实验一 观察DNA和RNA在细胞中的分布（必修一P26）
一、实验原理：
1、真核细胞的DNA主要分布在细胞核内，RNA大部分存在于细胞质中。
2、甲基绿和吡罗红两种染剂对DNA和RNA的亲和力不同，甲基绿对DNA亲和力强，使DNA显现出STUDYON绿，而吡罗红对RNA的亲和力强，使RNA呈现出红。利用甲基绿、吡罗红的混合染剂将细胞染，可同时显示DNA和RNA在细胞中的分布。
3、盐酸的作用
① 盐酸能改变细胞膜的通透性，加速染剂进入细胞；
② 盐酸使染体中的DNA与蛋白质分离，有利于DNA与染剂结合
4、0.9%的NaCl溶液作用：保持口腔上皮细胞的正常的形态
二、目的要求：
初步掌握观察DNA和RNA在细胞中分布的方法
三、材料用具：
人的口腔上皮细胞（也可用其他动物或植物细胞代替，如洋葱鳞片叶表皮细胞）
大烧杯、小烧杯、温度计、滴管、消毒牙签、载玻片、盖玻片、铁架台、石棉网、火柴、酒精灯、吸水纸、显微镜 质量分数为0.9%的NaCl溶液，质量分数为8%的盐酸，吡罗红甲基绿染剂（取A液20mL，B液80mL配成染剂，使用时现配。A液：取吡罗红甲基绿粉1g，加入100mL蒸馏水中溶解，放入棕瓶中备用。B液：取乙酸钠16.4g，用蒸馏水溶解至1000mL。取乙酸12mL，用蒸馏水稀释至1000mL。取稀释的乙酸钠溶液30mL和乙酸20mL，加蒸馏水50mL，配成pH为4.8的溶液），蒸馏水
五、方法步骤：
1、取口腔上皮细胞制片
①在洁净的载玻片上滴一滴质量分数为0.9%的NaCl溶液。
②用消毒牙签在自己漱净的口腔内侧壁上轻轻地刮几下，把牙签
上附有碎屑的一端，放在上述载玻片上的液滴中涂抹几下。
点燃酒精灯，将涂有口腔上皮细胞的载玻片烘干。（固定细胞）
2、水解
①在小烧杯中加入30mL质量分数为8%的盐酸，将烘干的载玻片放入小烧杯中。
②在大烧杯中加入30℃温水。
③将盛有盐酸和载玻片的小烧杯放在大烧杯中保温5min。
3、冲洗涂片
用蒸馏水缓水流冲洗载玻片10s。
4、染
①用吸水纸吸去载玻片上的水分。
②将吡罗红甲基绿染剂滴2滴在载玻片上，染5min。
③吸去多余染剂，盖上盖玻片。
5、观察
①低倍镜观察：选择染均匀，泽浅的区域，移至视野中央，将物像调节清晰。
②换用高倍物镜观察：调节细准焦螺旋，观察细胞核和细胞质的染情况。
六、考点提示：
1、取口腔上皮细胞之前，应先漱口，以避免装片中出现太多的杂质；
2、取洋葱表皮细胞时，尽量避免材料上带有叶肉组织细胞； 3、冲洗载玻片时水的流速要尽量慢，切忌直接用水龙头冲洗；
4、用酒精灯烘烤载玻片时，不要只集中于材料处，而应将载玻片在火焰上来回移动，使载玻片均匀受热，以免破裂；
5、烘烤后的载玻片不要马上放入盛有稀盐酸的烧杯中，最好先自然冷却1分钟。
实验二 检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质（必修一P18）
一、实验原理：
某些化学试剂能使生物组织中的有关有机化合物产生特定的颜反应。
1、生物组织中普遍存在的可溶性糖类较多，有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖。前三种糖的分子内都含有游离的具还原性的半缩醛羟基，因此叫做还原糖；蔗糖分子内没有，为非还原糖。实验中所用的斐林试剂，只能鉴定生物组织中可溶性还原糖，而不能鉴定可溶性非还原糖。
糖类中的还原糖（如葡萄糖、果糖、麦芽糖）与斐林试剂发生作用，可生成砖红的Cu2O沉淀。用斐林试剂鉴定还原糖时，溶液变化过程为：浅蓝→棕→砖红沉淀
淀粉遇碘变蓝（直链）或紫（红）（支链）。
2、脂肪和类脂（磷脂、糖脂、固醇脂等）统称为脂类。它是构成人体组织的正常成分，不溶于水而易溶于酒精、乙醚、氯仿等脂溶剂中。在化学组成上，脂类属于脂肪酸的酯或与这些酯有关的物质。脂类的主要功能是氧化供能。 脂肪主要存积于脂肪组织中，并以油滴状的微粒存在脂肪细胞浆内。
脂肪可以被苏丹Ⅲ染液染成橘黄（或被苏丹Ⅳ染液染成红）。
3、蛋白质与双缩脲试剂发生作用，产生紫反应。（蛋白质分子中含有很多肽键，在碱性NaOH溶液中能与双缩脲试剂中的Cu2+作用，产生紫反应。）
泰晤士报
因此，可以根据与某些化学试剂所产生的颜反应，检测生物组织中糖类，脂肪或蛋白质的存在。
二、实验目的：
尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质。
三、实验材料：
1、做可溶性还原性糖鉴定实验，应选含糖高，颜为白的植物组织，如苹果或梨匀浆。（因为组织的颜较浅，易于观察。）
经试验比较，颜反应的明显程度依次为苹果、梨、白甘蓝叶、白萝卜。
2、做脂肪的鉴定实验。应选富含脂肪的种子，以花生种子、花生种子匀浆为最好，实验前一般要浸泡3~4小时（也可用蓖麻种子）。
3、做蛋白质的鉴定实验，可用富含蛋白质的豆浆、鲜肝提取液。
4、淀粉的鉴定：马铃薯匀浆。
四、实验用具：双面刀片、试管（最好用刻度试管）、试管夹、试管架、大小烧杯、小量筒、滴管、酒精灯、三脚架、石棉网、火柴、载玻片、盖玻片、毛笔、吸水纸、显微镜 五、实验试剂：
1．斐林试剂（甲液：质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液，乙液：质量浓度为0.05g/ mL CuSO4水银肥肠溶液）
2．苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液
3．双缩脲试剂（A液：质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液，B液：质量浓度为0.01g/ mL CuSO4溶液）
4．体积分数为50%的酒精溶液
5．碘液
6．蒸馏水
六、方法步骤：
1.实验材料、仪器和试剂的选择 每小组从老师提供的实验材料中选择一两种，预测其中含有哪些化合物，再选择所需要的仪器和试剂。
2.设计记录表格，记录预测结果，然后按照试验步骤进行检测，用“+”或“-”记录实测结果。
3.检测的方法步骤
（1）可溶性糖的检测和观察
1. 制备组织样液。
（去皮、切块、研磨、过滤）苹果或梨组织液必须临时制备。因苹果多酚氧化酶含量高，组织液很易被氧化成褐，将产生的颜掩盖。
2. 取1支试管，向试管内注入2mL待测组织样液。
3. 向试管内注入1mL新制的斐林试剂，振荡。（应将组成斐林试剂的甲液、乙液分别配制、储存，使用前才将甲、乙液等量混合均匀后在注入）。
（切勿将甲液、乙液分别加入苹果组织样液中进行检测。斐林试剂很不稳定，甲、乙液混合保存时，生成的Cu ( OH )2在70~ 900o阿富汗将有新宪法C下分解成黑CuO和水，甲、乙液分别加入时可能会与组织样液发生反应，无Cu ( OH )2生成）。
4.试管放在盛有50-65oC温水的大烧杯中，加热约2min。
5.观察试管中出现的颜变化：浅蓝 → 棕 → 砖红（沉淀）。
（好用试管夹夹住试管上部，使试管底部不触及烧杯底部，试管口不要朝向实验者。也可用酒精灯对试管直接加热，短实验时间。。防止试管内的溶液冲出试管，造成烫伤。）
（2）脂肪的检测和观察
①方法一：向待测组织样液中滴加3滴苏丹III染液，观察样液被染的情况。
②方法二：制作子叶临时切片，用显微镜观察子叶细胞的着情况（以花生为例）。
取材 取一粒浸泡过的花生种子，去掉种皮。（干种子要浸泡3~4小时，新花生的浸泡时间可缩短。因为浸泡时间短，不易切片；浸泡时间过长，组织较软，切片不易成形。切片要尽可能薄些，便于观察）
切片 用刀片在花生子叶的横断面上平行切下若干薄片，放入盛有清水的培养皿中待用。
制片 从培养皿中选取最薄的切片，用毛笔蘸取放在载玻片中央；在花生子叶薄片上滴2~3滴苏丹Ⅲ，染3min（如果用苏丹Ⅳ染液，染1min），（染时间不宜过长），薄片周围染液，再滴加1~2滴体积分数为50%的酒精溶液，洗去浮，（酒精用于洗去浮，不洗去浮，会影响对橘黄脂肪滴的观察。同时，酒精是脂溶性溶剂，可将花生细胞中的脂肪颗粒溶解成油滴。）用吸水纸吸去花生子叶周围的酒精，滴上一滴蒸馏水（滴上清水可防止盖盖玻片时产生气泡），盖上盖玻片，制成临时装片。
观察 在低倍显微镜下到花生子叶的最薄处，移至视野中央，将影像调节清楚；换高倍镜观察，视野中被染成橘黄的脂肪颗粒清晰可见。（装片不宜久放，时间一长，油滴会溶解在乙醇中）
（3）蛋白质的检测和观察
制备组织样液（浸泡、去皮研磨、过滤）。黄豆浸泡1至2天，容易研磨成浆，也可购新鲜豆浆以节约实验时间。可用蛋清代替豆浆，蛋清要先稀释。如果稀释不够，在实验中蛋清粘在试管壁，与双缩脲试剂反应后会粘固在试管内壁上，使反应不容易彻底，并且试管也不易洗干净。
①向试管内注入2mL待测组织样液。
②向试管内注入双缩脲试剂A液1mL，摇匀。
③向试管内注入双缩脲试剂B液4滴，摇匀。
（先加NaOH溶液，为Cu2+与蛋白质反应提供一个碱性的环境。A、B液混装或同时加入，会导致Cu2+变成Cu ( OH ) 2沉淀，而失效。CuSO4溶液不能多加，否则CuSO4的蓝会遮盖反应的真实颜）
④观察试管中出现的颜变化。（溶液变紫）
（4）淀粉的检测和观察
①向试管内注入2mL待测组织样液。
②向试管内滴加2滴碘液，观察颜变化。（碘液不要滴太多，以免影响颜观察）
七、考点提示：
1、常见还原性糖与非还原性糖有哪些？
答：葡萄糖、果糖、麦芽糖都是还原性糖；淀粉、蔗糖、纤维素都是非还原性糖。
2、还原性糖植物组织取材条件？
答：含糖量较高、颜为白或近于白，如：苹果、梨、白甘蓝叶、白萝卜等。
3、研磨中为何要加石英砂？不加石英砂对实验有何影响？
答：加石英砂是为了使研磨更充分。不加石英砂会使组织样液中还原性糖减少，使鉴定时溶液颜变化不明显。
4、斐林试剂甲、乙两液的使用方法？混合的目的？为何要现混现用？
答：混合后使用；产生氢氧化铜；氢氧化铜不稳定。
5、还原性糖中加入斐林试剂后，溶液颜变化的顺序为？
结构设计答：浅蓝 棕 砖红。
口腔蝇蛆病6、花生种子切片为何要薄？
答：只有很薄的切片，才能透光，而用于显微镜的观察。
7、转动细准焦螺旋时，若花生切片的细胞总有一部分清晰，另一部分模糊，其原因一般是什么？
答：切片的厚薄不均匀。
8、脂肪鉴定中乙醇作用？ 答：洗去浮。
9、双缩脲试剂A、B两液是否混合后用？先加A液的目的怎样通过对比看颜变化？
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