i n lens ofm ice.M ethods M ice w ere l o aded w ith re-stra i n t stress by being fi x ed i n the restraint cage.In add ition,ORAC activity i n lens w as deter m ined w ith auto m a ted m u ltifuncti o na lm icroplate reader.The con-tent of g l u tat h ione(GSH)in lens w as deter m i n ed w ith high perfor m ance li q u i d chro m atog raphy-electroche m-i ca l de tecto r(H PLC-ECD).R esults Restrai n t stress decreased the ORAC activity and GSH content o f the lens co m pared w ith the nor m a lm ice i n a ti m e-depend-ent m anner.Conclusion R estra i n t stress cou l d de-crease the ORAC activ ity and GSH level of the lens, wh ich m i g ht be re l a ted to t h e decrease of free radica l scaveng ing acti v ity and the i n crease o f oxygen radicals i n the lens o fm ice loaded w ith restra i n t stress.
K ey words:restra i n t stress;lens;oxygen rad ica l ab-sorbance capacity(ORAC);g l u tathione(GS H)
5-脂氧合酶抑制剂zileuton对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的保护作用 许琳1，余涓1，刘颖2，陈崇宏2
(福建医科大学1.基础医学院、2.药学院，福建福州350004)
中国图书分类号:R-332;R322181;R345;R743131011; R7431310123;R97713
文献标识码:A文章编号:1001-1978(2006)07-0853-03摘要：目的观察5-脂氧合酶抑制剂zileuton对大鼠局
灶性脑缺血/再灌注损伤的保护作用。方法线栓法阻塞大鼠大脑中动脉2h/再灌注24h，观察zileu t on10、50mg#kg-1对脑梗塞体积、脑组织髓过氧化物酶(M PO)、丙二醛(M DA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NO S)含量的影响。结果zileu t on10、50mg#kg-1均能明显缩小脑梗死灶，降低NOS活性及NO含量，高剂量组亦可降低脑组织M DA含量、增加G S H-PX活性、缓解M PO 升高。结论zileuton对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤有保护作用。 关键词:zil euton；脑缺血/再灌注损伤；脂质过氧化；炎症反应；一氧化氮
5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LO)，是机体催化花生四烯酸(arach i d onic acid,AA)生成生物活性分子白三烯类(leukotrienes,LTs)的关键酶。已有研究表明5-LO基因在沙鼠前脑短暂缺血5m i n再灌注3 m in时表达增强,5-LO合成增多活性增强[1];5-LO 抑制剂AA-861可改善沙鼠全脑短暂缺血/再灌注所致的脑水肿，减轻脑损伤[2]。本研究选用的zileu-
收稿日期:2006-02-25，修回日期:2006-04-29
作者简介：许琳(1979-)，女，硕士生,Te:l0591-********,E-m ai:l xu li n m;
余涓(1959-)，女，副教授，硕士生导师，研究方向：脑
血管疾病的基础研究，通讯作者,Te:l0591-********,E-
m ai:l rofecox i m
ton为高选择性5-LO抑制剂，其既能抑制半胱氨酰白三烯(LTC4、LTD4、LTE4)的生成，又能抑制LTB4的生成[3]，且毒副作用少，国外用于哮喘的预防和长期，其对脑缺血/再灌注损伤(cerebra l ische-m ia reperf u si o n i n j u ry,CI R I)的影响国内外尚未见报道，本实验对此进行了初步研究。
1材料与方法
1.1药品与试剂zileuton(批号:20041012)，北京高盟化工有限公司，无水乙醇助溶，乙醇终浓度< 015%；氯化三苯基四氮唑(2,3,5-tri p heny ltetrazol-i um ch l o ride,TTC)，上海化学试剂公司，磷酸盐缓冲液配制，避光低温贮存；生化试剂盒购自南京建成生物工程研究所；其余试剂均为国产分析纯。
1.2仪器LGR16-W低温高速离心机，北京医用离心机厂;752紫外可见光分光光度计，上海精密科学仪器有限公司；电热恒温水浴锅，北京长安科学仪器厂。
1.3实验动物与分组Sprague-Da w ley大鼠,`，体重(255?20)g，福建医科大学实验动物中心提供(闽实动质准第002-05号)。随机分成假手术组(Sha m operati o n)、溶媒组(Veh icle)、zileu ton10m g #kg-1(Z10)、50m g#kg-1(Z50)组。Sha m组除不插入栓线，其它相同。缺血前2h、再灌注0、5、10h，分别4次灌胃；不同组分别给予等体积溶媒和zileu-ton10、50m g#kg-1。
1.4模型制备线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞(m iddle cerebral artery occl u si o n,MCAO)/再灌注模型，缺血2h，再灌注24h，具体操作参照本课题组以往的报道[4]。动物清醒后出现以左前肢偏瘫为主
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中国药理学通报Chinese P har m acolog ical Bulletin2006Ju;l22(7):853~5
Tab1Effect of zileuton onMDA and G SH-PX,NO,NO S o f the tis sue a t24h reperfusion after2hM CAO i n rats(¸x?s,n=6)
Group M D A/mm ol#g-1Pro GS H-PX/U#g-1Pro NO/L mo l#g-1Pro NOS/ku#g-1#Pro
Sh a m 6.0189?2.849448.5642?8.85227.5606?1.7658 5.4919?1.3201 Veh icle20.2963?10.6502##24.6164?7.4222##26.3350?3.9606##12.9441?2.1470##
Z1015.7418?2.3150##29.3427?6.5793##14.8234?3.9767##**9.0398?2.2807##** Z5011.9607?4.88
82*43.3541?7.9167**$13.1194?3.8416#** 6.6315?1.1564**v #P<0105,##P<0101vs s h a m;*P<0105,**P<0101vs veh icle;v P<0105vs Z10
的神经功能缺失表现为模型成功的标志。
1.5脑梗死体积测定再灌注24h断头取脑，冠状切片,2%TTC染，将染结果摄像输入计算机，用Au to CAD软件求出梗死区域占大脑总体积的百分比作为统计参数。
1.6脑组织中MPO、MDA、GS H-PX、NO、NOS测定取缺血侧脑组织严格按试剂盒说明制成脑组织匀浆，离心取上清，分别测定各指标。
1.7统计学处理采用SPSS1010统计软件分析，实验数据以¸x?s表示。组间比较用单因素方差分析，当方差分析差异有显著性时，进一步q检验作两两比较。
2结果
2.1zileuton对脑梗死体积的影响zileu ton10、50 m g#kg-1可缩小C I RI时脑梗死体积，以50m g# kg-1为最明显。Veh icle组脑梗死灶占脑体积的2819133%?317181%,Z10组为1013348%? 218778%,Z50组为214921%?210138%。两个剂量zileuton组的脑梗死体积均明显小于V ehic le组(P<0101)，且Z50组脑梗死体积明显小于Z10组(P<0101)。
次火山岩2.2zileuton对脑组织MDA含量和GS H-PX活性的影响C I R I后，脑组织MDA含量增高,GS H-PX活性降低;Z50组可降低MDA含量，升高GS H-PX活性。(Tab1)
2.3zileuton对脑组织NO含量和NOS活性的影响与Sha m组比较,Veh icle组NOS活性及NO含量升高，两给药组均能降低NOS活性及NO含量, Z50组效果更明显(T ab1)。第十六届上海电视节
2.4zileuton对脑组织M PO含量的影响V eh i c le 组脑组织M PO活力较Sha m组高,Z50组能缓解这一趋势(Fig1)。
3讨论
近年AA的5-LO代谢通路在神经系统疾病中所起的作用备受关注。K legeris等[5]在人小胶质细胞检测到5-LO和5-脂氧合酶激活蛋白的mRNA，应用zileuton能够抑制小胶质细胞经5-LO代谢通路产生的促炎症产物LTs对神经母细胞瘤细胞的毒性，提示zileuton对神经系统炎症性疾病是有益的。
F ig1Effect of zileuton on the acti v ity ofM PO in brain
tissue a t24h reperfusion after2h MCAO i n rats(¸x?s,n=6)
##P<0101v s sha m;*P<0105vs veh icl e
本实验发现zileuton能明显缩小C I R I后脑梗死体积，并可抑制脑内炎症反应、抗脂质过氧化、缓解NOS升高降低NO含量。探讨如下:①抑制炎症反应：脑缺血区域神经元和胶质细胞5-LO表达增高可催化AA生成大量LTs，其中LTB4是目前发现的最强的趋化因子和化学激动因子，其重要作用之一是增加白细胞表面细胞黏附分子如B2整合素的表达，使白细胞趋化、聚集、黏附于血管内皮细胞并释放氧自由基及溶酶体酶致内皮细胞损伤，使血管通透性增高，血浆渗出，并使白细胞向炎症区聚集，介导脑缺血部位的炎性反应[6~8]。本研究zileuton50mg# kg-1降低脑组织中MPO活力，提示zileuton可通过抑制LTs介导的炎症反应，减少中性粒细胞在组织中的浸润而减轻脑损伤。②抗脂质过氧化:C I R I后5-LO通路活性增加生成大量LTs的同时亦可产生羟自由基(OH#)。脑组织中各种膜相结构含有丰富的多不饱和脂肪酸极易与OH#反应而启动脂质过氧化链式反应，生成一系列脂自由基使细胞膜遭到破坏。同时脑组织炎症区MPO增多可有效催化H2O2与C l-反应生成强氧化剂次氯酸，其可导致脂质过氧化[9,10]。过氧化脂质降解形成的MDA除可导致蛋白质凝集、交联外，亦是判断脂质过氧化的可靠指标。zileuton50m g#kg-1可降低MDA含量，表
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#中国药理学通报Chinese Pharmaco l ogical B ulleti n2006Ju;l22(7)
明zileuton可通过抑制AA代谢的5-LO通路而减少自由基和M PO的大量生成，抑制脑组织脂质过氧化。而GSH-PX作为重要的抗脂质过氧化物酶，能转化脂质过氧化物为无毒代谢产物而阻止自由基链式反应,zileuton50m g#kg-1升高GS H-PX活性，提示zileuton可能有清除自由基的作用，其具体机制有待进一步研究。③缓解NOS升高降低NO含量: NO在缺血性脑损伤中不同的实验条件得出的结果不同[11]。本研究中损伤组NO和NOS均升高，两给药组均能抑制NOS活性，降低NO含量。C I RI后，缺血中心白细胞和巨噬细胞浸润诱导i N OS表达, LTB4刺激产生的I L-1和TNF-A亦可激活i N OS，产生大量具有神经毒性的NO。NO和超氧阴离子反应最终形成OH#和NO2,OH#作为高活性自由基, NO2作为脂质过氧化的有力激动剂而造成脑组织严重损伤。zil e uton可通过抑制LTB4产生，阻断其介导的级联反应而降低NOS活性抑制NO的生成，发挥抗CI R I损伤作用。
总之,zileuton可通过抑制5-LO通路对大鼠局灶性CI R I起保护作用。但5-LO通路作用复杂，需进一步研究探讨其对C I R I的影响途径。
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Protecti ve effect of5-li poxygenase i nhi bitor zileuton on
focal cerebral ische m ia-reperfusion i njury in rats
XU L i n1,YU Juan1,LI U Y ing2,C H EN Chong-hong2
科学研究的艺术(1.Colle ge of Bas icM edical Sciences;2.Colle g e of P har m aceutical Sciences,Fujian M e d ical University,Fuzhou350004,China)
泛光照明
Abst ract:A i m To i n vesti g ate the protective e ffect of zileuton,a5-lipoxygenase inh i b itor,on focal cerebral ische m ia-reperfusion i n j u ry i n rats.M et hods The right m iddle cerebra l artery o f t h e rat w as occ l u ded by i n serti n g a t h read through i n ternal carotid arter y for2 h,and then reperfused for24h.Z ileu ton(10,50mg# kg-1)w as ora lly ad m i n i s tered2h before ische m ia and 0,5,10h after reperfusion.A fter24h reperfusion,the content of m a lond i a l d ehyde(MDA)and nitr i c ox i d e (NO),the acti v ities of g l u tathion per ox i d ase(GS H-PX),m ye l o perox idase(MPO)and nitricox i d e synthase (NOS)w ere m easured.R esults C o mpared w ith veh-i cle group,the i n farct size,content of NO and NOS o f the bra i n were sign ificantly reduced i n10and50mg# kg-1zileuton groups;zil e uton50m g#kg-1also re-duced the con tent of M DA,i n creased t h e activ ity o f GS H-PX,and i n h i b ited t h e i n crease of MPO i n bra i n tissue.Conclusi o n Zileuton possesses t h e neuropro-tective effects on f o cal cerebra l ische m ia-reperfusion i n jury in rats.
K ey words:zileuton;foca l cerebral ische m ia-reperf u-sion i n j u ry;lipid perox idati o n;i n fla mm ati o n;NO
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