肠道菌分离培养
1、大肠杆菌培养基(EMB) (伊红美兰琼脂——成品培养基):蛋白胨 10g、乳糖5 g、K2HPO4浓缩铀
2g、伊红Y 0.4g、美兰0.065g、水 1000ml、PH 7.2。 DHL培养基:成分及调整方法:Meat extrct 3100g,蛋白胨20g,乳糖南京广播学院
10g, 蔗糖10g,脱氧胆酸钠1g,Sodium thiosrlfate 2.30g,柠檬酸氨1g, 柠檬酸钠1g,中性红0.03g,琼脂15g,蒸馏水1000ml,pH7.4,将以上成分加温溶解,倒平板。培养基长期放置(3 周以上),分注前有必要灭菌。 2、链球菌培养(TATAC):蛋白胨15g、胰蛋白胨10g、 酵母浸膏10g、蔗糖 1g、七叶苷1g、 琼脂16g、蒸馏水1000ml,PH 7.6-7.8,马血清50ml。
TATAC 添加液І 22m l,TA TAC 添加液Ⅱ 20m l。将马血清及各添加液以外的成分加温溶解, 将其pH 调整至7.6 - 7.8后,121.3℃ 20min 灭菌。待其冷至50℃左右, 加入马血清及各添加液,充分混合后,分注于平皿中。 添加液І:叠氮钠0.45g,谷氨酸钠30g,蒸馏水100ml
溶解:100℃ 30min煮沸,冷藏
添加液Ⅱ:吖啶橙 0.01g、TTC 0.1g、结晶紫(0.65%液)1.0ml、1.65g,蒸馏水100ml,溶解后冷藏
3、葡萄球菌培养基(BP): 营养琼脂粉41g、氯化理5g、苯乙醇2.5ml、卵黄液50ml、精制水1000ml。(10%—15%NaCl)
将卵黄液以外的成分加温溶解后,121.3 ℃20 分钟灭菌。待其冷至50℃左右,加入卵黄液,充分混合后,分注于平皿中。
葡萄球菌选择性培养基(Mannitol salt agar 高盐甘露醇):牛肉膏 1.0 g、蛋白胨10.0g、NaCl 75.0g、甘露醇 10.0g、酚红0.025g、琼脂15.0g、蒸馏水1000ml、PH 7.5 4、酵母菌选择性培养基:土豆浸出液4.0g、葡萄糖20.0g、琼脂15.0g、蒸馏水1000ml,PH 6.0,制作方法:加热溶解—PH调整—灭菌、加入10%酒石酸14ml 5、Lbs (LC)(乳杆菌培养基):琼脂 25g,蛋白胨 10g,肉膏10g,酵母浸膏5g,葡
萄糖20g,吐温-80 lml,K2HPO4 2g,醋酸钠5g,柠檬酸三氨2g,MgSO4·7 H兰州石化研究院2O 200mg,MnSO4·4 H2O 50mg,醋酸3.7ml,精制水1000ml。 加热溶解修正PH6.0至6.5,121.3℃,20分钟灭菌。待冷至50℃左右,加入醋酸。充分混合后,分注于平板。
6、优杆菌选择性培养基(CS培养基):成分及调整方法:基础EG培养基1000ml, CS 添加液50ml,L-半胱氨酸·HCl·H2O 0.5g,马血(羊血)50m l。充分混合后,分注于平皿中。
CS 添加液:丙酸钠30g,用约80ml 的灭菌蒸馏水溶解。将硫酸新霉素0.4g、粘菌素0.02g、硫酸链霉素1.0g、蒸馏水100ml溶解后,加入烧瓶中。再用灭菌蒸馏水将液体的总量补至100ml。
7、VS(韦荣氏小球菌):胰胨5g,酵母浸膏 3g,硫乙醇酸钠0.75g ,煌绿(0.1%)lml,吐温-80 1g,50%乳酸钠25ml,琼脂20g,夹竹桃霉素(1%)3ml,羊血50ml,PH7 5。后两者后加,倒成平板。
8、PMS(消化球菌、巨球形菌选择培养基):EG琼脂培养基1000ml,PMS添加液 10ml。
PMS添加液:结晶紫70mg,无粘菌霉素50mg,溶于100ml精制水内。
9、Bds(类杆菌选择性培养基):
配方一:EG琼脂培养基 1000ml,Bds+添加液 50ml。
EG琼脂培养基:牛心浸液930ml,胰胨10g,酵母浸膏5 g,Na2HPO4 4g,葡萄糖0.5g,可溶性淀粉0.5g,L-半胱氨酸0.2g(预先用智勇大冲关2009 1/10N HCl溶解),琼脂20g,L一半胱氨酸HCI.H2O 0.5g,羊血50ml,pH7.6至7.8。
除L一半胱氨酸及羊血以外的成份,加热溶解修正PH,121.3℃20分钟灭菌,冷至 50C时,加 L-半胱氨酸及血。
Bds添加液:牛磺胆酸钠 5g,加入 80ml温水中使之溶解,然后加 0.5%煌绿水溶液 l ml和新霉素1g,再以10%NaOH调PH使液体呈透明的绿为止。最后用精制水加至100ml。
配方二:
10、梭状芽孢杆菌选择性培养基
(NN培养基):蛋白胨40g、Na2HPO4g、KH2PO4 1.0g、NaCl 2.0g、MgSO4 0.1g、葡萄糖2.0g、琼脂25g、蒸馏水1000ml。PH 7.6
制作:加热溶解——PH调整——灭菌
添加液:纯卵黄液50ml、硫酸新霉素(2%)10ml混匀
11、梭菌选择性培养基(Clostrisel琼脂)李博祥?
Cd’(RCN)(梭菌选择性培养基):EG琼脂 1000ml,吐温80 0.5g,1%利福平(RifamPicin)0.5ml,1%粘杆菌素(Colimycin) l ml, 1%新霉素 20 ml, pH7.6。
除血、抗菌素外,加热溶解,冷至 50℃时,再加血及抗菌素。
制备:水浴中加热溶解,调PH7.0,121.3℃灭菌15分钟
12、EC(肠球菌培养基):胰胨2g,酵母浸膏0 05g ,葡萄糖0.2g ,Na2HPO4 0.04g,KH2PO4 0.04g,琼脂2g,精制水100ml,PH7.4。加热溶解修正PH,8磅15分钟灭菌,冷至45℃-50℃时加NaN3,TTC。NaN3 40mg(0.4mg/ml)和TTC10mg(0.1mg/m
l)。
13、BS(改良法)双歧杆菌选择培养基:西红柿汁(500g西红柿加1000ml水,熬成粘稠汁,纱布过滤,而后滤纸过滤,高压灭菌,4℃保存)200ml,蛋白胨15g,酵母浸膏6g,葡萄糖20g,NaCl 5g,吐温80 1g,可溶性淀粉0.5g,琼脂20g,精制水800ml。 溶解后,冷至 50C左右时,加 BS添加液 50ml,倒平板,PH6.8。
BS添加液:丙酸钠 30g 加 90ml水,充分溶解,然后加新霉素400mg,巴龙霉素100mg,氯化理6g,最后加精制水至100ml,冰箱内保存。
14、FS(梭杆菌选择性培养基):EG 1000ml,FS 添加液 10ml。
FS添加液:结晶紫 70mg,万古霉素 50mg,硫酸新霉素 300mg,溶于弱碱性水中,总量100ml。
15、稀释液配制:KH2PO4 4.5g Na2HPO4 6g ,L-半胱氨酸马俏0.5g,吐温-80 0.5g,琼脂 1g,精致水1000ml,121.3℃ 20分钟灭菌,备用。