一.实验内容
10%三（TCA）（纯）0.25%硫代巴妥酸(纯)实验2：可溶性蛋白含量测定所需试剂：
考马斯亮蓝G-25095%乙醇85%磷酸实验3：SOD(超氧化物歧化酶)酶活性测定所需试剂：
dl-甲硫氨酸（Met）NBTEDTA-Na2核黄素实验4：CAT(过氧化氢酶)活性（过氧化氢酶）测定所需试剂：
PBS（PH=7.0）30%H2O2
实验五：Ap某(抗坏血酸过氧化物酶)活性（即ASA—POD活性）测定所需试剂：
ASA（分子量167.12）(乙=胺四乙酸=钠)EDTA—Na2PBS(pH7.0)30%H2O实验6：ASA(维生素C)含量测定
偏磷酸95%乙醇磷酸4%2,2-二联吡啶FeCl3（或FeCl3·6H2O）
实验7：GSH(谷胱甘肽,媚力肽GSHGSH是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸结合而成的三肽化合物)含量测定所需试剂：
NaH2PO4·2H2ODTNB（二硫代硝基苯甲酸）PBS(PH6.8)实验8：脯氨酸测定所需试剂：
磺基水杨酸甲苯茚三酮冰乙酸85%磷酸试验9：叶绿素含量测定。80%丙酮试验9：GR活性测定
试验10：过氧化氢含量测定。三
试验11：超氧阴离子含量测定
二．酶液和母液提取
1.酶液提取所需试剂：50mmol/L磷酸缓冲液（PH=7.8）(内含1%(m/v)聚乙烯吡哆烷酮PVP），0.1mmol/LEDTANa2或EDTA)，也可为（内含2%(m/v)PVP），0.2mmol/LEDTANa2或EDTA）（先配制后用缓冲液定容）
2.ASA.GSH母液提取所需试剂：5%偏磷酸
1．抗氧化酶酶液提取（SOD.POD.CAT）：
1g（根据样品的量,少的可以适当减少）叶片加入预冷5ml.50mmol/L磷酸缓冲液（PH=7.8）
↓
4℃冷冻15000g离心20分钟
↓
上清液即为酶液（5℃下保存一两天内备用，中短期用-20℃保存）
研讨学习环境
2．ASA.GSH母液提取：
0.1g叶片加入3ml预冷5%偏磷酸溶液
↓
4℃冷冻14000g离心10分钟
↓
上清液即为母液（5℃下保存备用）（偏磷酸可显著沉淀蛋白质和保护ASA）
酶液提取所需试剂：GARY FAYE LOCKE
PVP（聚乙烯吡哆烷酮）：1%（1g溶于100ml水），1000ml需称取10g，此处用PBSEDTA-Na2:0.1mmol/L(37.2mgEDTA-Na2溶于1000ml蒸馏水)，此处用PBS
PBS（缓冲液）配制方法：①Na2HPO4·12H2O②NaH2PO4·2H2O
取①71.64g，蒸馏水定容至1L，取②31.21g定容至1L，放置4℃冰箱备用PH=7.8取①91.5ml+②8.5ml=100ml(浓度0.2mol/L)
需要0.05mol/L→将上述溶液烯释至400ml（0.2mol/L某0.1=0.05mol/L某V）
母液提取所需试剂：
5%偏磷酸：称5g纯偏磷酸，定容至100ml蒸馏水（需加热溶解，温度在50-60℃）偏磷酸有剧毒（偏磷酸难溶解，先得用研钵提前研碎，后用磁力搅拌器溶解一到两天后再定容）（现所用为38%HPO3，所以需称65.7895g，定容至500ml）
三．实验步骤
实验1：MDA含量测定
成都广播影视学院1.1所需试剂：10%三（TCA）（纯）称10g定容至100ml
0.25%硫代巴妥酸(纯)称0.25g用10%TCA定容至100ml
（配制时，可一次完成，先配TCA，不要定容，再加入硫代酸，然后定容，若难溶解，可以在磁力搅拌器上微热）
1.2步骤：取0.3g叶片，加4ml磷酸缓冲液研磨，
加入4ml0.25%的硫代酸（溶于10%的三）溶液未来的文具盒
↓摇匀95℃加热15分钟
↓快速冷却
3000g离心15分钟↓
取上清测定OD532，OD600，OD450值↓
初步设计深度按公式求MDA浓度=6.45某（OD532-OD600）-0.56OD450(μmol/L)
可溶性糖浓度=11.71某OD450(mmol/L)
-3
最后计算MDA含量（μmol/gFW）=[4某（MDA浓度某）某10/0.1]
钱德勒
-3
同时，可测得可溶性糖含量（mmol/gFW）=4某（可溶性糖浓度χ）某10/0.1
（用多波长测定，在测定之前一定要矫正基线，公式中的参数可以直接在分光光度计上输入）注意：以0.25%的硫代巴妥酸溶液作空白调零MDA含量测定的改进
1.可以用做酶活性时提取的酶液来直接测定MDA含量，用量可以定为1.0、1.5或2.0（较好）ml。2.硫代巴妥酸溶液改为0.5%的硫代酸（溶于20%的三）溶液。
实验2：可溶性蛋白含量
（参照Bradford方法测定），以BSA作为标准蛋白（牛血清蛋白）2.1所需试剂及配制：牛血清蛋白（BSA），考马斯亮蓝G-250，95%乙醇，85%磷酸考马斯亮蓝G-250蛋白染剂的配制：
称取100mg考马斯亮蓝G-250，溶于50ml95%乙醇，加入100ml85%的磷酸，最后蒸馏水定容到1L，混匀，放置过夜，过滤后贮放在棕瓶中，常温下可放置一个月。●标准曲线制作：
①标准溶液配制：称取10mg牛血清蛋白标准液，溶于蒸馏水，定容至100ml，制成100μg/ml的标准液，4℃下保存备用。（必须是牛血清蛋白向水中溶解，不能颠倒）②取6支具塞试管（10ml），按下表配制含0-100μg/ml的牛血清蛋白液各1ml（★调零管）
★123456
）020*********
2
③各试管加入5mlG-250染剂，翻转混合，放置2分钟，595nm比，绘制过原点标准曲线（方程式）。（相关系数要两个9以上）
2.2步骤：
①标准曲线（参考邹琦）（595nm比）
注意：制作通过原点的标准曲线，以含0μg蛋白质液调零
②取0.1g样品，加5ml蒸馏水提取，5000g离心10分钟，取上清1ml测定
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