Septin9基因甲基化检测
1. 3.5ml血浆+3.5ml 裂解液,涡旋混匀,RT静置1正硅酸乙酯
0min。 2. 加入90ul混匀磁珠、2.5ml无水乙醇,颠倒混匀5-6次,10-20rpm旋转混匀4非法侵入(01)0-50min。文史天地
3. 取下15ml离心管,置于磁力吸附架,弃上清。 陈颖异4. 加入1.5ml洗液A,涡旋重悬磁珠,转移到2.0ml离心管,置于磁力吸附架上。
5. 吸附磁珠,弃上清;短暂离心,再次吸弃上清。
6. 加入100ul洗脱液,涡旋混匀,80℃ 1000rpm震荡10min。
7. 短暂离心,置于磁力吸附架,收集洗脱液至新的2.0ml离心管。(4℃可保存24h,不可冷冻)
8. 加入150ul亚硫酸盐溶液、25ul保护液,涡旋混匀,80℃ 静置孵育40-50min。
9. 降温震荡仪至23℃;离心管中加入1000ul洗液A,20ul磁珠,涡旋混匀,23℃1000rpm震
荡40-50min。
10. 短暂离心,置于磁力吸附架,弃上清。
11. 加入83d打印赵州桥00ul洗液A,涡旋洗涤磁珠,离心吸附弃上清; 12. 吴郭鱼加入800ul洗液B,涡旋洗涤磁珠,离心吸附弃上清;
13. 加入400ul洗液B,涡旋洗涤磁珠,离心吸附弃上清;
14. 再次离心吸附弃上清x2。
15. 室温干燥10min。
16. 加入60ul洗脱液,涡旋混匀,23℃1000rpm震荡10 min。
17. 短暂离心,吸附。
PCR反应液:
每个反应配置32ulPCR反应液+1.6ulTaq酶。