用户手册
EpiMethy TM B isulfite Conversion Kit
User Manual
产品简介：
DNA甲基化是一种表观遗传修饰，DNA甲基转移酶（Dnmt）催化S-腺苷甲硫氨酸作为供体，将胞嘧啶转变为5-甲基胞嘧啶。CG二核苷酸是最主要的甲基化位点，它在基因组中呈不均匀分布，存在高甲基化、低甲基化和非甲基化三种状态。DNA甲基化能关闭某些基因的活性，去甲基化则诱导了基因的重新活化和表达。DNA甲基化对人类表观遗传、胚胎发育、基因印记、等位基因失活及肿瘤发生发展都起到重要作用。 EpiMethy TM Bisulfite Conversion Kit是一款用于DNA快速重亚硫酸盐转化处理的专用试剂。基因组DNA双链变性结链后，在重亚硫酸盐的作用下序列中为甲基化的胞嘧啶（C）转变成尿嘧啶（U），而甲基化的C保持不变。通过后续的各种检测手段，如MSP、BSP、HRM、Pyroseqencing及甲基化芯片等，将甲基化状态的差异转变成DNA序列的差异被检测出来，从而确定基因的CpG甲基化状态。 本试剂盒提供了重亚硫酸盐转化实验所需试剂和DNA纯化回收过程中所需的优化缓冲液，可获得臻于
完美的DNA转化效果和回收效率。与其他同类试剂盒相比，具有如下优势：
�适用于各种样本类型。
�在3小时内完成富含GC的DNA的完全转化，转化效率高达99.9%。
�独特的保护剂最大限度地避免DNA降解，保障了后续的检测实验的需求。
�优化的缓冲液体系能最大限度的提高处理后的DNA回收效率。
�优化的操作步骤适合多种起始样本和起始量。
抽象函数
产品包装：
达尔富尔问题
EpiMethy TM B isulfite Conversion Kit
（Kit Size）MD2301-1
（10次）
MD2301-5
（50次）
M-Conversion Reagent1Tube5Tubes
M-Dilution Buffer300ul 1.5ml
M-Dissolving Buffer100ul500ul
M-Binding Buffer6ml30ml
M-Wash Buffer6ml30ml
M-Desulphonation Buffer2ml10ml
M-Elution Buffer400ul2ml
甲基丙烯酸烯丙酯F-Spin Columns10ct.50ct.髋骨
Collection Tubes10ct.50ct.
Instruction Manual11
贮藏条件：
室温保存。溶解后的M-Conversion Reagent溶液最多在-20℃存放一个月，M-Conversion Reagent 对光敏感，保存和使用过程中要尽量避光。
需自备的试剂及仪器：
�蒸馏水或去离子水
�无水乙醇
�离心机
�PCR仪或水浴锅
�移液器
使用说明：
A.试剂准备
�M-Conversion Reagent的制备
本试剂盒中所提供的M-Conversion Reagent是固体混合物，需要在首次使用前制备，制备方法如下：取一管M-Conversion Reagent短暂离心后，加入920ul ddH2O、300ul M-Dilution Buffer和10
0ul M-Dissolving Buffer。室温下震荡或颠倒混匀2分钟，直至M-Conversion Reagent充分溶解。
密云地震M-Conversion Reagent对光敏感，保存和使用过程中要尽量避光。每管M-Conversion Reagent
是针对10次DNA处理设计的。为了得到较好的结果，M-Conversion Reagent应当在制备后立即使
用。如果不立刻使用，M-Conversion Reagent溶液可在室温下放置过夜、在4℃存储一周、在-20C
存储一个月，再次使用前要在室温下解冻，且震荡或颠倒混匀2分钟。
�M-Wash Buffer的制备
在首次使用前，对于MD2301-5（50次）添加22ml无水乙醇到30ml M-Wash Buffer中来制备
mmpi-2
M-Wash Buffer工作液。对于MD2301-1（10次）添加4.4ml无水乙醇到6ml M-Wash Buffer中来
制备M-Wash Buffer工作液。
B.操作步骤
每次制备的DNA范围在500pg-2ug之间，推荐最佳修饰量为500ng-1ug。
1.在PCR管中加入20ulDNA样品，然后加入150ul M-Conversion Reagent溶液，轻弹PCR管或 用吹打混匀样品。
�如果DNA样品的体积小于20ul，则用水来弥补差量。例如，5ul DNA样品，需要加入15ul水和150ul M-Conversion Reagent溶液。
�如果DNA样品的体积大于20ul，则需要调整M-Conversion Reagent溶液配制过程中的水的用量。通常，每增加10ul DNA样品，溶解M-Conversion Reagent时加入的水要随之减少100ul。
例如，40ul DNA样品，需要在配制M-Conversion Reagent时加入的水为720ul、MC2和M-Di ssolving Buffer不变，分别为300ul和100ul。溶解好之后，取130ul M-Conversion Reage nt溶液加入到40ul DNA溶液中。
2.将PCR管放到PCR仪或水浴中并按以下步骤操作：
98℃放置10分钟，64℃放置2.5小时，然后立刻进行下述操作或在4℃下存储（最多不超过2 0小时）。
3.将F-Spin Column组装到试剂盒所提供的Collection Tube中，向柱中添加600ul M-Binding B
uffer，然后将步骤2中处理后的DNA加入到柱中，盖紧管盖颠倒数次以混匀样品。
4.全速（>10000g）离心30秒，弃滤液。
5.添加200ul的M-Wash Buffer到柱中，全速离心30秒，弃滤液。
6.添加200ul的MC4到柱中，室温（20-30℃）静置20分钟，全速离心30秒，弃滤液。
7.添加200ul的M-Wash Buffer到柱中，全速离心1分钟，弃滤液。
8.将柱放置在新的1.5ml的Collection Tube中，加入30ul的65℃预热的M-Elution Buffer到柱
基质中，室温静置1min，全速离心1分钟来洗脱DNA。
9.DNA可立刻进行分析，或存储于-20℃下以备后用。我们建议您对于每次PCR使用5ul洗脱的
DNA作为模板进行扩增。
修饰后DNA的纯化流程：
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
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