荧光显微镜检测方法（以96孔板，A549贴壁细胞为例） 细胞培养
取对数生长期细胞，以每孔4×103~1×105细胞接种于96孔板中，培养至正常生长阶段。丙烯酸乙酯
药物处理
EdU标记
1.1 用细胞培养基按1000：1的比例稀释EdU溶液 (试剂A)，制备适量50μM EdU培养基；
注：1）如果需配置10μM EdU培养基，需调整为5000：1稀释比例；
2）配置好的培养基的保存时间取决于培养基的性质，如LB培养基 4℃ 可稳定保存两周。
1.2 每孔加入100μL 50μM EdU培养基孵育2小时，弃培养基； 注：1）EdU培养基用量以没过细胞为宜(表1)；
2）最佳孵育时间与细胞周期相关（表2），大多数细胞系可采用2小时孵育时间；
3）EdU浓度与孵育时间相关，短时间孵育（<30min）宜采用高浓度（50 μM），长时间孵育（>24h）宜采用低浓度（1 μM），最佳孵育浓度需要优化。
1.3 PBS清洗细胞1~2次，每次5分钟。
注：清洗目的是将未渗入DNA的EdU洗脱，清洗方式依据不同的细胞类型而定，贴壁不牢的细胞请降低清洗强度。
细胞固定化
2.1 每孔加入100μL 细胞固定液 (即含4% 多聚甲醛的PBS)室温孵育30分钟；
注：1）低浓度的多聚甲醛有利于细胞结构的保持，当需要抗体染时，需采用Triton X-100透化细胞以利于抗体染料进入细胞内。
2）可采用其他方式进行细胞固定。
2.2 每孔加入2 mg/mL 甘氨酸，脱摇床孵育5分钟后，弃甘氨酸溶液；
注：作用是中和多聚甲醛，当采用其他方式进行细胞固定时可省略此步骤；
2.3 每孔加入100 μL PBS，脱摇床清洗5分钟，弃PBS；
2.4 （加强）每孔加入100μL渗透剂(0.5% TritonX-100的PBS)脱摇床孵育10分钟；PBS清洗1次，5分钟。
注：当实验需要进行其他抗体染，或由于某些细胞类型对染料的吸附性较高，可能需要增强细胞膜通透性。
Apollo染
3.1 每孔加入100 μL的1X Apollo®染反应液（表3），避光、室温、脱摇床孵育30分钟后，弃染反应液；
注：染液用量与细胞培养体积相关，以覆盖细胞为宜（表1）。
3.2 加入100 μL渗透剂(0.5% TritonX-100的PBS) 脱摇床清洗2~3次，每次10分钟，弃渗透剂；
3.3 （加强）每孔每次加入100 μL 甲醇清洗1~2次，每次5分钟；PBS清洗1次，每次5分钟。
中国建设监理协会
注：由于某些细胞对染料的吸附性较高，需采用加强方式洗脱以降低染料背景。
过继转移DNA染
刘怀元
4.1 用去离子水按100：1的比例稀释试剂F，制备适量1X Hoechst33342反应液，避光保存；
4.2 每孔加入100 μL 1X Hoechst 33342反应液，避光、室温、脱摇床孵育30分钟后，弃染反应液；
4.3 每孔每次加入100 μL PBS清洗1~3次；
4.4 客户可选择进行其他染步骤，否则每孔加入100 μL PBS保存待用。
鼓词
其他染(自备)
澳门特别行政区区旗的含义（可选）客户可以根据实验需要进行细胞表面或细胞内抗原的抗体染（注：染料兼容性请参照表4）。
图像获取及分析
染完成后，建议立即进行观测；如果条件限制，请避光 4℃ 湿润保存待测，但不应超过3天。
注：调试仪器时，请将曝光时间调整为30ms左右，尽量不要>1s。
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