一、实验目的上海电子口岸
①了解过氧化氢酶试验的反应原理和用途。
③通过对淀粉酶和过氧化氢酶的定性测定,加深对酶和酶促反应的感性认识。
二、实验原理
酶是微生物机体内生物合成的一种生物催化剂,它是高分子蛋白质,具有催化生物化学反应加速进行,并具有传递电子、原子和化学基团的作用。微生物的酶按它所在细胞的部位分为胞外酶、胞内酶及表面酶。本实验对胞外酶中的两种即淀粉酶和过氧化氢酶武警学院(亦叫接触酶)进行定性测定。
细菌淀粉酶能将遇碘呈蓝的淀粉水解为遇碘不显的糊精,并进一步转化为糖,淀粉被酶催化分解后用碘检测不到其变现象;过氧化氢酶能将过氧化氢快速分解为水和氧气,能用肉眼很容易的观测到产生的气泡。
三、实验仪器和试剂
①试管(15mm-150mm)5支、试管架1个、培养皿(90mm)3套、接种环。
②肉膏胨淀粉琼脂培养基(1L) : 蛋白胨 10g、Nacl 5g、牛肉膏 5g、 可溶性淀粉 2g、 琼脂 15g钝化膜、 蒸馏水定容到1000ml 121℃ 灭菌20min。
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③4%淀粉溶液1滴瓶:4g可溶性淀粉加水至100ml
④革氏碘液1滴瓶:碘1g、KI 2g、蒸馏水300ml (将I与KI先行混合,加入蒸馏水少许充 分振摇,待完全溶解后,再加蒸馏水至300ml遥感学报。
⑤9%过氧化氢1滴瓶:30%过氧化氢 30ml 蒸馏水 70ml
⑥枯草杆菌和大肠杆菌斜面各一支。
⑦活性污泥
四、实验方法
(一)生活污水活性污泥混合液中淀粉酶的测定
①取3支干净的试管,按1、2、3对照编号。放在试管架上备用。
②在1号、2号试管内分别加入 5ml远程医疗系统、10ml的活性污泥混合液,再在1号和2号试管中分别加10 ml和5 ml蒸馏水。在对照管内加15 ml蒸馏水。
③在1号、2号、3号及对照管中分别加入4%的淀粉液4滴(淀粉液的用量,在做预备实验时根据样品中淀粉酶含量多少而定),迅速摇匀并记下反应的初始时间。
④在上述3个管内分别加4滴碘液(碘液用量在预备实验时酌定),迅速摇匀,这时各管均呈蓝。