GST融合蛋白的表达与纯化原理

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GST 纯化系统是利用GST (glutathione-S-transferase )融合蛋白与固定的谷胱甘肽(GSH)通过硫键共价亲和，通过GSH交换洗脱的原理来进行纯化。1ml树脂大约可结合5-8 mg融合蛋白，并可反复使用数次。试剂u IPTG(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷) 2g IPTG 溶解入10ml 水，过滤除菌，分装，-20℃保存。u Lysis buffer (50ml)1)2.5ml 1 M Tris，pH8.0 2)0.1ml 0.5ml EDTA 3)0.292g NaCl4)0.5ml Triton X-100 5)0.25ml 1M DTT u Elution buffer 1)0.615g glutathione 2)10 ml 1M Tris，pH8.0 3)90ml distilled water .

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GST 融合蛋白的表达与纯化操作步骤

1、挑一个克隆至2ml LB液中(Amp+ )

2、37℃振摇至OD600值约为0.6

3、将2ml菌液加入100 ml LB中

4、37℃振摇至OD600值约为0.6

5、加入IPTG至终浓度为1mM

电力安全性评价 6、)继续摇3～4h

7、离心(5000 rpm，5min，4℃)

8、用10×柱体积的lysis buffer悬浮细菌

9、超声破碎细胞

10、离心(12,000rpm,15min,4℃)，取上清

11、用滤纸过滤

12、加0.5 ml 50%谷胱甘肽琼脂糖beads于层析柱

锦屏泥石流

13、5×柱体积的lysis buffer洗层析柱

14、样品过柱

遗传学三大定律 15、5×柱体积的lysis buffer洗层析柱

16、3×柱体积的elution buffer洗脱蛋白

17、收集蛋白：0.5ml/管 18)取20ml样品SDS-PAGE鉴定可以在buffer里增加点蛋白酶抑制剂，防止蛋白的降解。

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本文发布于:2024-09-21 08:40:47，感谢您对本站的认可！

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