第４１卷湖北师范大学学报（自然科学版）Ｖｏｌ ４１第１期ＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｕｂｅｉＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ）Ｎｏ １，２０２１
甘油对红曲菌甘油及碳源代谢关键酶酶活的影响石 佳１，２，３，４，赵 薇１，２，３，４，鲁 瑾１，２，３，４，王文娟１，２，３，４，余 翔１，２，３，４，冯艳丽１，２，３，４ （１．特野菜良种繁育与综合利用技术湖北省工程研究中心，湖北黄石 ４３５００２；
２．湖北师范大学食用野生植物保育与利用湖北省重点实验室，湖北黄石 ４３５００２；
３．湖北师范大学生命科学学院，湖北黄石 ４３５００２；
４．湖北师范大学生物学国家级实验教学示范中心，湖北黄石 ４３５００２）
摘要：以丛毛红曲菌（Ｍｏｎａｓｃｕｓｐｉｌｏｓｕｓ）ＭＳ－１为实验菌株，考察合成培养基中甘油浓度对红曲菌碳源及甘
油代谢关键酶酶活的影响。结果表明，发酵过程中各处理发酵液ｐＨ均在３．５～７．５之间，且呈先降后升趋
势，发酵液体积呈下降趋势。在发酵的前９ｄ，普遍表现为甘油浓度为１ｇ／Ｌ和４０ｇ／Ｌ的处理中甘油及碳
源代谢关键酶酶活高于对照及甘油浓度为１６０ｇ／Ｌ的处理中相关酶活，在发酵后期则普遍出现相反的现
象。甘油可影响红曲菌的碳源及甘油代谢关键酶酶活，进而影响红曲菌生长及代谢产物产生。该研究结
果可为深入探讨甘油影响红曲菌代谢产物产生的分子机制奠定基础。
关键词：红曲菌；甘油；红曲素；碳源代谢；关键酶
中图分类号：Ｑ９３９．９７ 文献标志码：Ａ 文章编号：２０９６－３１４９（２０２１）０１－００１７－０９
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．２０９６－３１４９．２０２１．０１．００３
０ 前言
红曲菌（Ｍｏｎａｓｃｕｓｓｐｐ．），又称红曲霉，是我国重要的药食同源微生物，其淀粉质原料的发酵产品———红曲在我国有２０００多年的应用历史［１，２］。红曲菌在工业生活的应用主要是红曲素（Ｍｏｎａｓ ｃｕｓｐｉｇｍｅｎｔｓ，ＭＰｓ）的应用［３］。ＭＰｓ在食品工业主要用于发酵豆制品、红曲米酒及干制鱼、肉制品等的着［４］，保健食品［５］、替代肉品加工中的部分亚硝酸盐等［６］。在生产ＭＰｓ的过程中发现，甘油可促进红曲菌产生ＭＰｓ，但其作用机制不明确［７～９］。
甘油可作为碳源用于微生物发酵，但不同微生物对甘油的代谢和利用也不同。已有研究表明，以蔗糖为主要碳源时添加甘油可促进红曲菌生长、ＭＰｓ和莫纳可林Ｋ（ＭｏｎａｃｏｌｉｎＫ，ＭＫ）的产生，且甘油可影响红曲菌合成ＭＰｓ和ＭＫ关键基因的表达，但具体机制并不清楚［８～１０］。甘油代谢主要涉及４种酶，分别是甘油脱氢酶（Ｇｌｙｃｅｒｏｌｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ，ＧＤＨ）、甘油脱水酶（Ｇｌｙｃｅｒｏｌｄｅｈｙｄｒａｔａｓｅ，ＧＤＨｔ）、二羟基丙酮激酶（Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙａｃｅｔｏｎｅｋｉｎａｓｅ，ＤＨＡＫ）和１，３－丙二醇氧化还原酶（１，３－ｐｒｏｐａｎｅｄｉｏｌｄｅｈｙ ｄｒｏｇｅｎａｓｅ，ＰＤＯＲ）［１１，１２］。近年来，有关碳源对微生物代谢的影响也有大量报道，主要包括碳源对微生物代谢产物的影响［１３，１４］及与碳源代谢相关基因的研究［１５，１６］等，未见甘油影响红曲菌碳源代谢的相关研究。课题组在合成培养基条件下，分析了甘油对红曲菌产ＭＰｓ的影响，还对影响红曲菌代谢产物产生的碳源选择性进行了研究［１０］。然而，甘油对红曲菌碳源代谢的影响效应并不清楚。
本研究从甘油代谢途径和红曲菌碳源代谢途径涉及关键酶的酶活探讨甘油对红曲菌发酵过程的影响。甘油代谢主要涉及４种酶，分别是ＧＤＨ、ＧＤＨｔ、ＤＨＡＫ和ＰＤＯＲ，但通常仅监测ＧＤＨ、ＧＤＨｔ、ＰＤＯＲ的酶活。红曲菌碳源代谢涉及的酶主要是β－半乳糖苷酶和葡萄糖激酶。本研究主要在前期
收稿日期：２０２０－０８－１８
基金项目：湖北省教育厅科研计划项目重点项目（Ｄ２０１９２５０２），食用野生植物保育与利用湖北省重点实验室开放基金（ＥＷＰＬ２０１８０７），湖北师范大学科研创新团队项目（２０１９ＣＺ０７）
作者简介：石 佳（１９９８— ），女，山西晋中人，在读硕士研究生，研究方向为食品微生物．
通讯作者：冯艳丽（１９８１— ），女，河南周口人，副教授，博士，硕士生导师，研究方向为食品发酵，Ｅ－ｍａｉｌ：ｆｅｎｇｙａｎｌｉ＠ｈｂｎｕ．ｅｄｕ．ｃｎ．
研究的基础上［１０］
，探讨在合成培养基条件下，甘油对红曲菌甘油及碳源代谢关键酶酶活的影响，为后
续开展红曲菌利用甘油及甘油影响红曲菌代谢产物产生的分子机制提供依据。１ 材料与方法
１．１ 实验材料
丛毛红曲菌（Ｍ．ｐｉｌｏｓｕｓ）ＭＳ－１（ＣＣＴＣＣＭ２０１３２９５，中国典型培养物保藏中心）是从市售红曲
产品中分离获得的可高产ＭＰｓ及Ｍ
Ｋ且不产桔霉素的菌株。土豆等均为市售。１．２ 仪器设备
ＦＳＨ－２型可调高速电动匀浆器，金坛市江南仪器厂；ＵＶ１９００型紫外分光光度计，日本岛津公司；
５４２７Ｒ型台式高速离心机，德国ｅｐｐａｎｄｏｒｆ；ＨＺＱ－Ｆ１６型振荡培养箱，哈尔滨市东联电子技术开发有限公司。其余设备均为常规小型实验室设备。内外接
１．３ 试剂及溶液
葡萄糖、蔗糖、甘油、ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ、ＫＣｌ、ＦｅＳＯ４、盐酸、ＮａＯＨ、Ｋ２ＨＰＯ４·３Ｈ２Ｏ、ＫＨ２ＰＯ４
、乙酸钠、盐酸３－甲基－２苯并噻唑酮腙（ＭＢＴＨ）、（ＮＨ４）２ＳＯ４、Ｆｅ（ＮＨ４）２（ＳＯ４）２、Ｋ２ＣＯ３、ＫＨＣＯ３
、１，２－丙二醇、柠檬酸钾、柠檬酸、酚试剂、１，３－丙二醇（ＰＤＯ）、ＮａＨ２ＰＯ４·２Ｈ２Ｏ、Ｎａ２ＨＰＯ４·１２Ｈ２Ｏ、Ｎａ２ＣＯ３
、三（羟甲基）氨基甲烷Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ及ＭｇＣｌ２均为国产分析纯试剂。谷氨酸钠、
琼脂粉、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、（ＮＡＤ）、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（ＮＡＤＰ）及辅酶Ｂ１２
均为国产生物试剂。二硫苏糖醇、邻－硝基苯酚、邻硝基苯β－Ｄ－半乳吡喃糖苷、腺苷三磷酸（ＡＴＰ）和葡萄糖－６－磷酸脱氢酶均为高级纯，
其中二硫苏糖醇、葡萄糖－６－磷酸脱氢酶（Ｇ－６－ＰＤＨ）和腺苷三磷酸（ＡＴＰ）生产商为ＢＣｍＥＩ，其
余为国产试剂。
１．４ 培养基
ＰＤＡ培养基：将２００ｇ马铃薯去皮切块（约２ｃｍ３），加入１０００ｍＬ蒸馏水煮沸３０ｍｉｎ．冷却后过
滤，滤液加蒸馏水补足至１０００ｍＬ．加入２０ｇ葡萄糖搅拌均匀。加入２０ｇ琼脂至充分溶解，自然ｐ
Ｈ．分装至茄形瓶中，每瓶１００ｍＬ，１×１０５Ｐａ灭菌２
０ｍｉｎ．发酵培养基：蔗糖６０ｇ／Ｌ，１０ｇ／Ｌ谷氨酸钠，０．０００７ｍｏｌ／ＬＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ，１ｇ／ＬＫ２ＨＰＯ４
，０．５ｇ／ＬＫＣｌ，０．０５ｇ／ＬＦｅＳＯ４
，调节ｐＨ为６．０，１×１０５Ｐａ灭菌２０ｍｉｎ．１．５ 孢子悬液的制备及红曲液态发酵
接种红曲菌的ＰＤＡ斜面在２８℃培养１０ｄ，加入１０ｍＬ无菌水。用无菌接种铲刮取孢子，将孢子
悬液滤入装有玻璃珠的无菌锥形瓶中。调整孢子浓度为１０６ｃｆｕ／ｍＬ．将孢子悬液接入装有５
朋友网０ｍＬ培养基的２５０ｍＬ三角瓶中，接种量为１
０％（ｖ／ｖ）。在３０℃、１３０ｒ／ｍｉｎ培养３ｄ后调整温度为２５℃，继续培养至１
５ｄ．１．６ 红曲菌液态发酵产物中粗酶液的制备
结合前期研究基础［１０］，分别将发酵培养基中甘油浓度调整至１ｇ／Ｌ、４０ｇ／Ｌ和１６０ｇ／Ｌ，接种量及
培养条件同“１．５孢子悬液的制备及红曲液态发酵”，每隔３ｄ取样（每个处理取出３瓶进行分析），检
测甘油脱氢酶、１，３－丙二醇氧化还原酶、甘油脱水酶、β－半乳糖苷酶、葡萄糖激酶酶活，至第１
５ｄ（设置３个平行）
。粗酶液的制备：过滤发酵液，将收集到的菌丝体保存在５０ｍｍｏｌ／Ｌ磷酸钾缓冲液（ｐＨ７．０，含有
２ｍｍｏｌ／Ｌ二硫苏糖醇）中，然后用组织匀浆机（每次６ｓ，间歇３ｓ，共进行３次）进行破碎，释放胞内酶，
最后在８０００ｒ／ｍｉｎ条件下离心１０ｍｉｎ，所得上清液即为胞内酶粗提液，该粗酶液用于后续实验中酶活分析。采用过滤后的发酵液测定胞外酶的酶活。
１．７ 甘油对红曲菌发酵过程中甘油代谢关键酶酶活的影响
１．７．１ 甘油脱氢酶酶活的测定 采用分光光度法测定甘油脱氢酶的酶活［１７］，该反应液总体积为
１．５ｍＬ，包括２５ｍｍｏｌ／Ｌ（ＮＨ４）２ＳＯ４、１μｍｏｌ／ＬＦｅ（ＮＨ４）２（ＳＯ４）２
、０．２ｍｏｌ／Ｌ甘油、１．２ｍｍｏｌ／ＬＮＡＤ
以及适量保存于０．１ｍｏｌ／ＬＫ２ＣＯ３缓冲溶液（
ｐＨ９．８）中的待测液。用紫外分光光度计于３０℃，３４０ｎｍ波长下，测定１ｍｉｎ内的吸光度值。１个酶活单位（Ｕ）的定义是指在该条件下１ｍｉｎ内消耗１μｍｏｌ底物所需要的酶量。
酶活计算公式如下：
酶活力单位（Ｕ／ｍＬ）＝（ＶＴ×△Ａ／△ｔ×Ｋ）／（ε×ＶＳ×
中国图书馆学会
Ｌ）其中，Ｋ指样品稀释倍数；ＶＴ指１．５ｍＬ的总体积；ＶＳ指０
．０６ｍＬ的样品体积；ε指摩尔吸光系数，ＮＡＤＨ在３４０ｎｍ处的毫摩尔消光系数为６．２２；Ｌ指１ｃｍ光径的比杯；△Ａ／△ｔ指１ｍ
ｉｎ内变化的吸光度值。
甘油脱氢酶酶活力单位（Ｕ／ｍＬ）＝８．０４×△Ａ／△ｔ
１．７．２ 甘油脱水酶酶活的测定 采用分光光度法检测甘油脱水酶的酶活，因甘油脱水酶的反应需依
赖易见光分解的辅酶Ｂ１２
，测定该酶活须在避光条件下进行［１８］。１ｍＬ的反应液：ＫＣｌ５０ｍｍｏｌ／Ｌ、１，２－丙二醇０．２ｍｏｌ／Ｌ、辅酶Ｂ１２１
５μＭ、磷酸钾缓冲液（ｐＨ７．０）０．０３５ｍｏｌ／Ｌ和适量细胞抽提液。首先在３７℃下保温１０ｍｉｎ，然后加入１ｍＬ的０．１ｍｏｌ／Ｌ柠檬酸钾缓冲液（ｐＨ３．６）和０
．５ｍＬ的０．１％ＭＢＴＨ（盐酸３－甲基－２苯并噻唑酮腙）溶液，然后在３７℃下保温１５ｍｉｎ，最后加入１ｍ
Ｌ的蒸馏水，用紫外分光光度计于３０５ｎｍ处测定１ｍｉｎ内的吸光度值。１个酶活单位（Ｕ）的定义是指在上述条件
下１ｍｉｎ内生成１μｍｏｌ１，３－丙二醇所需的酶量。
酶活力计算：甘油在甘油脱水酶的催化作用下脱水生成２－羟基丙酮，该物质可与Ｍ
ＢＴＨ发生显反应，因此甘油脱水酶的酶活可以通过终点法测定。首先在ｐＨ７．０、３７℃的条件下，底物、酶与辅
酶Ｂ１２
共反应１０ｍｉｎ，接着加入柠檬酸钾缓冲液以终止反应，然后加入的ＭＢＴＨ在３０５ｎｍ处与２－羟基丙酮发生显反应。但是ＭＢＴＨ显法并不能直接用来测甘油脱水酶酶活，这是因为甘油脱水酶
受甘油的影响，在３ｍｉｎ之内完全丧失酶活。由于甘油脱水酶催化１，２－丙二醇与甘油这两种底物的
反应速率呈正相关，因此可采用３个１ｍｉｎ终点法来测甘油脱水酶的酶活，即在加入辅酶Ｂ１２
起始反应后的１ｍｉｎ、２ｍｉｎ和３ｍｉｎ内终止反应，并测量１，２－丙二醇与甘油的反应速率，两者比值为１
．４１，ＭＢＴＨ的摩尔吸光系数为１３．２２Ｌ／ｍｍｏｌ／ｃｍ．根据以上原因，Ｆｏｒｇｅ等推导所得酶活计算公式为：
甘油脱水酶活力单位（Ｕ／ｍｌ）＝０．５３×Ａ３０５
１．７．３ １，３－丙二醇氧化还原酶酶活的测定 采用分光光度法检测１
，３－丙二醇氧化还原酶的酶活［１８，１９］，测定该酶活的反应液总体积为１．５ｍＬ，包括２５ｍｍｏｌ／Ｌ（ＮＨ４）２ＳＯ４、１μｍｏｌ／ＬＦｅ（ＮＨ４）２（ＳＯ４）２、０．１ｍｏｌ／Ｌ的ＰＤＯ、１．２ｍｍｏｌ／ＬＮＡＤ以及适量保存于０．１ｍｏｌ／ＬＫ２ＣＯ３缓冲液（
ｐＨ９．８）中的待测液。用紫外分光光度计在３０℃、３４０ｎｍ处测量１ｍｉｎ内的吸光度值。１个酶活单位（Ｕ）的定义
是指在该条件下１ｍｉｎ内消耗１μｍｏｌ底物所需要的酶量。
ＰＤＯＲ活力的计算方法：
ＰＤＯＲ活力单位（Ｕ／ｍＬ）＝Ｄ×Ｖ×（△Ａ／△ｔ）／ε×
Ｌ×ｖＤ指稀释倍数；Ｖ指１．５ｍＬ的总体积；ｖ指０．０６ｍＬ的样品体积；ε指摩尔吸光系数，
ＮＡＤＨ在３４０ｎｍ处的毫摩尔消光系数为６．２２；Ｌ指０．１ｃｍ光径的比杯；△Ａ／△ｔ指单位时间内的Ｏ
Ｄ变化值。ＰＤＯＲ的作用是将还原３－羟基丙醛（３－Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｉｏｎａｌｄｅｈｙｄｅ，３－ＨＰＡ）生成ＰＤＯ，由于３－ＨＰＡ极不稳定，因此采用逆反应方法测量该酶活力。Ｄａｎｉｅｌ等研究发现，来自菌种Ｃ
ｉｔｒｏｂａｃｔｅｒｆｒｅｕｎｄｉｉ的ＰＤＯＲ还原丙醛反应的速率是还原３－ＨＰＡ的２１％．Ｆｏｒａｇｅ等研究发现，来自Ｋ
．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ的ＰＤＯＲ对丙醛的还原与对ＰＤＯ的氧化反应速率比为０．８３．由此采用测定ＰＤＯ的反应速率，利用转化
因数：
０．８３／０．２１＝３．９５，来计算得到ＰＤＯＲ的活力。１，３－丙二醇氧化还原酶酶活力单位（Ｕ／ｍＬ）＝３１．７６×△Ａ／△ｔ
１．８ 甘油对红曲菌发酵过程中碳源代谢关键酶酶活的影响青藏线的风
１．８．１ β－半乳糖苷酶酶活的测定 β－半乳糖苷酶能够水解邻硝基苯β－Ｄ－半乳吡喃糖苷（ＯＮ ＰＧ），主要是在酶的作用下ＯＮＰＧ发生糖苷键断裂，生成黄的邻－硝基苯酚（ＯＮＰ）和β－Ｄ－吡喃
半乳糖，由于ＯＮＰ的含量与其颜深浅与呈正比，因此可用紫外分光光度计，于４
２０ｎｍ处测定ＯＮＰ
的吸光度值［２０］。
首先取１ｍＬ２ｍｇ／ｍＬ的ＯＮＰＧ作为底物，在３７℃下预热１０ｍｉｎ，然后在底物中加入粗酶液
１ｍＬ，３７℃下保温２５ｍｉｎ，接着加入５ｍＬ、０．１５ｍｏｌ／Ｌ的碳酸钠溶液终止酶和底物的反应，于４
国家社科基金2017公示２０ｎｍ处测定待测产物的吸光度值［２１］。１个酶活单位（Ｕ）的定义是指在１Ｌ的总体系内反应１ｍ
ｉｎ释放１μｍｏｌＯＮＰ所需要的酶量。标准校正曲线由已知浓度的Ｏ
ＮＰ溶液计算所得，ＯＮＰ校正曲线如图１．该方程式如下：
ｙ＝１．０４４２ｘ＋０．０２０１，Ｒ２
＝０．９９９．酶活力计算公式为：Ｙ＝Ｄ×Ｃ×７Ｔ×１０
Ｙ指酶活力／（Ｕ／Ｌ）；Ｄ指稀释倍数；Ｃ指ＯＮＰ的浓度／（μ
ｍｏｌ／Ｌ）；７指反应体积／ｍＬ；Ｔ指反应时间／ｍｉｎ；１０指总的样品体积／ｍＬ．
图１
ＯＮＰ校准曲线１．８．２ 葡萄糖激酶酶活的测定 采用分光光度法检测葡萄糖激酶的酶活，反应体系包括：
美国次贷危机的原因１．６ｍＬ的三（羟甲基）氨基甲烷溶液、
０．８ｍＬ的ＡＴＰ溶液、０．８ｍＬ的ＮＡＤＰ溶液和０．８ｍＬ的氯化镁溶液［２２］。首先取３．２ｍＬ的反应体系，然后加入５６μＬ的Ｇ－６－ＰＤＨ和１００μＬ的待测液，混合为溶液①，接着
将溶液①与０．８ｍＬ的葡萄糖溶液，分别在２５℃条件下保温５ｍｉｎ，最后将二者混合（总体积为
４．１５６ｍＬ），用紫外分光光度计于３
４０ｎｍ处测定的吸光度值。酶活力计算
酶活力单位（Ｕ／ｍＬ）＝（ＶＴ×△Ａ／△ｔ×Ｋ）／（ε×ＶＳ×
Ｌ）其中，Ｋ指样品稀释倍数；ＶＴ指４
．１５６ｍＬ的总体积，本实验中为２．０７８；ＶＳ指０
．１ｍＬ的样品体积；ε：摩尔吸光系数，ＮＡＤＨ在３４０ｎｍ处的毫摩尔消光系数为６．２２；Ｌ指１ｃｍ的光径比杯；△Ａ／△ｔ指每分钟吸光度变化值。
葡萄糖激酶酶活力单位（Ｕ／ｍＬ）＝６．６８×△Ａ／△ｔ
２ 结果与分析
２．１ 甘油对发酵液ｐＨ、体积的影响
检测甘油对发酵液ｐＨ及体积的影响，每３ｄ取样１次，结果如图２和图３所示。
图２
甘油对发酵液ｐＨ的影响 图３ 甘油对发酵液体积的影响
由图２可知，４种培养基发酵液ｐＨ在３．５～７．５之间。发酵至第６ｄ开始，甘油浓度为４０ｇ／Ｌ和１６０ｇ／Ｌ的处理发酵液ｐＨ均低于对照和甘油浓度为１ｇ／Ｌ的发酵液ｐＨ．主要是由于红曲菌利用甘油后产生了小分子酸［２］。在发酵过程中，发酵液ｐＨ的上升可能与ＭＰｓ本身具有碱性及极性有关［２３］。通过监测发酵液的ｐＨ可反应红曲菌对碳源的利用情况，因红曲菌在利用碳源过程中可产生小分子酸［２］。
由图３可知，随着发酵时间的延长，发酵液体积逐渐减少，且添加甘油的处理，所得发酵液体积大于对照。发酵液体积下降主要是因为发酵前期红曲菌生长代谢旺盛，对水分消耗量较大，且菌丝体中含水量较高（约为８０％）。发酵过程中出现发酵液体积轻微上升可能是因为菌丝体自溶造成的［２４］。通过监测发酵液的体积，可以从侧面了解红曲菌的生长情况，也是对已有研究结果的验证。
２．２ 甘油对红曲菌发酵过程中甘油代谢关键酶酶活的影响
２．２．１ 甘油对红曲菌发酵过程中甘油脱氢酶酶活的影响 采用分光光度法检测发酵过程中甘油对红曲菌发酵过程中甘油脱氢酶酶活的影响，每３ｄ取样１次，结果如图４所示。
Ａ胞外酶活 Ｂ胞内酶活
图４ 甘油对红曲菌发酵过程中甘油脱氢酶酶活的影响
由图４可知，胞外酶活显著低于胞内酶活（ｐ＜０．０５），说明甘油脱氢酶主要存在于胞内，这与已有的文献报道相符［１８，２５］。由图４Ｂ可知，发酵过程的前９ｄ，甘油浓度为１ｇ／Ｌ和４０ｇ／Ｌ的处理胞内酶活高于对照和甘油浓度为１６０ｇ／Ｌ的处理中甘油脱氢酶酶活。发酵至第９ｄ以后甘油浓度为１６０ｇ／Ｌ的处理所得甘油脱氢酶的酶活最高。推测在红曲菌生长前期，培养基中甘油浓度为１ｇ／Ｌ和４０ｇ／Ｌ可促进红曲菌的生长及代谢，促使甘油脱氢酶酶活增加。而甘油浓度达１６０ｇ／Ｌ可造成培养基渗透压过高，造成红曲菌生长缓慢［２６］，红曲菌对甘油的利用速率也较慢，使得发酵前期甘油脱氢酶的酶活较低。随着发酵时间的延长，甘油逐渐被红曲菌利用而浓度下降，此时红曲菌加速对甘油的利用促使酶活增加。另外，由于甘油脱氢酶是甘油转化为生物量或进入氧化代谢途径的关键酶，该酶活的变化反映了红曲菌对培养基中甘油浓度变化的响应［２７］。
２．２．２ 甘油对红曲菌发酵过程中１，３－丙二醇氧化还原酶酶活的影响 采用分光光度法检测甘油对红曲菌发酵过程中１，３－丙二醇氧化还原酶酶活的影响，每３ｄ取样１次，结果如图５所示。
Ａ胞外酶活 Ｂ胞内酶活
图５ 甘油对红曲菌发酵过程中１，３－丙二醇氧化还原酶酶活的影响
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