Worthington胰蛋白酶详细分解

Worthington胰蛋白酶详细分解
胰蛋白酶是一种胰腺丝氨酸蛋白酶,具有基于带正电荷的赖氨酸和精氨酸侧链的底物特异性(Brown 和 Wold 1973)。这种酶由胰腺分泌,参与食物蛋白质的消化和其他生物过程。胰蛋白酶是一种中等大小的球状蛋白质,作为无活性的酶原胰蛋白酶原产生(Chen et al. 2009)。
在 1990 年代后期,人们研究了胰蛋白酶在遗传性胰腺炎中的作用,并确定 Arg117His 的突变是防止自溶从而引起胰腺炎的原因。
今天,胰蛋白酶继续用于开发细胞和组织培养方案(Soleimani等人2009、Banumathi等人2009 和 Yang等人2009),以及通过肽测序技术鉴定蛋白质(Manz等人) . 2004 和 Schuchert等人2009)。在医学领域,胰蛋白酶在胰腺疾病中的作用,包括囊性纤维化 (Tzetis et al. 2007, and Li et al. 2009) 和慢性胰腺炎 (Chen et al. 2009),一直是当前研究的主题,并且胰蛋白酶已被用于模拟骨关节炎中关节软骨的分解(Wang et al. 2008)。
中产教育鄙视链Worthington 胰蛋白酶特异性:
胰蛋白酶切割赖氨酸和精氨酸氨基酸残基 C 端侧的肽。如果脯氨酸残基位于切割位点的羧基侧,则不会发生切割。如果酸性残基位于裂解位点的任一侧,则水解速率已显示较慢。
胰蛋白酶原可通过去除末端六肽而被激活以产生单链β-胰蛋白酶。随后的有限自溶产生具有通过二硫键结合的两条或更多条肽链的其他活性形式。主要形式是具有两条肽链的α-胰蛋白酶和具有单链的β-。α-和β-胰蛋白酶显示出不同的活性和热稳定性。
其他结构特征包括氨基酸 185-193 处的表面环,尽管不与底物直接接触,但会影响特异性。稳定性需要高亲和力的 Ca2+ 结合位点,当不存在时,会发生自溶。自溶环(位于氨基酸 143-151)在胰蛋白酶和胰蛋白酶原中都非常灵活。赖氨酸处的裂解产生保留一些催化活性的α形式。该蛋白质具有六个完全保守的二硫键(Halfon 和 Craik 1998)。
胰蛋白酶分子特征:
牛胰腺表达两种形式的胰蛋白酶,主要的阳离子形式和次要的阴离子形式。这些蛋白质序列具有 72% 的同一性,而它们的编码区具有 78% 的同一性。
这些蛋白质中的每一种都被进一步加工成替代形式。催化胰蛋白酶包含一个灵活的“自溶环
”(残基 G145-V157)(Schroeder 和 Shaw 1968 和 Bartunik等人1989),并且在该环内 K148-S149 处占主导地位的单链形式 B-胰蛋白酶的自溶导致形成A-胰蛋白酶。在 K193-D194 的进一步自溶导致 Psi-胰蛋白酶的形成(Fehlhammer 和 Bode 1975)。
阳离子和阴离子胰蛋白酶蛋白均以胰蛋白酶原酶原形式表达,具有 15 个残基信号肽 (M1-A15) 和 8 个残基前肽 (F16-K23)。所有已知胰蛋白酶的三维折叠都是高度保守的。此外,催化三联体和催化三联体侧翼的区域是高度保守的(Hartley 1970)。 
应用:
组织解离,尤其是与其他酶如胶原酶和弹性蛋白酶结合时当李晓峰成为sky
通过“胰蛋白酶消化”收获细胞
线粒体分离
蛋白质的体外研究
从塑料和玻璃中去除单层细胞
丁度.巴拉斯
一个经济杀手的自白各种血凝程序
流式细胞仪 DNA 分析的样品制备
胰蛋白酶图谱
新美国梦指纹和测序工作
环境监测
降低组织培养中的细胞密度
传代细胞
切割融合蛋白
从纯化的糖蛋白中产生糖肽

本文发布于:2024-09-22 05:20:08,感谢您对本站的认可!

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