纤维蛋白溶酶(Fbn) ELISA KiT
产品编号： EIA05277
使用前彻底阅读说明书。本酶联免疫试剂盒是基于经典酶联夹心技术原理，能测量纤维蛋白溶酶(Fbn)，只能用于研究用途，不得用于医学诊断。 工作原理
纤维蛋白溶酶;fibrinolysin;plasmin,由人血浆纤溶酶原经高纯度尿激酶激活而得。白吸湿性粉末。分子量75 000。溶于水。它一种来源于人血的蛋白酶类溶血检药物。专一作用于精氨酸或赖氨酸形成的肽键，能够水解血纤维蛋白原及血浆因子V、VI、IX、XI等。注入体内后可直接溶解纤维蛋白，医学上用于血管内纤维蛋白凝块和血栓。所提供的ELISA Kit是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒（ELISA）。预先包被的抗体为多克隆抗体。检测相抗体也为多克隆抗体，经生物素（biotin）标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过PBS或TBS的彻底洗 涤后用底物TMB显。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝，并在酸的作用下转化成最终的黄。颜的深浅和样品中的待测因子呈正相关。
每套试剂盒中内容(96T)
材料 | 数量 |
标准品 | 96T(2vial) |
预包被抗体的96孔板 | 96T（8×12） |
生物素标记抗体 | 96T (1:100) |
ABC（亲和素-过氧化物酶复合物） | 96T (1:100) |
样品稀释液 | 再生油96T×2 |
抗体稀释液 | 96T×1 |
ABC稀释液 | 96T×1 |
TMB显液A | 96T×1 |
TMB显液B | 96T×1 |
高中班级宠物女孩小诗TMB终止液 | 96T×1 |
ELISA专用洗涤液 | 96T×1(1:25) |
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需要而未提供的试剂和器材
1．37℃恒温箱。
2．标准规格酶标仪。
3．自动洗板机。
4．单通道或多通道可调节移液器以及其吸头。
5．蒸馏水，容量瓶等
6．干净的试管和Eppendof管。
注意事项
1．从-20℃取出的试剂盒，最好在4℃解冻过夜。盒内每一瓶解冻的溶液在开启瓶盖之前都要轻轻摇匀，避免解冻时出现的分层，否则会出现浓度不均一的现象。
2．开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。
3．配制各种试剂时，切记混匀！
4．用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。
5．建议所有标准品、样本都做双份检测。
6．要严格避免操作过程中酶标板干燥。干燥会使酶标板上生物成份迅速失活！
供养人7．为免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和试管。
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的PBS或TBS洗涤缓冲液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
样品的准备和保存
样品如果不立即分析，应分装后冷冻保存，且避免反复冻融。
血清——用干净试管收集血液，室温凝固2小时或4℃过夜，离心1000×g 10分钟，收集血清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
细胞培养、组织匀浆、体液——离心去除沉淀，立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
新疆艾滋病事件样品稀释的一般原则
用户须查阅文献了解标本内待测因子的含量，决定适当的稀释倍数，以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA试剂盒的最佳检测范围。样品的稀释应有详细记录。
试剂的准备和保存
A. 标准品的稀释和使用：在使用前2小时内准备。将冻干品管内加入1ml样品稀释液，彻底溶解后做倍比稀释。
稀释后的标准品在2小时内使用。
B．生物素标记抗体工作液：在使用前2小时内准备。
1．根据每孔需要0.1ml计算总的用量（实际配制时应多配制0.1-0.2ml）。
2．按10ul生物素标记抗体加抗体稀释液990ul的比例配制工作液。轻轻混匀。
C．亲和素-过氧化物酶复合物（ABC）工作液的准备：在使用前1小时内准备。
1．根据每孔需要0.1ml计算总的用量（实配时应多配制0.1-0.2ml）。
2．按10ul亲和素-过氧化物酶复合物（ABC）加ABC稀释液990ul的比例配制工作液。轻轻混匀。
D.TMB显工作液的准备：在使用之前30分钟，按TMB显液A 9份加 TMB显液B 1份的比例配制TMB显工作液。
操作程序
1．确定本次检测所需的已包被抗体的酶标板孔数目。
2．将倍比稀释的标准品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加样品稀释液的作为对照。处理后的标本按100ul每孔加入。
3．酶标板加上盖，37℃反应90分钟。
4．反应后用自动洗板机吸去酶标板内的液体；或甩去酶标板内液体，再对着吸水纸拍几下。洗涤2次。
5．将准备好的生物素抗体工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应60分钟。
6．0.01M TBS或0.01M PBS洗涤3次，每次浸泡1分钟左右。
7．将准备好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应30分钟。
8．0.01M TBS或0.01M PBS洗涤5次，每次浸泡1-2分钟左右。
9．按每孔0.1ml依次加入TMB显工作液，37℃高考之外避光反应，反应过程中，要经常的观察，当肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝，后3-4孔差别不明显时，即可加入TMB终止液0.1ml/孔。（显反应最长不要超过30分钟）。
10．
11．根据样品的吸光值在坐标上出对应的浓度。用户也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了N倍，其实际浓度应该×N。
操作程序总结：
准备试剂，样品和标准品
加入准备好的样品和标准品，37℃反应90分钟
洗板2次，加入生物素化抗体工作液，37℃反应60分钟
洗板3次，加入ABC工作液，37℃反应30分钟
洗板5次，加入TMB显液，37℃反应
加入TMB终止液
30分钟之内读OD值
计算标本待测因子含量
检测范围：50ng/ml→0.78ng/ml。
敏感性： ＜0.1ng/ml
特异性： 系统和其它细胞因子无交叉反应。
保存： -20℃ [短期内（如两周）可4℃]
有效期： 12个月（-20tc165℃）。
用途： 用于体外定量分析液体标本（通用型）。
REFERENCES
1.Corvol,P. and T.A. Williams (1998) inHandbook of Proteolytic Enzymes,Barrett,A.J. et al. eds.,Academic Press,SanDiego,pp.1066- 1076.
2.Hu, J.et al.(2001) J. Biol. Chem. 276:47863.
3.Turner, A.J. and N.M. Hooper (2002) Trends Pharmacol. Sci. 23:177.
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7.Li, W.et al. (2003) Nature 426:450.
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