1.直接计数法
数目•然后对数目逬行比较。
面单粗暴、傻瓜式的检查方法！利用计数板或计数仪得出细 该方法需要对不同时间原的细胞分别固定•而后在光疑下计数,可绘制出细胞生长曲线。而具 不足之处在于无法区分壇蓿细胞与非增殖抵胞，下适合样品奴星參和评估特定亚的情况。2「H・TdR渗入法
OH
腺龜碇核百(TdR )是DNA持有的滅基「也是DNA合成的必需物氐
即3H-TdR作为DNA合成的前体渗入DNA合成代谢过程,通过液体闪烁计数器可迴走细胞的放射 性强虐，间接放映出细胞增殖情况。
该方法优点在于敏感性高”客观性强,盍每性好.但是爲要一走设备集件，也存在放时性核素 污染问题。
3、Brdu/EdU检测法
Brdu&EdU均是胸腺嚅睫的衍生物r均可代替胸腺嚅噪在佳能s45DNA合成期掺入细胞中。
不同的是j Brdu检测法可利用B「行动导向教学法du专
性抗体和具他細胞标记物对细
'进行双重染,可判断
増殖细胞的种类及増殖速度，不仅适用于体外实验也能用于活体实验。这个方法最大的缺
点需 要变性DNA才能与抗体结合,破坏了DNA双链结构r导致染弥散、准确性降低等问题。
蛋白质工程EdU检测法则基于EdU与Apollo荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性r适用于细胞増殖、细
胞标记示踪筈方
IEI
的研究，尤其适合进行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他药物的筛选实
验。EdU检测染料只有BrdU抗体大小的1/500,®田胞内很容易就扩散,无需DNA变性。
rdU与EdU检测优缺点综合比较
| BrdU | EdU |
检测分子 | 大 | 很小 |
检测方式 | 免疫反应 | 化学反应 |
影响其他标记 | 是 | 否 |
DNA变性 | 需要 | 不需要 |
实验时间 | 过夜 | 2.5小时 |
检测灵敏度 | 一般 | 灵敏 |
黄梁木 | | |
4、WITT检测法&CCK8检测法
MTT检测法反映细胞的能臺代谢「是检测细胞増殖活力的一种简便准确方法°其原理是在活纟田 胞生长和增殖过程中,线粒体内的脱氢酶可将黄的MTT分解为蓝紫的水不溶性的甲瓒 (Formazan ),并沉积在细胞中(死细胞无此功能。DMSO溶解细胞中的紫结品物,用酶联 检测仪在490nni波长处检测其光密度值，可间接反映活细胞数量。
CCK8是MTT的升级版，CCK-8细胞活性检测试剂中含有WS「8 ( MTT的类似物)，在电子耦 合试割存在的情况下,可被线粒体中的脱氢酶还原成橙黄的甲瓒(Formazan ),稳定同位素用酶联检测 仪在450nm波长处检测其光密度值.可间接反映活细胞数量。
细胞增殖越快,则颜越深；细胞青性越大,则颜越浅。
CCK-8^MWST-8^ | MTT法 |
还原后的Fo rma.z art是水溶性的 （不需要溶解） | 还原后的F ormaz ari是水洛性的 （需要加有机溶剂溶解） |
重现性好 | 弃上清时，会损失小部分的■ Formazan,故重复性略差 |
| 引擎 操作简便 | 操作繁琐 v |
测定波长：450—490nm | 测定波长：490—550nm |
1瓶溶液，无需预制，即开即用 | 需加有机溶剂溶解，工作量大 |
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