摘要:依次采用硫酸铵分级沉淀、离子交换层析和凝胶过滤层析法从鲶鱼体表黏液中分离纯化IgM,并对其抑菌活性进行了检测。通过试验可以得出,凝胶层析的最佳分离条件为:0.02 mol/L pH 8.0的Tris-HCl缓冲液、洗脱速度为双氧水碘化钾0.3 mL/min。鲶鱼体表黏液中提取的IgM对大肠杆菌抑菌作用最强,其次是枯草芽孢杆菌,对藤黄微球菌抑菌效果最不明显。在低温贮存时温度控制在0~4 ℃,有助于保持其抑菌活性,但随着时间的延长,抑菌活性也会逐渐减弱。
性描写关键词:鲶鱼;体表黏液;IgM;分离纯化;抑菌活性
免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)能凝集细菌,中和病毒,并能在体内其他因素的参与下彻底杀死细菌和病毒,增强机体的免疫功能[1]。免疫球蛋白可用于食品的防腐保鲜,食品中病原菌、有毒成分和功能性成分的快速检测等[2]。国内外对鱼类免疫球蛋白的研究较多[3-6],但关于鱼类黏液中免疫球蛋白抑菌活性方面的研究却很少。本试验对鲶鱼体表黏液中的IgM进行分离纯化,并对其抑菌活性进行了研究。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
鲶鱼取自天津市西青区杨柳青渔场。
SephadexG-200,Pharmacia公司产品;ELISA试剂盒,美国Adlitteram Diagnostic Laboratories公司产品;营养琼脂、牛肉膏、氯化钠、蛋白胨购自天津翔天科技有限公司;大肠杆菌(Escherichia coli传播与文化产业)、枯草芽孢杆菌(网Bacillus subtilis)、藤黄微球菌(Micrococcus luteus)均由天津农学院基础部微生物实验室提供。
1.2 狸御殿方法
1.2.1 鲶鱼体表黏液诸病源候论IgM的分离纯化 将鲶鱼皮用蒸馏水浸泡一段时间,搅拌,取上清液,用纱布将上清液过滤,去除较大的杂质,备用。取黏液后采用硫酸铵分级沉淀进行粗分离,然后再采用离子交换层析进一步分离纯化[7]。