HAP法纯化引物

HAP纯化引物
I. 处理柱子
1. 500ul乙腈,1200r/min 离心1min
2. 500ul盐水,1500 r/min 离心1min
重复步骤2
II. 氨解
3. CPG移至96孔尖孔板,用排向每孔加入180ul吲哚乙酸甲胺并盖膜静置10min,2200r/min 离心1min
4. 取出再次盖膜静置10min,3300r/min 离心1min
5. 夹板65度水域加热35min
6. 取出夹板于冷水中浸15min
江阴市卫生局III. 转移
7. 用排向每孔中加入140ulddH2O,cscd转移上柱,梯度离心4min(85095012001600各一分钟)
8. 离心后的溶液再次转移上柱,梯度离心4min(85095012001600各一分钟)
IV. 做板(纯化)
9. 500ul氨水,1500r/min 离心1min
重复此操作
10. 500ul ddH2华西医科大学O1500r/min 离心1min
重复此操作
11. 500ul三氟乙酸,梯度离心5分钟(750 1min850 1min960 2min1600 1min
12. 500ul TEAA1500r/min 离心1min
重复此操作
13. 500ul ddH2O1500r/min 离心1min
重复此操作(离心转速改为2600
V. 打乙腈
14. 换用干净的96深孔板,加入400ul乙腈,梯度离心5min(70085096012002500各一分钟)
VI. 做酒沉
15. 50ul NaAC,再加960ul冰酒精,注意观察溶液的浑浊现象
16. 浊夜转移至新的HAP柱,22 00r/min 离心1min
重复此操作(离心速度改为3500 r/min
17. 脱洗  500ul酒精默多克 2600 r/min 离心1min
VII. 打下来
18. 换用新的深孔板,加500ul ddH2O静置20min新疆出血热2600 r/min 离心1min
19. 盖皮摇匀转至2000停止,测吸光度,取样送交质谱检测。

本文发布于:2024-09-23 17:10:46,感谢您对本站的认可!

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标签:离心   盖膜   纯化   梯度   溶液   转移
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