1、细胞传代、细胞计数、细胞增殖-毒性实验步骤：组合营销
实验准备：用75%酒精擦生物平安柜台面2遍，紫外线消毒30分钟〔、头、15ml及50ml离心管、剪刀、封口膜、记号笔、打火机、酒精灯、培养瓶〕，复温实验所需试剂[细胞培养液〔DMEM、1640〕、磷酸缓冲盐溶液〔PBS〕、胰酶〔0.25% Trypsin-EDTA〕、胎牛血清〔FBS〕、双抗]，所有的试剂、仪器放入生物平安柜前要用酒精喷洒消毒。显微镜下看细胞生长状态，有无污染。 1〕倒去培养瓶内的培养液；
2〕参加PBS 2ml洗涤培养瓶内细胞2次；
3〕参加胰酶500ul/0.5ml 2～10min〔具体时间因细胞而异，可在显微镜下看是否贴壁，必要时轻拍培养瓶促使细胞脱落〕；
4〕参加含10%FBS的培养液1～1.5ml[培养液：胰酶=〔2～安徽省经济委员会3〕:1]中和胰酶；
叶嘉莹
5〕轻轻吹打成单细胞悬液，吹打力度以不起气泡为宜；
6〕将单细胞悬液吸入10～15ml离心管中，低速离心800rpm 3分钟，倒去上清液；
7〕参加含10%FBS细胞培养液1～2ml吹打悬浮细胞至单细胞悬液；
8〕吸取20ul细胞悬液〔10ul细胞悬液+10ul台盼兰液：给坏死细胞染，判断细胞活力〕至细胞计数板，进行细胞计数；
CCK-8实验：
9〕在96孔板中，给每孔加100μtpaL〔约7000个〕的细胞悬液，将培养板放在培养箱预培养24-72小时〔37℃，5%CO2〕，使细胞贴壁；
10〕向培养板中参加10μL不同浓度〔5、10、20、40、80、160ug/ml〕的待测药物； 11〕将培养板在培养箱孵育一段适当的时间24小时〔例如：6、12、24或48小时〕〔药物起作用〕；
注意：如果待测物质有氧化性或复原性的话，可在加CCK之前更换新鲜培养基〔除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后参加新的培养基〕，去掉药物影响。当然药物影响比拟小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中参加药物后的空白吸收即可。
12〕向每孔参加10μL〔约10%〕 CCK-8溶液〔注意不要再孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数〕；
13〕将培养板在培养箱内孵育1～4小时〔半小时测一次OD值〕；
14〕用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
15〕假设暂时不测定OD值，可以向每孔中参加10μL 的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下24小时内测定，吸光度不会发生变化。
测定待测定药物〔6个浓度〕对肺癌A549细胞增殖的影响，实验加样〔最外围的36孔加PBS液，实际上可用60个孔〕：
分组 | | 浓度〔ug/ml〕 |
实验组 A加药 | GO-CHI-HA-SNX-2112 细胞+培养基+药物+CCK-8 | 5 ●●● ●● | 10 ●●●●● | 20 ●●●●● | 40 ●●●●● | 80 ●●●●● | 160 欺实马●●●●● |
A0加药 | swi.t细胞+培养基+CCK-8，无药物 | ●●●●● | | | | | |
A空白 | 培养基+CCK-8，无细胞、药物 | ●●●●● | | | | | |
可不做 | 药物+培养基+CCK-8，无细胞 | ●●● ●● | ●●●●● | ●●●●● | ●●● | ●●●●● | ●●●●● |
| | | | | | | |
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议