血清甘油三酯酶试剂法测定法

血清甘油三酯酶试剂法测定法
1. 实验原理
脂蛋白酯酶(LPL)、甘油激酶(GK)、甘油-3-磷酸氧化酶(GPO)、过氧化物酶(POD)Trinder反应偶联比终点法。
反应式如下:
              LPL
甘油三酯 + H2O        甘油 + 脂肪酸
GK
甘油 +  ATP          甘油-3-磷酸 +  ADP
                GPO
甘油-3-磷酸 + O2          二羟丙酮磷酸 + H2O2
                            POD
2H2O2 + 4-氨基安替比林 + 4-氯酚          醌亚胺 + HCl + 4H2O
2. 标本:   
2.1 病人准备:12小时禁食。
2.2 类型:血清,肝素或EDTA抗凝血浆。
3. 标本存放:血清稳定性:2025℃保存可稳定2天;48℃保存可稳定1周;-20℃保存至少可稳定1年。
4. 标本运输:常温条件下保存运输。
5. 标本拒收标准:细菌污染的标本。
6. 实验材料
6.1 试剂 申能甘油三脂试剂盒(货号:112 5717170 1 试剂 8×70ml
6.1.1 试剂组成
Good’s缓冲液          pH 7.2      50mmol/L
4-氯酚                            4mmol/L
ATP                              2mmol/L
镁离子                            15mmol/L
4-氨基安替比林                    0.5mmol/L
甘油激酶(GK                    400U/L
过氧化物酶(POD                2000U/L
脂蛋白酯酶(LPL                2000U/L
甘油-3-磷酸氧化酶(GPO          500U/L
6.1.2 试剂准备:试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存:试剂保存于28℃,若无污染,可稳定至失效期。试剂不可冰冻。
6.1.4 变质指示:当试剂有看得见的微生物生长,有浊度,或者未开盖的液体有沉淀时,表明试剂已变质,不能继续使用。
6.1.5 注意事项:试剂中含叠氮钠(0.95 g/L)为防腐剂。不可入口!避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂
6.2 校准品:使用DiaSys公司提供的TruCal U校准品对自动分析仪进行校准,具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
6.3 质控品:具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
7. 仪器:贝克曼AU680生化分析仪
8. 操作步骤
8.1 扬州大学网络教学平台项目基本参数:参见AU680生化分析仪项目测定参数.SOP文件
arcpad
8.2 仪器操作步骤:参见AU680生化分析仪操作规程.SOP文件
9. 检验结果的判断与分析
10. 质量控制:在每一批标本中都应把非定值血清水平III质控做为未知标本进行分析,以2S为质控警告限,3S为失控限,绘制质控图,判断是否在控。质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。
11. 计算方法:TruCal U复合校准品甘油三脂校准值校准仪器后,在病人结果可报告范围内,仪器直接报告可靠的检测结果。
12. 参考值范围(单位:mmol/L
合适范围:                        2.3mmol/L
高度危险临界值:                2.34.5mmol/L
高度危险范围:                    > 4.5mmol/L
参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验,每个实验室应建立自己的参考值。
13. 临床意义:甘油三酯是甘油与3个脂肪酸形成的酯,是天然脂肪中含量最多的。在血液中,甘油三酯和载脂蛋白结合形成极低密度脂蛋白(VLDL)和乳糜微粒,运送到全身。甘油三酯的检测用于对脂肪状态的过筛,以检出致动脉粥样硬化的危险;监视降脂的效果。近期的研究说明,甘油三酯的增高同时伴有低密度脂蛋白(LDL)的升高,特别对发生冠心病(CHD)具有高度危险。甘油三酯的升高也和肝、肾以及胰腺疾病有关。
流行病学研究观察到,若同时出现血清甘油三酯>2mmol/L、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C<1.0mmol/L,说明未来发生冠心病(CHD)的危险性很高。甘油三酯临界值(>2.3mmol/L)的临床应用需结合CHD的其他危险因子。
14. 操作性能
14.1 线性范围:0.0111.3mmol/L
14.2 精密度:精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法,AU680批内精密度小于3%
总精密度小于3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。
批内精密度
n=20
(mmol/L)
s
(mmol/L)
CV
(%)
天间精密度
n=20
(mmol/L)
s
(mmol/L)
CV
(%)
关于审理行政赔偿案件若干问题的规定
样品1
0.91
0.014
1.53
样品1
1.13
0.018
1.60
样品2
1.20
0.022
1.82
样品2
2.00
0.021
1.04
样品3
2.40
0.035
1.47
样品3
2.29
0.024
1.06
14.3 方法学比较:本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x),同时对77个样品进行TG检测,将检测结果作方法学比较,其统计结果如下:y=0.98x+0.014mmol/Lr=0.993
14.4 灵敏度:本试剂的检测限为0.01mmol/L
14.5 pitstop病人结果可报告范围:0.0111.3mmol/L
15. 超出范围结果处理:本法对甘油三酯的检测范围为0.0111.3mmol/L。当样品测定值超过上限时,应将样品用9g/L氯化钠溶液作1+4稀释,重新测定,结果乘以5
16. 病危报警值的处理:当甘油三脂测定值>4.5mmol/L时,在经过复查等确认手段处理后应及时向临床主管医生汇报。
17. 方法局限性
17.1 本法对甘油三酯的检测范围为0.0111.3mmol/L。当样品测定值超过上限时,应将样品用9g/L氯化钠溶液作1+4稀释,重新测定,结果乘以5
17.2 干扰物质:当样品中胆红素浓度 684 mol/L时没有观察到干扰。当抗坏血酸浓度 341 mol/L、血红蛋白浓度 兖矿休闲网络2.50g/L时有干扰。
18. 补救措施:白马湖之冬当仪器发生故障时,迅速联系仪器厂家进行维修。
19. 参考文献
1. Rifai N, Bachorik PS, Albers JJ. Lipids, lipoproteins and apolipoproteins. In: Burtis CA, Ashwood ER. editors. Tietz Textbook of Clinical Chemistry. 3rd ed. Philadelphia: W. B. Saunders Company; 1999. P.809-61.
2. Cole TG, Klotzsch SG, McNamara J. Measurement of triglyceride concentration. In: Rifai N, Warnick GR, Dominiczak MH, eds. Handbook of lipoprotein testing. Washington: AACC Press, 1997.p.115-26.
3.Recommendation of the Second Joint Task Force of European and other Societies on Coronary Prevention. Prevention of coronary heart disease in clinical practice. Eur Heart J 1998;19:1434-503.
20. 其他:仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按《检验科废物处置管理规定》执行。

本文发布于:2024-09-23 07:25:06,感谢您对本站的认可!

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