如何应对涉警舆情
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20.0
GE 生命科学部填料应用部
简介
组氨酸标签被广泛的使用，因为它们小，几乎不干扰靶蛋白的功能、活性和结构。固定的金属离子亲和层析(IMAC)是纯化组氨酸标签蛋白的最常用方法。二价金属离子螯合到亲和填料上，还可以与组氨酸等氨基酸以配位键结合，从而快速的纯化出标签蛋白。由于宿主蛋白也存在组氨酸和/或半胱氨酸氨基酸残基，其它的非特异蛋白与靶蛋白一起与金属离子亲和层析柱料发生结合，造成纯化样品纯度不高，在这种情况下，上样咪唑的浓度提高，换Co 2+离子亲和或者加多一步分子筛技术都是很好的解决方法。 一、his 标签蛋白的纯化工具
Ni Sepharose FF 和Ni Sepharose HP
具有高载量，达到40mg/ml 填料。低Ni 离子脱落，在低浓度的还原剂存在下，脱落<5%。无需每次重新螯合上Ni 2+。选择在样品缓冲液和平衡液中加入20mM-40mM 的咪唑能大大提高样品的洗脱纯度。
雷尼镍
1: Start material
2: Eluate HisTrap FF crude 3: Eluate Superdex 75pg
图1. 两步纯化，得到高纯度的his 标签蛋白
TALON Superflow
比Ni 亲和结合力弱，容易洗脱，带来更高的纯度。
结合缓冲液: 50 mM sodium phosphate, 300 mM NaCl, pH7.4
清洗缓冲液: 50 mM sodium phosphate, 300 mM NaCl1, 5 mMimidazole, pH 7.4
洗脱缓冲液:50 mM sodium phosphate, 300 mM NaCl1, 150mM imidazole, pH 7.4
图2.用预螯合Co 2+的TALON 预装柱纯化标签蛋白
HisTrap™FFcrude/HiTrap™TALON crude1ml/5ml---直接结合未澄清的样品
分钟时间。降低目标蛋白质被降解的机会。提高低丰度蛋白的纯化回收率。每毫升凝胶结合高达40 m
g 组氨酸融合蛋白质。兼容各种还原性试剂如 DTE, DTT, β-ME ，变性剂如尿素, 盐酸胍, 清洁剂等等。 Ni sepharose excel ---直接从CHO 细胞上清中纯化蛋白
减少缓冲液置换的工序，节省了时间，保持高的结合载量。
10
1
2
2
3
mAu
1. LMW-SDS Marker Kit 6. Start materal
2. Start material 7. Flowthrough
3. Flowthrough 8. Wash
4. Wash 9. Eluate
5. Eluate经立通
IMAC sepharose和Chelating sepharose ---未螯
合金属离子的填料
使用需自己螯合Ni2+，Co2+，Cu2+，Zn2+
二．产品应用
图3. 螯合Zn2+的IMAC（左）与Chelating（右）对蛋白有不
同的选择性，IMAC选择性更好。
His SpinTrap/His SpinTrap TALON—离心管柱
预装了100ul的HP填料，可以
直接上600ul澄清和未澄清的样
品，结合750ug标签蛋白。用台
式离心机进行纯化，仅需10分钟。
His GraviTrap/His GraviTrap KitHis Buffer Kit/ His
GravTrap TALON -手工重力纯化
预装了Ni Sepharose
FF1ml填料，上样体积
不限，可以纯化40mg
蛋白，操作时间20-
钽酸锂晶体
30min。kit中包含了供
20次使用的缓冲液。
His MultiTrap FF/His MultiTrap HP/ His MultiTrap
TALON ---微孔板
用于高通量筛选和多样品的平行
纯化。预装了Ni SepharoseFF/Ni
sepharose HighPerformance的
填料，具有高重复性，操作简单
方便快捷的特点。
HisPrepFF 16/10----放大规模纯化
预装20ml Ni Sepharose FF填料，能
一次制备800mg的标签蛋白，与
AKTA层析系统联用，能轻易的放大纯
化规模，省去了装柱的时间。
二、产品信息
HisTrap HP 5ml*1 1 17-5248-01
HisTrap HP 5ml*5 1 17-5248-02
HisTrap FF 1ml*5 1 17-5319-01
HisTrap FF 5ml*5 1 17-5255-01
HisTrap FFCrude 1ml*5 1 11-0004-58
HisTrap FFCrude 5ml*5 1 17-5286-01
His SpinTrap50*100ul……………………….1 28-4013-53
His MultiTrap HP 4*96well……………….1…………………28-4009-89
His Multi Trap FF 4*96well…………… ….1…………………28-4009-90
His GraviTrap 10*1……………………………1…………………11-0033-99
川子和嘟嘟HiTrap IMAC HP 1ml*5…………………….1………………….17-0920-03
HiTrap IMAC HP 5ml*5…………………….1………………….17-0920-05
HiTrap IMAC.FF.1ml*5……………………..1………………….17-0921-02
HiTrap IMAC.FF.5m l*5……………………..1………………….17-0921-04
HiTrap Chelating.HP.1ml*5……………..1………………….17-0408-01
HiTrap Chelating.HP.5ml*1……………..1………………….17-0409-01
HiTrap Chelating.HP.5ml*5……………1…………………. 17-0409-03
HisTrap™ excel 5 x 1 ml 17-3712-05
HiTrap TALON crude 5 x 1 ml 28-9537-66
TALON Superflow 10 ml 28-9574-99
His SpinTrap TALON 50 x 100 µl 29-0005-93
His GravTrap TALON 10 x 1 ml 29-0005-94
His MultiTrap TALON 4 x 96-well 29-0005-96
HiLoad 16/60
Superdex 200 16/600
1 28-9893-35
三、参考文献
1 亲和层析技术纯化手册
2 重组蛋白纯化手册
3 Data file 28-9664-10 AB
4 Instructions 28-9574-96 AC
豫公网安备41160202000603
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