目的： | 为检验硫酸新霉素规定一个标准的程序，以便获得准确的实验数据。 |
范围： | 适用于硫酸新霉素的检验。 |
职责： | 检验室主任、检验员。 |
规程： | |
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1. 性状 ：本品为白或类白的粉末；无臭；极易引湿；水溶液显右旋光性。 本品在水中极易溶解，在乙醇、乙醚、丙酮或氯仿中几乎不溶。
2. 鉴别：
2.1 试剂与仪器
2.1.1 新霉素标准品 2.1.2 盐酸溶液（9→100）
2.1.3 氢氧化钠溶液（8%） 2.1.4 乙酰丙酮水溶液（2%）
2.1.5 对二甲氨基苯甲醛 试液 2.1.6 硅胶H薄层板
2.1.7. 羧甲基纤维素钠溶液 2.1.8 甲醇
2.1.9 醋酸乙酯 2.1.10 丙酮贝尔实验室
2.1.11 醋酸铵溶液（8.8%） 2.1.12 次氯酸钠溶液(10%)
2.1.13 碘化钾淀粉溶液 2.1.14 层析缸、烘箱
2.1.15 量筒(50ml)、烧杯（100ml） 2.1.16 盐酸或硝酸
2.1.17 容量瓶（10ml） 2.1.18 电子天平（万分之一克）
2.1.19 试管（15cm长） 2.1.20 微量注射器（10μl）
2.1.21 氯化钡试液 2.1.22 醋酸铵或氢氧化钠试液
2.1.23 醋酸铅试液
2.2 项目与步骤
2.2.1 显反应： 取本品约10mg，置试管中，加水1ml溶解后，加盐酸溶液（9→100）2ml在水浴中加热10分钟，加8%氢氧化钠溶液2ml与2%乙酰丙酮水溶液1ml，置水浴中加热5分钟，冷却后，加对二甲氨基苯甲醛试液1ml，即显樱桃红为符合规定。
2.2.2 薄层谱的鉴别： 精密称取本品与硫酸新霉素标准品各约0.04g，分别置10ml容量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，分别作为样品溶液和对照溶液；吸取上述两各溶液各5μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以甲醇-醋酸乙酯-丙酮-8.8%醋酸铵溶液(25：15:10:40)为展开剂，展开后，晾干，在110℃干燥20分钟，乘热喷以10%次氯酸钠溶液，将薄层板于通风处冷却片刻，再喷碘化钾淀粉溶液，立即检视，样品溶液所显主斑点的颜和位置应与标准品溶液的主斑点相同为符合规定。
2.2.3硫酸盐鉴别：
⑴ 取本品的水溶液置试管中，加氯化钡试液，即生成白沉淀，分离，沉淀在盐酸或硝酸中均不溶解为符合规定。
⑵ 取本品水溶液置试管中，加醋酸铅试液，即生成白沉淀，分，沉淀在醋酸铵试液或氢氧化钠试液中溶解为符合规定。
⑶ 取本品水溶液置试管中，加盐酸，不生成白沉淀为符合规定。
3. 检查
3.1 试剂与仪器
3.1.1 浓氨 溶液 3.1.2 氯化钡滴定液（0.1mol/l） 3.1.3 酞紫指示液 3.1.4 乙二胺四醋酸二钠滴定液(0.05mol/l)
3.1.5 乙醇 3.1.6 新霉胺对照品
3.1.7 硅胶H薄层板 3.1.8 甲醇
3.1.9 醋酸乙酯 3.1.10 丙酮
3.1.11 醋酸铵溶液8.8% 3.1.12 五氧化二磷
3.1.13 真空干燥箱 3.1.14 烧杯50ml
3.1.15 电子天平(万分之一克) 3.1.16 酸度计
3.2 项目与步骤
3.2.1酸度: 称取本品约3g，置50ml烧杯中，加水30ml使溶解，摇匀，按PH测定法(SOP-QC- 312-00)测定，PH值应为5.0～7.0为符合规定。
3.2.2 硫酸盐： 取本品0.16内蒙古财经学院学报g，精密称定，加水100ml使溶解，用浓氨溶液调节PH值至11后，精密加氯化钡滴定液(0.1mol/l)10ml，酞紫指示液5滴，用乙二胺四醋酸二钠滴定液(0.05mol/l)滴定，注意保持滴定过程中PH值为11，滴定至紫开始消褪，加入乙醇50ml，继续滴定至蓝紫消失，并将滴定的结果用空白试验校正，每1矩阵干扰ml氯化钡滴定液(0.1mol/l)相当于9.606mg硫酸盐(SO4)，本品含硫酸盐按干燥品计算应为27.0%～31.0%为符合规定。
3.2.3 新霉胺： 取本品0.2g，加水10ml作为供试品溶液；另取新霉胺对照品0.04g，加水100gsp认证现场检查项目ml的溶液作为对照品溶液。照鉴别 ⑵ 项，自“照薄层谱法”起的方法检验。供试品溶液所显的杂质斑点与对照品溶液的斑点比较，不得更深为符合规定。
3.2.4 干燥失重：取本品，以五氧化二磷为干燥剂，在60℃减压干燥至恒重，按（SOP-QC-325-00）检验，减失重量不得过6.0%为符合规定。
3.2.5 炽灼残渣：精密称取本品约1g，置坩埚中，照炽灼残渣检查法(SOP-QC-327-00)检测，不得过1.0%为符合规定。
4． 含量测定： 精密称取本品约38mg，置25ml容量瓶中，加灭菌水稀释至刻度，照抗生素微生物检定法（SOP-QC-339-00）操作。
4.1 试剂与仪器
4.1.1 新霉素标准品 4.1.2 灭菌水
4.1.3 抗生素检定培养基Ⅱ(7.8-8.0) 4.1.4 磷酸盐缓冲液(PH7.8)
4.1.5 金黄葡萄球菌 4.1.6 灭菌刻度滴管,吸管
4.1.7 容量瓶(50ml,100ml) 4.1.8 陶瓦盖,试管
4.1.9 双碟,钢管 4.1.10 电热隔水培养箱
4.1.11 称量瓶,烧杯 4.1.12 刻度移液管
4.1.13 电子天平(万分之一克) 4.1.14 CHB-1抗生素效价测量仪
4.1.15 超净工作台 4.1.16 钢管放置器
4.1.17 酒精灯 4.1.18 三角烧瓶(50ml,150ml)
4.1.19 量筒(100ml) 4.1.20 接种棒,镊子
4.2 项目与步骤
4.2.1 培养基的制备: 称取抗生素检定培养基Ⅱ(7.8-8.0)28.5g，加1L蒸馏水，加热溶解，分装，121℃高压灭菌30分钟。 4.2.2 磷酸盐缓冲液(PH7.8)制备：
称取磷酸氢二钾5.59g与磷酸二氢钾0.41g，加水使成1000ml，滤过，经121℃蒸气灭菌30分钟，备用。
4.2.3 金黄葡萄球菌悬液的制备： 取金黄葡萄球菌(26003)的营养琼脂斜面新鲜培养
物，用1白金耳接种于营养琼脂斜面上，在35℃-37℃培养20-22小时，用时，用灭菌水0.9%灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下，备用。
4.2.4 标准品溶液的制备：
⑴ 将标准品从冰箱取出，使与室温平衡，准确称取新霉素标准品约35mg，置25ml容量瓶中，用灭菌水稀释至刻度，精密吸取10ml，置100ml容量瓶中，用磷酸盐缓冲液(PH7.8)稀释至刻度，备用。
⑵ 高剂量标准品的制备：精密吸取4.2.4 ⑴ 制备的标准溶液10ml，置50ml容量瓶中,用磷酸盐缓冲液(PH7.8)稀释至刻度，备用。
⑶ 低剂量标准品的制备：精密吸取4.2.4 ⑴ 制备的标准溶液10ml，置100ml容量瓶中，用磷酸盐缓冲液(PH7.8)稀释至刻度，备用。
4.2.5 样品溶液的制备：
⑴ 称取样品约35mg，置25ml容量瓶中，用灭菌水稀释至刻度；精密吸取10ml，置100ml容量瓶中，用磷酸盐缓冲液(PH7.8)稀释至刻度，备用。
⑵ 高剂量标准品的制备：精密吸取4.2.5 ⑴ 制备的样品溶液10ml，置50ml容量瓶中，用磷酸盐缓冲液(PH7.8)稀释至刻度，备用。
⑶ 低剂量标准品的制备：精密吸取4.2.5 ⑴ 制备的标准溶液10ml，置50ml容量瓶中，用磷酸盐缓冲液(PH7.8)稀释至刻度，备用。
4.2.6 双碟的制备：按抗生素微生物检定法（SOP-QC-339-00）操作。
4.2.7 小钢管的放置：按抗生素微生物检定法（SOP-QC-339-00）操作。
4.2.8 滴碟、培养与测量：按抗生素微生物检定法（SOP-QC-339-00）操作。
5． 记录与计算
用电脑测试，计算、统计分析的打印纸贴附于记录后。
按下式计算新霉素的最终效价
PT：为样品的真实效价；
P： 为样品（相当于标示量或估价效价）的百分数；
标准品：
ds:为对照品每1ml中约含1000单位浓度；
W对：为对照品称样量；
样品
dT:样品的每1ml中约含1000单位浓度；
湖南科技学院学报 V：为样品的吸取量；
效值比值（R）的计算值，若低于90%或高于110%均应重新测定，可信限率≤5%。
本品按干燥品计算，每1mg的效价不得少650新霉素单位。2013诺贝尔文学奖获得者
Cd：本品的折干含量；
CW：本品的湿品含量；
B%：本品的含水百分数。
6． 类别：抗生素类药；
7． 贮藏：密封，在干燥处保存。
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