双缩脲法测定蛋白质的含量心得体会

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路德宗
    蛋白质是组成人体的重要物质,也是构成细胞的基本单位。对生命活动起着决定性作用。
    一、双缩脲法测定蛋白质的含量检验原理蛋白质分子在加热时失去一个氨基酸残基或几个羧基残基,可与浓硫酸作用产生红的硫酸铵,故在反应后滴加碱液可以消除这种颜,最终的颜变化和硫酸铵的存在有关。反应机理是:先是双缩脲中的氮原子与四氯化碳反应,生成橙黄的醌式结构,这是一种较稳定的化合物,不易被破坏;然后与氨水反应,得到淡黄的 N-氨基- N-乙酰氨基脲衍生物,后者再与亚硝酸钠作用,就生成蓝紫的物质;最后双缩脲与盐酸羟胺反应,又生成红的络合物,从而消除了试样中未参与反应的四氯化碳所引起的颜。
    在实际工作中,常用中性或弱碱性的氢氧化钠溶液来代替稀硫酸作为反应的溶剂,并且滴加的碱液总量比用双缩脲测定蛋白质含量的需要多出2~3倍左右。影响因素当 pH 值在7.5左右时,加入中性或弱碱性的氢氧化钠溶液后,随着反应的进行,氢氧根离子浓度逐渐减小,而亚甲基的电离度却增大(如图),导致反应过程中平衡向生成盐的方向移动,直至生成白沉淀为止。吴阶平简介
冷凝器设计    蛋白质分子为何会发生加聚反应?
中国移动万花筒    蛋白质分子由于高温使其中间部位的肽键断裂而形成二聚体。蛋白质分子之间相互作用力极强,二聚体的分子内能降低,故不易继续维持其天然状态,需经热处理才能恢复到原始的三聚体状态。在加热时由于水解,或发生一些副反应等原因,往往使反应速率缓慢下来,当达到某一点后,停止加热,如果分析条件适宜,便可发现二聚体,但此时它已不能被测定。故通常将二聚体在70℃下加热10分钟,使其完全水解。
    注意事项在做双缩脲反应时,必须严格控制反应条件,尤其是 PH 值,否则很容易造成二聚体,导致测定失败。聚四氟乙烯烧结炉

本文发布于:2024-09-24 03:20:54,感谢您对本站的认可!

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