ITS2序列鉴定临床分离丝状真菌

ITS2序列鉴定临床分离丝状真菌
作者：吴奎海　马均宝　崔东岚
来源：《中国保健营养·中旬刊》2013克疣淋年第11期

【摘要】目的：建立以ITS2为靶序列鉴定临床分离丝状真菌的分子生物诊断方法。方法：利用通用引物扩增真菌核糖体转录间隔区2铝矿石（ITS2），对PCR产物进行测序，在GenBank中对测序结果进行Blastn等分析。结果：9株真菌测序结果与表型鉴定符合，鉴定出7株临床分离丝状真菌。结论：ITS2测序可以作为临床丝状真菌的分子生物学诊断方法之一。巴尔扎克和他的老师

【关键词】丝状真菌；内部转录间隔区；测序

【中图分类号】R446.5 【文献标识码】A 【文章编号】1004—7484（2013）11—0043—02

随着免疫抑制剂、广谱抗生素的广泛应用以及临床侵入性诊疗技术的广泛开展，临床深部真菌感染病例增多，尤其是丝状真菌引起的感染，对该类疾病的早期诊断对抗真菌效

果相当关键[1]。丝状真菌采用传统的形态学检查，需要丰富的经验，而且耗时较长，不利于临床的快速、准确诊断。随着分子生物学技术的飞速发展，人们发现真菌的5.8S rRNA基因和28S rRNA基因具有保守序列，它们之间的ITS2序列为可变区，具有属种差异[2]。本研究建立以ITS2为靶序列鉴定临床分离丝状真菌的分子生物诊断方法。

1 材料和方法

网睡

1.1真菌菌株第二条线索本院微生物室和皮肤科实验室保存的真菌菌株，包括白念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌、光滑念珠菌、烟曲霉菌、黄曲霉菌、黑曲霉菌、新生隐球菌。阴性对照为鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、金黄葡萄球菌、结核分枝杆菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、人类血细胞基因组。

1.2 临床分离丝状真菌临床分离7株丝状真菌，标本来源分别是血液3例、眼分泌物2例、耳道脓液2例。

1.3 DNA模板制备真菌菌株的DNA提取采用TaKaRa公司试剂盒（Lysis Buffer for Microorganism to Direct PCR）提取。具体步骤如下：①50μl Lysis Buffer for Microorgani