第三章噬菌体载体
一、 填空
1．噬菌体之所以被选为基因工程载体，主要有两方面的原因：一是―-----------―；二是----------――。
2.首次报道的完整测序的单链DNA噬菌体是фX174，含有5386个碱基对的DNA和一个基因，是一个环状DNA分子。基因组的最大特征是----------------。三讲一落实
3．λ噬菌体的基因组dna为―――――――kb，有――多个基因。在体内，它有两种复制方式，扩增时(早期复制)按―-----―复制，成熟包装(晚期复制)则是按―--------―复制。它有一个复制起点，进行―-------―向复制。λ噬菌体的dna既可以以线性存在又可以环状形式存在，并且能够自然成环。其原因主要是在λ噬菌体线性dna分子的两端各有一个――个碱基组成的天然黏性末端。这种黏性末端可以自然成环。成环后的黏性末端部位就叫做――――――位点。 4.根据噬菌体的包装能力，将噬菌体基因组DNA转化为野生型λ插入载体。该载体的最小分子量约为――KB，插入的最大外源片段不超过――KB。
5．野生型的m13不适合用作基因工程载体，主要原因是――――和--------------―。
6.Cosmid是一种质粒噬菌体杂合载体。它的复制子来自---，cos位点序列来自---，最大的克隆片段达到----KB。
7．有两类改造型的λ噬菌体载体，即插入型和取代型。从酶切点看，插入型为――个，取代型为――个。
8.野生型λ噬菌体DNA不应被用作基因工程载体，原因如下：（1）-----（2）-----（3）------。
9．m13单链噬菌体的复制分为三个阶段：(1)――――――――(2)―-------------―，(3)―――――――――――。萤火虫祖先被发现
10.噬菌体颗粒由质粒和噬菌体DNA组成，其中质粒的主要结构是---------，而噬菌体的主要结构是---------。
11．m13单链噬菌体基因2和基因4之间的ig区有三个最重要的功能，即(1)―――――(2)―------------―(3)―-------------―。
陶银利 12.野生型M13有10个基因，分为三个功能组，其中与复制有关的两个基因分别为-----------和--------------。
13．以丸噬菌体载体和黏粒载体构建文库时，起始dna的长度是不同的，前者为―----―kb，后者为――――kb。
14.λ由于包装的限制，插入外源DNA片段后的噬菌体载体总长度应在噬菌体基因组的-----------------范围内。2、 判断问题
1．取代型载体(replacementvector)是指同一种限制性内切核酸酶在λdna中具有两个切点。外源dna通过取代这两个切点问的片段被克隆。 2.目前最常用的PUC载体是pucl8，它具有分子量小、多克隆位点和易于选择的分子标记，是一种轻松复制的载体。此外，该载体还可以在辅助质粒的帮助下合成单链DNA。
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建筑速写技法 3．噬菌粒(phagemid)pucll8／pucll9载体是集质粒和丝状噬菌体有利特征于一身的载体，既能合成单链dna,又能合成双链dna。
4.λ成熟前噬菌体DNA和M13单链噬菌体DNA的复制采用滚环模型。5.每一代M13噬菌体裂解宿主后，可释放100个后代噬菌体。
6．以黏粒为载体的重组体虽然在平板上生长的速度不同，但是转化子中插入片段的扩增量是相同的。三、选择题(单选或多选)
1.限制性内切酶EcoRI在野生型颗粒噬菌体DNA中有五个裂解点，hind III有七个裂解点，BamHI也有五个裂解点。这些酶消化位点的数量主要通过（）（a）体内突变（b）完全酶消化进行调整
(c)部分酶切(d)先用甲基化酶修饰后再酶切
2.Pbluescriptml3载体在多克隆位点的两侧引入T7和T3噬菌体启动子，这增加了载体的功能，例如：
(a)可以对插入到多克隆位点的外源片段进行转录分析(b)利用这两个启动子的通用引物进行pcr扩增(c)利用通用引物进行序列分析(d)利用这两个启动子进行定点突变上述四种功能中哪一种是不正确的?()
3.以下关于细菌人工染体（BAC）特征的描述是正确的，除了（）。（a） 电刺激法将大质粒转化大肠杆菌的转化率比酵母高10～100倍。（b） BAC载体在细菌中以环状超螺旋状态存在，使分离操作相对容易。（c） BAC载体在大肠杆菌宿主中保持高拷贝
(d)克隆到bac载体上的外源片段可以直接进行测序以获得末端序列
4.用粘土颗粒转染受体细菌后，在平板上生长的菌落将具有不同的大小和生长速率。原因是（）
(a)营养成分不足
（b） 重组质粒的复制不稳定
(c)重组后的黏粒整合到宿主染体上(d)重组体中插入片段的大小不同
5.M13k07是一种辅助噬菌体DNA，可用于帮助噬菌体颗粒制备单链DNA。这是因为（）（a）m13k07可以滚环复制并获得大量单链噬菌体DNA（b）m13k07可以提供成熟包装蛋白（c）m13k07提供成熟包装所需的信号（d）m13k07的所有10个基因都是正常的
6．黏粒(cosmid)是一种人工建造的载体，()(a)它具有cos位点，因而可进行体外包装(b)它具有质粒dna的复制特性(c)进入受体细胞后，可引起裂解反应(d)进入受体细胞后，可引起溶源化反应
7.Mu噬菌体也是一种转座因子。这种转座因子（）（a）能引起宿主突变（b）可用于细胞内基因工程（c）有转座酶基因（d）
8.关于m13的ig区，下列说法中哪一项不妥当?()(a)具有正负链的复制起点(b)具有噬菌体dna被包装的信号(c)具有150个碱基的at富集区
（d） 它有八个回文序列，可以形成五个发夹环
小松930e 9．m13噬菌体基因组编码10个基因，在它的成熟过程中起调节作用的蛋白是()(a)gp2蛋白(b)gp5蛋白(c)gp7蛋白(d)gp9蛋白四、简答题
1.在转导过程中，通常需要将受体细菌和供体中生长的噬菌体悬浮液分别放置在选择性培养基上。为什么？
2．如何将野生型的九噬菌体改造成为一个理想的载体?
3.用Sali切割从噬菌体J2中分离的DNA，得到8个片段，分别为1.3,2.8,3.6,5.3,7.4,7.6,8.1和11.4kb。然而，当使用SAI切割从感染宿主细胞分离的J2噬菌体DNA时，仅获得7个片段，分别为1.3、2.8、7.4、7.6、8.1、8.9和11.4kb。你从这些结果中得到了什么信息？4.CI基因正常时，为什么会出现浑浊斑块？异常是清晰的斑块吗？5.λ噬菌体DNA被包装到噬菌体头部的基本条件是什么？为什么？5、 问答
1.为什么野生型的九噬菌体dna不宜作为基因工程载体?2．什么是蓝白斑筛选法?
3.为什么蓝白点筛查法也有假阳性？4.什么是Ci筛选？
5．λ噬菌体载体具有哪些优点与不足?6．什么是m13的ig序列区?有何特点和功能?
7.要将野生型M13转化为基因工程载体，第一步是转化酶消化位点。EcoRI是如何在M13中首次引入的？
8.以置换型λ噬菌体作为载体进行克隆时，为什么说能够形成噬菌体的就就一定是重组体?9．m13系列载体具有那些优缺点？10．黏粒载体具有哪些特点与不足?
11.辅助噬菌体DNA和相应的噬菌体颗粒如何协同工作？
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