基Ⅲ或0.9％灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下，备用。
大肠杆菌（Escherichia coli）悬液 
取大肠杆菌［CMCC（B）44103］的营养琼脂斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上，在35～37℃培养20～22小时。临用时，用灭菌水将菌苔洗下，备用。                                                             
啤酒酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）悬液 
取啤酒酵母菌（ATCC  9763）的Ｖ号培养基琼脂斜面培养物，接种于Ⅳ号培养基琼脂斜面
上。在32～35℃培养24小时，用灭菌水将菌苔洗下置含有灭菌玻璃珠的试管中，振摇均匀，备用。
肺炎克雷伯氏菌（Klebosiella Pneumoniae）悬液 
取肺炎克雷伯氏菌[CMCC（B）46117]的营养琼脂斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上，在35～37℃培养20～22小时。临用时，用灭菌水将菌苔洗下，备用。
支气管炎博德特菌（Bordetella  Bronchiseptica）悬液 
取支气管炎博德特菌［CMCC（B）58 403］的营养琼脂斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上，在32~35℃培养24小时。临用时，用灭菌水将菌苔洗下，备用。
标准品溶液的制备 
标准品的使用和保存，应照标准品说明书的规定。临用时照表1的规定进行稀释。标准品的品种、分子式及理论计算值见表2。                                         
供试品溶液的制备  精密称（或量）取供试品适量，用各品种项下规定的溶剂溶解后，再按
估计效价或标示量照表1的规定稀释至与标准品相当的浓度。       
双碟的制备 
取直径约90mm、高16～17mm的平底双碟，分别注入加热融化的培养基（照表 1）20ml，使在碟底内均匀摊布，放置水平台上使凝固，作为底层。另取培养基适量加热融化后，放冷至48～50℃（芽孢可至60℃），
加入规定的试验菌悬液适量（能得清晰的抑菌圈为度。二剂量法标准品溶液的高浓度所致的抑菌圈直径在18～22mm，三剂量法标准品溶液的中心浓度所致的抑菌圈直径在15～18mm），摇匀,在每1双碟中分别加入5ml，使在底层上均匀摊布，作为菌层。放置水平台上冷却后，在每1双碟中以等距离均匀安置不锈钢小管（内径6.0mm±0.1mm，高10.0mm±0.1mm，外径7.8mm±0.1mm）4个（二剂量法）或6个（三剂量法），用陶瓦圆盖覆盖备用。                         
检定法                                                         
二剂量法  取照上述方法制备的双碟不得少于4个,在每1双碟中对角的2个不锈钢小管中分别
滴装高浓度及低浓度的标准品溶液,其余2个小管中分别滴装相应的高低两种浓度的供试品溶液；高、低浓度的剂距为2:1或4:1。在规定条件下培养后，测量各个抑菌圈的直径（或面积），照生物检定统计法（附录ⅩⅣ）中的（2.2 ）法进行可靠性测验及效价计算。         
三剂量法  取照上述方法制备的双碟不得少于6个,在每1双碟中间隔的3个不锈钢小管中分别滴装高浓度(S<[3]>)、中浓度(S<[2]>)及低浓度(S<[1]>)的标准品溶液，其余3个小管分别滴装相应的高、中、低三种浓度的供试品溶液；三种浓度的剂距为1∶0.8。在规定条件下培养后，测量各个抑菌圈的直径(或面积)，照生物检定统计法(附录ⅩⅣ)中的(3.3)法进行可靠性测验及效价计算。           
                                    第二法  浊度法
  本法系利用抗生素在液体培养基中对试验菌生长的抑制作用，通过测定培养后细菌浊度值的大小，比较标准品与供试品对试验菌生长抑制的程度，以测定供试品效价的一种方法。
                                        菌悬液制备 
金黄葡萄球菌（Staphylococcus  aureus)悬液 
取金黄葡萄球菌［CMCC（B）26 003］的营养琼脂斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上，在35~37℃培养20~22小时。临用时，用灭菌水或0.9%灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下，备用。 
大肠杆菌（Escherichia  coli）悬液
  取大肠杆菌［CMCC（B）44  103］的营养琼脂斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上，在35~37℃培养20~22小时。临用时，用灭菌水将菌苔洗下，备用。
白念株菌（Candida albicans)悬液
取白念株菌［CMCC（F）98  001］的改良马丁琼脂斜面的新鲜培养物，接种于10mlIX号培养基中，置35~37℃培养8小时，再用IX号培养基稀释至适宜浓度，备用。
标准品溶液的制备    标准品的使用和保存，应照标准品说明书的规定。临用时照表3的规定进行稀释。标准品的品种、分子式及理论计算值见表2。
供试品溶液的制备    精密称（或量）取供试品适量，用各品种项下规定的溶剂溶解后，再按估计效价或标示量照表3的规定稀释至标准品相当的程度。
含试验菌液体培养基的制备  临用前，取规定的试验菌悬液适量（35~37℃培养3~4小时后测定的吸光值在0.3~0.7之间，且剂距为2的相邻剂量间的吸光度差值不小于0.1），加入到各规定的液体培养基中，混合，使在试验条件下能得到满意的剂量-反应关系和适宜的测定浊度。
  已接种试验菌的液体培养基应立即使用。
                               
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表1  抗生素微生物检定试验设计表
抗生素类别
试验菌
培养基
灭菌缓
冲液PH
抗生素浓度
范围（u/ml）
培养条件
编号
PH
温度 ℃
时间/h
链霉素
枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63501]
Ⅰ
7.8～8.0
7.8
0.6～1.6
35～37
14～16
卡那霉素
枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63502]
Ⅰ
7.8～8.0
7.8
0.9～4.5
35～37
14～16
阿米卡星
枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63503]
Ⅰ
7.8～8.0
7.8
0.9～4.5
35～37
14～16
巴龙霉素
枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63504]
Ⅰ
7.8～8.0
7.8
0.9～4.5
35～37
14～16
核糖霉素
枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63505]
Ⅰ
7.8～8.0第一首七言诗
7.8
2.0～12.0
关于加强基层工会经费收支管理的通知35～37
14～16
卷曲霉素
枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63506]
Ⅰ
7.8～8.0
7.8
10.0～40.0
35～37
14～16
璜苄西林
枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63507]
Ⅰ
6.5～6.6
6.0
5.0～10.0
35～37
14～16
去甲万
古霉素
枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63501]
Ⅷ
6.0
6.0
9.0～43.7
35～37
14～16
庆大霉素
短小芽孢杆菌[CMCC(B) 63202]
Ⅰ
7.8～8.0
7.8
2.0～12.0
35～37
14～16
红霉素
短小芽孢杆菌[CMCC(B) 63202]
Ⅰ
7.8～8.0
7.8
5.0～20.0
35～37
14～16
新霉素
金黄葡萄球菌[CMCC(B)26003]
Ⅱ
7.8～8.0
7.8
4.0～25.0
35～37
14～16
四环素
藤黄微球菌[CMCC(B) 28001]
Ⅱ
6.5～6.6
6.0
10.0～40.0
35～37
16～18
土霉素 
藤黄微球菌[CMCC(B) 28001]
Ⅱ
6.5～6.6
6.0
  10.0～40.0
35～37
16～18
金霉素
藤黄微球菌[CMCC(B) 28001]
Ⅱ
6.5～6.6
6.0
4.0～25.0
35～37
16～18
氯霉素
藤黄微球菌[CMCC(B) 28001]
Ⅱ
6.5～6.6
6.0
30.0～80.0
35～37
16～18
杆菌肽
藤黄微球菌[CMCC(B) 28001]
Ⅱ
6.5～6.6
6.0
2.0～12.0
35～37
16～18
黏菌素
大肠杆菌[CMCC(B) 44103]
Ⅵ
7.2～7.4
6.0
614～2344
35～37
16～18
两性霉素B ①
啤酒酵母菌 (ATCC  9763)
Ⅳ
6.0～6.2
10.5
  0.5～2.0
35～37
24～36
奈替米星
短小芽孢杆菌[CMCC(B) 63202]
Ⅰ
7.8～8.0
7.8
5～20 
35～37
14～16
西索米星
短小芽孢杆菌[CMCC(B) 63202]
Ⅰ
7.8～8.0
7.8
5～20 
35～37
14～16
阿奇霉素
短小芽孢杆菌[CMCC(B) 63202]
Ⅰ
7.8～8.0
7.8
0.5～20 
35～37
16～18
磷霉素
藤黄微球菌[CMCC(B) 28001]
Ⅱ
7.8～8.0
7.8
5～20 
35～37
18～24
乙酰螺
旋霉素②
枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63504]
Ⅱ
8.0～8.2
竟拍网
7.8
5～40 
35～37
14～高速行式打印机16
妥布霉素 
枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63504]
Ⅰ
7.8～8.0
7.8
1～4
35～37
14～16
罗红霉素
枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63504]
Ⅱ
7.8～8.0
7.8
5～10
35～37
16～18
克拉霉素
短小芽孢杆菌[CMCC(B) 63202]
Ⅰ
7.8～8.0
7.8
2.0～8.0
35～37
14～16
盐酸大观
霉素
克雷伯肺炎杆菌[CMCC(B)46117]
Ⅱ
7.8～8.0
7.0
50～200
35～37
16～18
吉他霉素
枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63504]
Ⅱ
8.0～8.2
7.8
20~40
35～37
16～18
麦白霉素
枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63504]
营养琼
8.0～8.2
7.8
5~40
35～37
16～18
小诺霉素
枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63504]
Ⅰ
7.8～8.0
7.8
0.5~2.0
35～37
14～16
多黏菌素B
支气管炎博德特菌
多黏菌素B  
6.5~6.7
6.0
4~25
35～37
16～18
        ① 两性霉素B双碟的制备，用菌层15ml代替两层。
        ② 乙酰螺旋霉素。抗Ⅱ检定培养基，调节pH值使灭菌后为8.0～8.2。
        ③ 含3％氯化钠。
        ④ 加0.3%葡萄糖。

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