I. 处理柱子
1. 加500ul乙腈,1200r/min 离心1min 2. 加500ul盐水,1500 r/min 离心1min
重复步骤2
II. 氨解
3. 将CPG移至96孔尖孔板,用排向每孔加入180ul吲哚乙酸甲胺并盖膜静置10min,2200r/min 离心1min 4. 取出再次盖膜静置10min,3300r/min 离心1min
5. 夹板65度水域加热35min
6. 取出夹板于冷水中浸15min
江阴市卫生局III. 转移
7. 用排向每孔中加入140ulddH2O,cscd
转移上柱,梯度离心4min(850、950、1200、1600各一分钟) 8. 离心后的溶液再次转移上柱,梯度离心4min(850、950、1200、1600各一分钟) IV. 做板(纯化)
9. 加500ul氨水,1500r/min 离心1min
重复此操作
10. 加500ul ddH2华西医科大学O,1500r/min 离心1min
重复此操作
11. 加500ul三氟乙酸,梯度离心5分钟(750 1min、850 1min、960 2min、1600 1min)
12. 加500ul TEAA,1500r/min 离心1min
重复此操作
13. 加500ul ddH2O,1500r/min 离心1min
重复此操作(离心转速改为2600)
V. 打乙腈
14. 换用干净的96深孔板,加入400ul乙腈,梯度离心5min(700、850、960、1200、2500各一分钟)
VI. 做酒沉
15. 加50ul NaAC,再加960ul冰酒精,注意观察溶液的浑浊现象
16. 浊夜转移至新的HAP柱,22 00r/min 离心1min
重复此操作(离心速度改为3500 r/min)
17. 脱洗 加500ul酒精默多克 2600 r/min 离心1min
VII. 打下来
18. 换用新的深孔板,加500ul ddH2O静置20min新疆出血热,2600 r/min 离心1min
19. 盖皮摇匀转至2000停止,测吸光度,取样送交质谱检测。