临床检验主管检验师临床免疫学和免疫检验—临床免疫检验的质量保证 复习资料汇编 临床实验室的测定数据是为患者疾病的诊疗或临床实验研究服务的，因而为保证患者临床诊疗或临床实验研究的有效性，就要求临床实验室采取一系列有效的措施证明其测定数据能够达到所确定的质量标准，这就是质量保证的内容，涵盖了实验室内进行的涉及临床检测的所有活动。 第一节 概 述
一、与质量保证相关的定义
1.质量保证（QA）：为一产品或服务满足特定的质量要求提供充分可信性所要求的有计划的和系统的措施。
咸潮入侵 2.室内质量控制（IQC）：由实验室工作人员采取一定的方法和步骤，连续评价本实验室工作的可靠性程度，旨在监测和控制本室常规工作的精密度，提高本室常规工作中批内、批间样本检验的一致性，并确定当批的测定结果是否可靠，可否发出检验报告。
3.室间质量评价：为客观地比较某一实验室的测定结果与靶值的差异，由外单位机构，采取一定的方法，连续、客观地评价实验室结果，发现误差并校正结果，使各实验室之间的结果具有可比性。
4.准确度：待测物的测定值与其真值的一致性程度。准确度不能直接以数值表示，通常以不准确度来间接衡量。对一分析物重复多次测定，所得均值与其真值或参考靶值之间的差异亦即偏倚即为测定的不准确度。
5.偏倚：待测物的测定值与一可接受参考值之间的差异。偏倚又分批内偏倚和批间偏倚，批内偏倚反映的是该批测定的系统误差，如校准不准、非特异显等。批间偏倚所反映的问题要更大一些，如试剂或校准物变质所致的误差。
6.精密度：在一定条件下所获得的独立的测定结果之间的一致性程度。与准确度一样，精密度同样也是以不精密度来间接表示。测定不精密度的主要来源是随机误差，以标准差（SD）和（或）变异系数（CV）具体表示。SD或CV越大，表示重复测定的离散度越大，精密度越差，反之则越好。
准确度好的实验，其精密度不一定好；准确度差的实验，其精密度则不一定差；反之亦然。
7.重复性条件：是指在短的间隔时间内，在同一实验室对相同的测定项目使用同一方法和同一仪器设备，由相同的操作者获得独立的测定结果的条件。
8.批：在相同条件下所获得的一组测定。
9.均值：一组测定值中所有值的平均值，亦称均数。均值为计算值，在实际测定数据中可能会出现该数值，也可能没有。
10.标准差：为表示一组测定数据的分布情况，即离散度，可用标准差来表示。
11.变异系数：将标准差以其均数的百分比来表示，即为变异系数。
12.正态分布：当一质控物用同一方法在不同的时间重复多次测定，当测定数据足够多时，如以横轴表示测定值，纵轴表示在大量测定中相应测定值的个数，则可得到一个两头低，中间高，中为所有测定值的均值，左右对称的“钟形”曲线，亦即正态分布，又称高斯分布。正态分布的基本统计学含义可用均值（）＝标准差（s）和概率来说明，均数位于曲线的正中线所对应的值，s则表示测定值的离散程度，s越大，曲线越宽大，s越小，曲线越窄。曲线下的面积为概率，其与和s的关系可阐述如下：所有测定值处于均值±1s范围内的概率为0.68；处于均值±2s范围内的概率为0.955；处于均值±3s范围内的概率为0.997。
二、实验方法诊断效率评价
1.诊断敏感性：是指将实际患病者正确地判断为阳性（真阳性）的百分率。本指标可用于评价测定方法的临床应用价值，理想测定方法的诊断敏感性应为100%。
2.诊断特异性：是指将实际无病者正确地判断为阴性（真阴性）的百分率。本指标是用于评价测定方法的临床应用价值，理想测定方法的诊断特异性应为100%。
3.诊断效率：是指能准确区分患者和非患者的能力。理想测定方法的诊断效率应为100%。
4.阳性预测值（PPV）是指特定试验方法测定得到的阳性结果中真阳性的比率，理想测定方法的阳性预测值应为100%，亦即没有假阳性。
5.阴性预测值（NPV）是指特定试验方法测定得到的阴性结果中真阴性的比率，理想测定方法的阴性预测值应为100%，亦即没有假阴性。
第二节 免疫检验的质量控制原则
标本最为常用的是血清（浆），有时因为特定的检测目的，也用到唾液、脑脊液、尿液、粪便等标本。患者标本中，有可能会含有干扰免疫测定导致假阳性和假阴性结果的因素，其可分为两类，即内源性和外源性的。
（一）内源性干扰因素
内源性干扰因素一般包括类风湿因子、补体、高浓度的非特异免疫球蛋白、异嗜性抗体、某些自身抗体、因使用鼠抗体或诊断诱导的抗鼠Ig抗体、交叉反应物质等。 1.类风湿因子（RF）：为避免RF对免疫测定的干扰，通常可以采取下述措施：
（1）改变标记抗体。
（2）标本中RF用变性IgG预先封闭：将经热变性（63℃，10分钟）的动物如兔、羊等的IgG加入到标本稀释液中，或是将该变性IgG连接至一颗粒固相如聚苯乙烯微球或微孔，然后加入临床血清标本，反应后，再吸出标本进行检测。此外，在测定特异IgM时，也可使用抗人IgG去除临床标本中RF和IgG。
（3）测定抗原时，可在标本中加入可使RF降解的还原剂如2-巯基乙醇。2-巯基乙醇等还原剂可使抗体内的巯基裂解，因而可以去除RF的干扰，但只适用于抗原测定。
2.补体由补体引起的干扰可通过下述方法避免：
（1）对临床血清标本加热灭活补体。
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（2）包被或标记二抗使用特异的鸡抗体。
3.异嗜性抗体：人类血清中含有抗啮齿类动物（如鼠等）的免疫球蛋白（Ig）的抗体，即天然的异嗜性抗体。异嗜性抗体可通过交联固相和标记的单抗或多抗而出现假阳性反应。由异嗜性抗体引起的干扰可通过下述方法避免：
（1）使用特异的兔F（ab'）2片段作为固相或测定标记抗体。
（2）在标本或标本稀释液中加入过量的动物Ig，封闭可能存在的异嗜性抗体。但加入量不足或亚类不同时无效。
（3）使用靶特异的非Ig亲和蛋白替代固相或标记抗体之一。
（4）使用特异的鸡抗体作为固相和测定抗体。
4.因使用鼠抗体或诊断诱导的抗鼠Ig抗体：由抗鼠抗体引起的干扰可通过下述方法避免：
（1）使用特异的抗体F（ab'）2片段作为固相或测定标记抗体。
（2）在标本或标本稀释液中加人过量的鼠Ig，封闭可能存在的抗鼠抗体。
（3）使用特异的鸡抗体IgG作为固相和测定抗体。鸡抗体IgG不与人抗鼠抗体反应。因而，用其作为固相或标记抗体不会出现假阳性结果。
5.自身抗体
6.溶菌酶
（二）外源性干扰因素
外源性干扰因素包括标本溶血、标本被细菌污染、标本贮存时间过长和标本凝固不全等。
1.标本溶血
2.标本被细菌污染
3.标本贮存时间过长
4.标本凝固不全
5.冷冻保存标本避免反复冻融
二、标准化操作及流程
对试剂制备、测定方法和仪器操作写出“标准操作程序”（SOP），但最重要的是在测定中，所有的实验技术人员在进行相关测定时，必须严格按相应的SOP进行操作。
三、标准品和质控品的应用
含量确定的处于一定基质中的特性明确的物质，这种物质通常是纯品，可分为国际标准品（IS）、国家标准品、商品校准品3个等级。
标准品
（1）基质通常为含蛋白的缓冲溶液，对测定结果无明显影响。
（2）浓度在方法的测定范围内。
（3）保持良好的稳定性。
（4）无传染危险性。
（5）靶值或预期结果已定。
质控品
是含量已知的处于与实际标本相同的基质中的特性明确的物质，这种物质通常与其他杂质混在一起，根据其用途可分为室内质控品、室间质评样本和质控血清盘3类。
标准品和质控品的基本条件
通常，理想的标准品和质控品应具备如下特征：
1.标准品的基本条件
错误反馈 （1）标准品的基质通常为含蛋白的缓冲溶液，对测定结果无明显影响。
（2）对标准品的浓度一般无特殊要求：在方法的测定范围内即可。
（3）保持稳定性，在一定时间内，在规定的保存条件下应有良好的稳定性。
（4）无已知的传染危险性，对已知的经血液传播的病原体如HIV、HCV和HBV等必须作灭活处理。
（5）靶值或预期结果已定。
2.质控品的基本条件
（1）质控品的基质则应尽可能与临床常规实验中的待测标本一致。
（2）室内质控品则要求其所含待测物的浓度接近试验或临床决定性水平。
mgs1 （3）良好的稳定性。
（4）无已知的传染危险性，对已知的经血液传播的病原体如HIV、HCV和HBV等必须作灭活处理。
匝间短路测试仪（5）对于质控品，可单批大量获得。
3.标准品和质控品的定值方法
参考方法应有低测下限、不受非特异干扰及不与相关的化合物发生交叉反应，同时还应该容易得到。
试剂相同，测定设计上的差异仍会引起偏倚，建立一个参考实验室的网络，以保持参考方法的有效性。
4.标准品和质控品的单位
目前可得到的国际标准品中特定分析物的浓度一般以IU/L表示，而已经很明确的物质如类固醇和甲状腺激素，则应以物质浓度（mol/L）表示。
5.标准品值的溯源
当建立一个测定方法时，一级标准品的值要传递至二级、三级和（或）校准品，使得所建立的方法的测定值可溯源至一级标准品。
6.与免疫测定标准品和质控品有关的组织机构
在国内免疫诊断试剂的审批由国家药品监督管理局（SDA）负责。卫生部临床检验中心
也正在着手临床免疫检验标准化方面的工作。
四、实验室的环境、设施和设备
充分的空间、良好的照明和空调设备、实验室仪器设备应保养良好等。
教材插图第三节 质量保证、室内质控和室间质评之间的关系
临床实验室常规免疫检验的步骤基本上可分为标本收集、实验室测定过程和结果报告及其解释等。IQC仅覆盖上述各步中的测定分析步骤；而EQA则除了监测测定分析步骤外，还包括一个较大范围的实验室活动，诸如在标本接收中样本处理的可靠性，以及测定结果的报告和解释。QA覆盖了更宽范围的活动，最为重要的是标本收集、结果报告和解释阶段。
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