使用Zenon抗体标记技术――在十分钟内进行免疫标记 Zenon免疫标记技术提供了一种简单的、通用的、真正独有的标记IgG抗体的方法,标记采用Molecular Probes的顶级染料、半抗原和酶,甚至可以用于很少量(亚微克级)的初始材料的标记。不同寻常的Zenon技术利用了抗体结合反应的免疫选择性,形成由完整的一抗IgG抗体与针对它的Fc部分被荧光、半抗原或者酶标记的Fab片段组成的复合体。每个Zenon抗体标记试剂盒提供一个同种型特异标记(isotype-specific labeled)的Fab片段,此外还有用来准备定量标记一抗IgG的封闭试剂。 由于不需要标记前或标记后的纯化步骤, 进行这种标记的一抗可以与共价标记的一抗以相同的方式快速进行细胞染或其它的染,花费仅仅十分钟的时间!Zenon试剂盒包含用来标记鼠IgG1、鼠IgG2a、鼠IgG2b、兔IgG、人IgG、和山羊IgG抗体的最明亮和最受欢迎的Alexa Fluor染料、其它荧光基团、半抗原或者酶等关键试剂。使用Zenon抗体标技术,在实验中你可以自由的选择不同的染料和抗体组合以发现最佳的搭配来进行多流式细胞仪和成像实验。我们也提供采用酪胺信号放大技术(Tyramide Signal Amplification)改进了的Zenon试剂盒,以适于增强敏感度的要求。(图2)可以访问下面的网址以了解更多的有关Zenon抗体标记试剂盒产品的细节和全部产品(www.probes/zenon) 图2. Zenon抗体标记在10分钟内制备标记的IgG
| |
制备共价Alexa Fluor抗体耦联物 Molecular Probes拥有多年的蛋白标记经验, Alexa Fluor蛋白标记试剂盒(1 mg的蛋白样品)或Alexa Fluor单克隆标记试剂盒(100 μg的蛋白样品),都含有预先准备好的进行氨基反应的Alexa Fluor染料以及用来纯化抗体产品的试剂和材料(表3)。这些蛋白标记试剂盒利用了高效和简单的琥珀酰酯(NHS)化学反应,选择性连接一个Alexa Fluor染料到邻近蛋白的氨基基团(包括赖氨酸侧链和氨基端)上。Alexa Fluor琥珀酰酯是用来进行胺修饰的极好的试剂,因为它们与蛋白形成的共价结合就如同氨基酸间形成的肽键一样稳固。Alexa Fluor琥珀酰酯也可单独提供(表3)以便你能优化你的标记方案,制备用于你研究中的理想的Alexa Fluor 耦联物。
表3. 可选择的Alexa Fluor 琥珀酰(NHS)酯和蛋白标记试剂盒
Alexa Fluor 染料 | 琥珀酰(NHS)酯*2-溴芴 | 蛋白标记试剂盒? | 单抗标记试剂盒? | Alexa Fluor 350 | A10168 | A10170 | A20180 | Alexa Fluor 488 | A20000 A20100 A30005 + | A10235 | A20181 | Alexa Fluor 555 | A20009, A20109 | A20174 | A20187 | Alexa Fluor 568 | A20003, A20103 | A10238 | A20184 | Alexa Fluor 594 | A20004, A20104 | A10239 | A20185 | Alexa Fluor 647 | A20006, A20106 | A20173 | A20186 | Alexa Fluor 660 | A20007, A20107 | A20171 | Inquire | Alexa Fluor 680 | A20008, A20108 | A20172 | Inquire | 除了Alexa Fluor 350染料仅以5 mg为包装单位和Alexa Fluor 488 四氟苯酯仅以1 mg为包装单位外,Alexa Fluor 琥珀酰酯以1 mg或 5 mg为包装单位。 + 胺反应四氟苯酯(TFP)酯如同琥珀酰酯可以在染料与目的复合物间产生与氨键同样强的键,但是它更不容易在结合反应中自发水解。Inquire = 请发送产品质询到reactions@probes. | | | | |
*请登录Invitrogen中文网站查询产品报价
每个Alexa Fluor 488蛋白标记试剂盒和Alexa Fluor 488单克隆标记试剂盒含有替代琥珀酰酯的氨基反应(amine-reactive)Alexa Fluor 488四氟苯酯(tetrafluorophenly TFP)。这种四氟苯酯像琥珀酰酯一样可以产生在染料与抗体间产生与胺键同样强的键,但是四氟苯酯更不容易在结合反应中自发水解。Alexa Fluor 488四氟苯酯也可以单独提供(表3)。 通过标记的二抗增强信号 如果所制备的标记一抗是不实用的,或者无法提供足够的灵敏度,那就需要高质量的二抗来解决问题。尽管来自于一抗和二抗的非特异性结合可以提高背景水平,选择一个较好的标记了的二抗,通常可以通过显著性的信号扩增来克服升高了的荧光背景。当然,不是每一个商业上可以提供的二抗都是完全被纯化或优化标记的(图3)。Molecular Probes提供了在任何地方均可获得的可以进行最大选择的荧光二抗。(全部目录详见在线手册的第7章,网址是 www.probes/handbook)。 图3. Molecular Probes的Alexa Fluor 647山羊抗鼠IgG 抗体与可购买到的其它公司提供的Cy5 山羊抗鼠IgG抗体亮度的比较
| |
这些包括具有强烈荧光的Alexa Fluor抗体耦合物,在各个光谱都胜过大多数常规使用的荧光二抗。在制备每个二抗耦合物时,我们采用了质量最高的蛋白,然后优化标记,以形成最亮的的耦合物,最后使用细胞样品进行严格的测试,以确保低非特异性结合和高特异性染。 Alexa Fluor二抗正快速成为所有基于荧光免疫测定的首选的二级试剂。在我们新的Image-iT 试剂盒中还将包含几个Alexa Fluor抗体耦合物—-每个Image-iT试剂盒都含一个明亮的并且光稳定的Alexa Fluor耦合物和所有用来优化固定细胞和组织成像的试剂。 通过酪胺信号放大技术(Tyramide Signal Amplification)促使信号增强 当实验样品的靶点不是很丰富的时候,通过二抗的信号扩增是不够的。对于此种情况,我们已经开发了酪胺信号放大技术(TSA)试剂盒(表4),它利用了超亮度的Alexa Fluor染料以达到最终的高清晰度信号扩增。TSA 技术—有时也称作CARD(catalyzed reporter deposition)—是一种利用了辣根过氧化物酶(HRP)的催化活性在靶蛋白或核酸序列上产生高密度原位标记的酶介导检测方法 (图4)。 据报道,与常规的亲合素-生物素酰化酶复合体(ABC)方法相比,TSA能将信号扩大100倍。在目前可提供的24种Alexa Fluor TSA试剂盒中(表4),每个耦合于二抗或链霉亲合素上的HRP激活大量的Alexa Fluor tyramide,它可以产生短寿命的,并能与反应位点临近的亲核残基发生强烈反应的tyramide基团,进而产生一个扩散程度最小的放大荧光信号。使用Alexa Fluor TSA试剂盒能够在荧光原位杂交(FISH)、免疫组化、神经解剖学追踪实验、流式细胞仪测定、酶联免疫吸附分析(ELISAs)、微阵列和其它应用中完成超灵敏的测定。 表4. TSA 试剂盒
7折优惠(截至2004-11-15) Tyramide Label | 过氧化物酶耦联物 | 羊抗鼠 IgG * | 羊抗兔 IgG* | 链霉亲合素* | Alexa Fluor 350 | T20917 (Kit #7) | T20927 (Kit #17) | T20937 (Kit #27) | Alexa Fluor 405 | T30950 (Kit #37) | T30951 Kit #38) | T30952 (Kit #39) | Alexa Fluor 488 | T20912 (Kit #2) | T20922 (Kit #12) | T20932 (Kit #22) | Alexa Fluor 532 | T20918 (Kit #8) | T20928 (Kit #18) | T20938 (Kit #28) | Alexa Fluor 546 | T20913 (Kit #3) | 国际贸易术语解释通则2010T20923 Kit #13) | T20933 (Kit #23) | Alexa Fluor 568 | T20914 (Kit #4) | T20924 (Kit #14) | T20934 (Kit #24) | Alexa Fluor 594 | T20915 (Kit #5) | T20925 (Kit #15) | T20935 (Kit #25) | Alexa Fluor 647 | T20916 (Kit #6)十七大报告 | T20926 (Kit #16) | T20936 (Kit #26) | | | | |
*请登录Invitrogen中文网站查询产品报价
对那些既想要容易地使用Zenon 技术提供的HRP,又想用TSA提供的信号扩增技术标记鼠一抗IgG1的研究人员,我们已经开发了两个使用TSA技术改进的Zenon鼠IgG1标记试剂盒-—其中一个含有绿荧光 Alexa Fluor 488 tyramide,另一个含有桔红荧光 Alexa Fluor 568 tyramide。这些试剂盒提供了来自于Zenon辣根过氧化物酶鼠IgG1标记试剂盒以及相应的Alexa Fluor TSA试剂盒所必需的试剂,一起的还有详细的进行Zenon复合体形成及tyramide标记的操作流程。更重要的,这种Zenon和TSA技术的结合不受鼠IgG1同种型和Alexa Fluor 488 与 Alexa Fluor 568 tyramides的限制。由于可以得到鼠IgG1、鼠IgG2a、鼠IgG2b、兔IgG和人IgG Zenon辣根过氧化物酶抗体标记试剂盒,任何具有这些同种型(isotypes)的一抗都能方便地和定量地用HRP来标记,以代替在任何含有这些耦联物的TSA试剂盒中由HRP耦联的二抗。 |