路遥说，⼈⽣的道路虽然漫长，但紧要处常常只有⼏步，特别是当⼈年轻的时候。同样的，科研的道路虽然漫长，但决定成就的只有⼏点，特别是做实验时是否谨慎。
影响Sanger测序结果的条件有很多，前⾯已经详细介绍过了单条带稳定的PCR产物的制备，今天为您解析另⼀个关键因素——如何选择测序引物。
测序引物不能等同于PCR扩增引物，需要满⾜以下⼏个条件：湖北省图书馆
⽐较 | 通⽤引物优势显
测序通⽤引物⼀般是根据载体的元件（启动⼦、终⽌⼦等）选择的，例如常见的通⽤引物T7即T7启动⼦，CMV-Forward是由CMV启动⼦设计的，M13F则是根据lac Z基因得来的。现在常说的通⽤引物还包括针对某些载体设计的载体引物，例如根据载体的绿⾊荧光蛋⽩基因设计的载体引物pEGFP-C-3。 测序公司通常会免费提供⼀些常见通⽤引物。这些经过QC验证的引物，质量上有更好的保证。⽤载体的通⽤引物测序，可以监测出⽬的⽚段是否成功克隆到载体中（是否为空载）。考虑到通⽤引物的技术和成本优势，⾦唯智建议您实验中尽可能选⽤通⽤测序引物。
功率因数校正
⼀般情况下，PCR产物（尤其是较短的PCR产物）测序结果不理想时，可以将PCR产物克隆到载体中，⽤载体的通⽤引物测序。特别是当PCR⽚段长度⼩于200bp时，建议您优先选择克隆到载体中测序。
配对 | 载体、位点是关键
通⽤引物只与载体相关，不受⽬的⽚段限制。测序时，不同载体需选择不同的通⽤引物。
某个载体该选⽤什么通⽤引物，可以通过⾦唯智公司官⽹上“服务资源”中的“免费通⽤引物”或者登录⾦唯智在线订单系统中的“通⽤引物选择⼯具”进⾏查询。
中牟黑大蒜⼏种常见载体所使⽤的通⽤引物
除了载体，引物结合位点对通⽤引物的选择也有很⼤影响。由于Sanger测序法的局限性，通常刚开始的50bp-100bp测序不太稳定，通⽤引物不能距离克隆位点太近（建议⼤于50bp），否则有可能会导致部分⽬的⽚段测不出来。因此，T 载体（pMD 18-T载体）的测序通常选择正向引物M13F（-47）和反向引物M13R（-48）⽽不建议选择M13F和M13R。
pMD 18-T载体图谱及相关位点说明干支表
图⽰：M13F和M13R虽然在T载体克隆位点两端也有结合位点，但是距离多克隆位点太近（约30bp），因此对T载体测序通常会选择距离克隆位点约50bp的正向引物M13F（-47）和距离克隆位点约60bp的反向引物M13R（-48）。
关于⾦唯智
散力⾦唯智是专注于基因组研究和基因技术应⽤的⽣物技术公司，提供基因合成、Sanger测序、引物合成、分⼦⽣物学服务、基因组服务、⾼通量测序及GLP标准规范服务，⽴⾜于⽣命科学领域，已成为全球诸多知名跨国公司以及著名⾼等学府的战略合作伙伴和⾸选供应商！
服务质量
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议