黑龙江医药HeilongjiangMedicineJournalV o1.24No.52011?681?
药品检验?
HPLC法同时检测茶叶中八种儿茶素
张戎睿，王舒雅，王富济，杨磊，祖元刚，张宝友
东北林业大学森林植物生态学教育部重点实验室(哈尔滨150040)奥林匹克大家庭
摘要建立一种茶叶中多组分儿茶素的HPLC测定方法.将茶叶用80℃热水超声提取20min，提取液离心
分离后，采用KromasilCI8(250mmx4.6mm,5m)谱柱分离，以水一乙腈一磷酸(49.95:50:0.05,V:V)为流动
相A，水一乙腈一磷酸(95.45:4.5:0.05,V:V)为流动相B，进行梯度洗脱，流速为0.5mL/min，柱温25℃，紫外检测
波长231nm.在给定的浓度范围内，各儿茶素组分的峰面积与其相应浓度呈现良好的线性相关,R>0.9950.
添加
已知儿茶素含量的回收试验结果显示，各组分儿茶素的平均回收率为94.8%一110.8%，相对标准偏差≤2%. 关键词：儿茶素；茶叶;HPLC.
中图分类号:R927.2文献标识码:A文章编号:1006—2882(2011)05—681—03 SimultaneousDeterminationofEightCatechinsinChinese TeabyHighPerformanceLiquidChromatography
ZhangRongrui,etal
KeyLabm~toryofForestPlantEcology,MinistryofEducation,NortheastForestryUniversit y(Harbin150040,China)
Abstract:Ahishperformanceliquidchromatographymethodwasdevelopedforthedetermin ationofmulticomponentcat—
eclfinsinChinesetea.Catechinsintheteawereextractedwith80℃
hotwaterbysonicationfor20rain.Theextractionsolu? tionwascentrifugedandfiltratedforHPLCanalysis.ItwascarriedonaKromasilC18(250m m×4.6mnl,5Ixm)Columnat
thetemperatureof25cCunderUVdetectorwith231nm.Chromatographicseparationwaspe rformedbydeliveringthemobile
phase,A:water—acetonitrile—phosphoricacid(49.95:50:0.05,v:v)andB:water—acetonitfile—phosphoricacid(95.45:
4.5:O.05,v:v)ataflowrateof0.5mL/min.Therestfltsshowedthattheconcentrationofthecate chinsandtheirpeakareas
achievedgoodlinearrelation,R2>O.9950.Therecoverieswerebetween94.8%一110.8%,andtheRSDswerebelow2%.
Keywords:catechins;Chinesetea;highperformanceliquidchromatography
茶多酚是从茶叶中提取的混合型抗氧化剂，是茶叶中
儿茶索类物质的总称，具有明显的抗衰老，消除人体过剩的
自由基…，去脂减肥，降低血糖，血脂和胆固醇]，预防心
血管疾病】，抑制肿瘤等药理功能】，在食品加工，医药，日
用化工等领域具有重要的应用』.茶多酚的分离和应用受
塑料件的设计
到国内外广泛关注引，开拓了以农副产物为原料的"绿
护理学基础精品课程技术"和"绿工程"新领域.本实验建立一种同时测定茶
叶中的8种儿茶素的HPLC方法，结果表明,8种儿茶素在
同一谱条件下均得到较好分离，并可进行含量测定，为该
商品的质量控制提供依据.
1试剂与仪器
1.1材料及试剂54631部队
8种儿茶素单体化合物：儿茶素(catechin,C)，表儿茶
素(epicatechin,EC)，没食子儿茶素(gallocateehin,GC)，表没
食子儿茶素(epigallocatechin,EGC)，儿茶素没食子酸酯(cat—
ecltingallate,CG)，表儿茶索没食子酸酯(epicatechingallate,
ECG)，没食子儿茶索没食子酸酯(gaUoeatechingallate,
GCG)和表没食子儿茶素没食子酸酯(epigaHocatechingal-
late,EGCG)，结构式如图1所示，其标准品均购自Sigma公
司，纯度98%；乙腈，甲醇，磷酸为谱纯，购自美国Dima
TechndogyInc.公司，去离子水采用Millipore超纯水仪自
制；其余试剂均为国产分析纯.龙井产地为杭州龙顶山，碧 螺春产地江苏苏州,Ytl~f-J红茶产地为安徽黄山，铁观音产地
为福建安溪，普洱茶产地为云南大理，购于哈尔滨茶城.
第一作者：张戎睿(1986一)，女，黑龙江哈尔滨人，硕士研究生，生药学及健康食品研究工作.
王舒雅(1985一)，女，内蒙古呼伦贝尔人，硕士研究生，生药学及健康食品研究工作. 通讯作者：祖元刚(1954一)男，教授，博士，博士生导师，植物化学和植物药研发.
基金项目:"十一五"国家科技支撑计划(2006BADI8B04)资助
682?黑龙江医药HeilongjiangMedicineJournalV oL24No.52011
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图1儿茶素分子结构
1.2仪器
日本Jasco高效液相谱仪;Jasco1575型紫外检测器;
Ja8eo1580型二元泵;JascoVersion6.1谱工作站；岛津uV
一
260紫外分光光度计;KQ一250DB型超声波清洗器(昆山
市超声波仪器有限责任公司);3K一30超速离心机(Sigma
公司产品);Milli～Q超纯水仪(美国Millipore公司).
2谱条件
谱条件：谱柱为KromasilCl8(250mill×4.6mm,5
txm)；检测波长:=231rim；流动相:A为水一?乙腈一磷酸
(49.95:50:0.05,V:V),B为水一乙腈一磷酸(95.45:4.5:
0.05,V:V)，梯度洗脱程序如表1所示；柱温为25cC；流速
为0.5mL/min；进样量为10p.L.儿茶素得到较好分离，如
图2所示.
L上n
盛止土LL止L图2儿茶素标准品和茶叶提取物的谱
表l梯度洗脱流程
Time(rain)010153050606580
流动相A(%)1O102O2O5O5O9O90
流动相B(%)9O9O8O8O5O50l01O
3方法与结果
3.1样品的制备
取市售商品茶叶于研钵中研磨粉碎，精密称取0.5g茶
叶粉末，用温度为80℃热水超声提取2Omin，取适量上清液以12,000r/min离心10min，然后取上清，用0.45/xm滤膜
过滤，待测.
ntc训练3.2标准曲线的绘制
精密称取EGCG标准品25mg用谱甲醇定容至25 mL，制成浓度为1mg/mL标准品储备液.分别精密量取储
备液0.5,1.0,2.0,4.0和8.0mL分置10mL容量瓶中，加
谱甲醇稀释至刻度，摇匀，作为标准溶液.以峰面积x对
浓度Y(p,g/mL)进行线性回归，回归方程为:Y=0.0654x+ 0.O2o7,R2=0.
9989.结果表明，进样浓度在68.8至689.8
~.g/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系.用同样的方法得到，其他7种儿茶素的标准曲线和线性范围，如表2所示. 表2儿茶素标准曲线方程和线性范围
3.3检测限LOD和定量限LOQ
将浓度为0.5p.g/mL的EGCG标准品溶液用谱甲醇
稀释后进样，按信噪比3:1计,EGCG的最低检测限为o.4
ng/mL，按信噪比10:1计其最低定量限为3.5ng/mL.同样
的方法得到其他7种儿茶素的检测限和定量限,C,EC,GC, EGC,CG,ECG和GCG的最低检测限分别为0.5,1.8,0.5,
0.7,2.1,4.6和0.7ng/mL，定量限分别为5.2,12.1,4.9,
9.1,23.2,32.7和l2.4ng/mL.
3.4精密度试验
取标准曲线中线性范围内的低浓度90g/mI和高浓
度500trg/mL的标准溶液，在上述谱条件下，分别连续进
样6次，所得到的峰面积的RSD值如表3所示.
表3精密度试验及其重复性试验结果
3.5回收率试验'
以杭州龙井为空白基质，添加已知几茶索含量的标准
品，按所述方法进行回收试验，以平均回收率表示方法的准
确度，分别平行测定6份，结果如表4所示.中国发展的根本目的
表4回收率实验结果
C5O.094.81.9100.096.72.0
EC5O.O1o6.91.8100.0104.01.3
黑龙江医药HeilongiiangMedicineJournalV ok24No.52011?683? EGCG50.0107.2l|2100.0110.81.6
3.6样品测定
取不同产地的市售茶叶按3.1中的方法制备样品，用
所建立的方法测定其儿茶索的含量，每个样品重复测定3
次，经测定后各样品中儿茶素成份含量结果如表5所示.
表5五种茶叶中的儿茶索含量
注:ND一未检出
4讨论
由于茶叶提取液中与儿茶素保留时间相近的物质较
多，为了达到基线分离的目的，必须延长保留时间，减小流
动相中甲醇的量，最后选用水和乙腈作为流动相进行梯度
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