gamma分布刚地弓形虫（Toxoplasma gondii ）简称为弓形 上清华变白富美虫，是引起全球寄生虫病的人畜共患寄生虫之一，
可以感染包括人在内的所有温血动物[1]。弓形虫
宿主（或细胞）和寄生虫相互作用关系的生物学
特性。棒状体是弓形虫顶端复合体上的一种分泌
细胞器，能够在弓形虫感染宿主时迅速分泌蛋白
质到宿主细胞内而发挥生物学功能。弓形虫棒状体
蛋白16（ROP16）作为弓形虫棒状体蛋白家族中
重要的毒力因子之一，具有核定位的结构[2]，能在
弓形虫感染宿主过程中迅速进入宿主细胞核内。
巨噬细胞是感染免疫机制研究中重要的细
胞类型[3]。直接使用原代巨噬细胞进行实验相比细胞系更接近生理状态，但是由于原代巨噬细胞获取难、个体差异大、操作繁琐和离体存活时间短等原因，选择可稳定传代大鼠或者小鼠巨噬细胞系或者诱导单核细胞为巨噬细胞仍是现阶段实验研究中巨噬细胞的主要来源。常使用大鼠或者小鼠巨噬细胞研究弓形虫感染和ROPs 家族蛋白作用机制，本文使用佛波脂诱导人外周血单核细胞（THP-1）分化为巨噬细胞作为人巨噬细胞模型[4-5]来探讨ROP16对THP-1源性巨噬细胞的极化影响。因THP-1经佛波脂诱导分化后会由悬浮状态变成不增殖的贴壁状态，较难进行慢病毒的转染和稳定表达细胞株的筛选，所以本研究拟构建了弓形虫ROP16过表达载体pCDH-ROP16，先转染THP-1细胞，再使用佛波脂诱导THP-1分化为巨噬细胞[6]进行相关实验研究，为 进一步深入研究ROP16在人体巨噬细胞内的表达奠定研究基础。1材料与方法1.1主要材料弓形虫ME49虫株和pCDH-MSCV 载体为本实验室保存；THP-1购于ATCC ；人胚肾细胞株（HEK293T ）由本实验室保存；pMAL 、VsVg 、pREV
包装质粒为本实验室保存；大肠埃希菌DH5α感受ROP16过表达对THP-1诱导分化巨噬细胞极化的影响
信托公司集合资金信托计划管理办法
杨宁爱1，苏雅静2，贾伟2，3，杨红1，康佳1，周云花1，
刘学雷1，康宇婷1，赵志军2，3（1.宁夏医科大学临床医学院，银川750004；2.宁夏医科大学临床病原微生物重点实验室，银川
750004；3.宁夏医科大学总医院医学实验中心，银川
750004）文章编号：1674-6309（2020）05-0445-07
·论著·
高中语文教学大纲
收稿日期：2019-10-16基金项目：国家自然科学基金地区项目（81560333）；2018年宁夏高等学校科学研究项目（NGY2018-103）；宁夏高等学校一流学科建
设（宁夏医科大学国内一流建设学科临床医学）资助项目（NXYLXK
2017A05）作者简介：杨宁爱（1994-），女，在读硕士研究生，研究方向：临床病
生态学报原微生物与免疫学检验研究。
在我的开始是我的结束
通信作者：赵志军（1978-），男，博士，副教授，副研究员，硕士研究
生导师，从事弓形虫与宿主细胞相互作用关系及机制的研究。
E-mail:**************摘要：目的
探讨弓形虫棒状体蛋白（ROP16）对人外周血单核细胞（THP-1）诱导分化巨噬细胞极化的影响。
方法构建ROP16过表达慢病毒载体转染THP-1细胞，筛选得到稳转细胞系，使用佛波脂诱导分化为巨噬细胞，RT-PCR 和Western blot 分别检测相关mRNA 及蛋白的表达情况。结果
构建ROP16过表达载体，并转染THP-1筛选得到稳定过表达细胞系，佛波脂诱导分化为THP-1源性巨噬细胞。Western blot 结果显示，M1型巨噬细胞的标志性蛋白一氧化氮合酶（iNOS ）表达量升高，M2型巨噬细胞的标志型蛋白精氨酸酶-1（Arg-1）表达量降低（P 均<0.05）。RT-PCR 的结果显示，ROP16过表达组iNOS 、白细胞介素-1（IL-1）、白细胞介素-12（IL-12）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA 表达均高于空载体组和阴性对照组（P 均<0.05）；Arg-1、白细胞介素-10（IL-10）、转化生长因子-β（TGF-β）mRNA 表达均低于空载体组和阴性对照组（P 均<0.05）。结论弓形虫ROP16在THP-1分化巨噬细胞内过表达后可诱导细胞向M1型巨噬细胞方向极化。关键词：THP-1；ROP16；巨噬细胞极化
中图分类号：R37文献标识码：A DOI :10.16050/jki.issn1674-6309.2020.05.003
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议