储俊东，刁澎云，李旭光，等．中华绒螯蟹表皮蛋白基因ＥｓＣＡＰ的克隆与表达分析［Ｊ］．江苏农业科学，２０２１，４９（８）：７４－８０．ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０２１．０８．０１２ 中华绒螯蟹表皮蛋白基因ＥｓＣＡＰ的克隆与表达分析
储俊东１，２，刁澎云１，２，李旭光１，２
，毕可然１，周 刚２，周 军２，邓燕飞２，许郑超２
（１．江苏海洋大学，江苏连云港２２２００５；２．江苏省淡水水产研究所，江苏南京２１００１７）
摘要：以中华绒螯蟹（Ｅｒｉｏｃｈｅｉｒｓｉｎｅｎｓｉｓ）为试验对象，克隆中华绒螯蟹表皮蛋白ＣＡＰ基因序列，分析其表达规律，为探索中华绒螯蟹蜕皮发生机理提供参考。运用生物信息学从中华绒螯蟹转录组数据中比对筛查表皮蛋白ＣＡＰ基因序列信息，克隆扩增获得表皮蛋白ＣＡＰ基因ｃＤＮＡ序列，运用ＲＴ－ｑＰＣＲ分析表皮蛋白ＣＡＰ基因在不同组织、不同发育阶段和不同蜕皮时期的表达特征。结果表明，中华绒螯蟹表皮蛋白ＣＡＰ基因ｃＤＮＡ序列全长３８０ｂｐ，编码１０１个氨基酸，包括１个信号肽和１个Ｒ＆Ｒ结合域。表皮蛋白基因ＣＡＰ主要在蜕皮后期的表皮 组织中表达，在蜕皮间期不表达；在不同发育阶段的仔蟹１期表达量最高，根据其发育表达模式推测表皮蛋白基因ＣＡＰ参与表皮的形成和钙化，为后续深入研究表皮蛋白基因的生理功能奠定基础。 关键词：中华绒螯蟹；表皮蛋白；基因克隆；ｍＲＮＡ表达
中图分类号：Ｓ９１７ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００２－１３０２（２０２１）０８－００７４－０６
收稿日期：２０２００－０８－１１
基金项目：国家现代农业产业技术体系建设专项（编号：ＣＡＲＳ－４８）；江苏省自然科学基金面上项目（编号：ＢＫ２０１６１６０２）；江苏省渔业科技类重点项目（编号：Ｄ２０１８－４）；江苏省农业重大新品种创制项目（编号：ＰＺＣＺ２０１７４８）；江苏省现代农业（中华绒螯蟹）产业技术体系项目（编号：ＪＡＴＳ［２０１９］３８６）；江苏省研究生科研与实践创新计划（编号：
ＳＪＣＸ２０＿１２６９、ＳＪＣＸ２０＿１２９３）。作者简介：储俊东（１９９６—），男，江苏南通人，硕士研究生，主要从事水生甲壳类分子遗传学研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｑｉｃｈｅｎｃｈｕ１＠ｇｍａｉｌ．ｃｏｍ。通信作者：李旭光，副研究员，主要从事水生甲壳类繁育与生态养殖研究。Ｔ
ｅｌ：（０２５）８６８５１５７５；Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｕｇｕａｎｇｌｉ１９８１＠１６３．ｃｏｍ。 甲壳动物的体表包裹着１层厚厚的外骨骼，它不但保护着甲壳动物免受外来细菌和病毒的侵袭，还在其维持正常生命活动和体态的建成中均发挥着非常重要的作用。甲壳类表皮由外向内依次可分为上表皮、外表皮、内表皮及真皮细胞，其中内表皮是表皮皮层中的主要组成部分，主要由几丁质、
表皮蛋白及钙盐等构成［１］
。坚硬外骨骼虽然极大
地增强了甲壳动物的生存和适应能力，但也限制了其生长。因此，甲壳类需要周期性地蜕去旧表皮，合成新表皮。甲壳类动物的蜕皮周期主要分为蜕皮前期（Ｄ）、蜕皮期（Ｅ）、蜕皮后期（Ａ、Ｂ）和蜕皮间期（Ｃ）４个阶段。蜕皮前期（Ｄ），在蜕皮类调控激素的诱导下旧表皮被几丁质代谢酶类及蛋白水解酶类部分消化和再吸收，新表皮开始逐渐分泌形成；蜕皮期（Ｅ），机体旧表皮褪去，新表皮替代旧表皮；
蜕皮后期（
Ａ、Ｂ），机体吸收大量水分迅速增长增质量，同时表皮组织迅速钙化；当表皮钙化终止，机体
社会关系网络
进入蜕皮间期（
Ｃ）［２－３］
。表皮蛋白是构成甲壳类表皮的重要结构蛋白，不同类型的表皮蛋白与长链几丁质相结合，从而影响表皮结构及其性能。早期由于传统的提取分离纯化方法的局限性限制了对表皮蛋白的发掘，因此有关表皮蛋白种类与数量的报道较少。近年来，随着基因组、转录组等测序技术的兴起，大大加速了人们对于表皮蛋白的发现，目前已在一些模式昆虫如黑腹果蝇（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）、冈比亚按蚊（
Ａｎｏｐｈｅｌｅｓｇａｍｂｉａｅ）、家蚕（Ｂｏｍｂｙｘｍｏｒｉ）及一些重要经济甲壳类如南美白对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｖａｎｎａｍｅｉ）、红螯螯虾（Ｃｈｅｒａｘｑｕａｄｒｉｃａｒｉｎａｔｕｓ）中鉴别出大量表皮
蛋白基因家族［
４－５］
冗余性。其中，具有与几丁质相结合Ｒ＆Ｒ结构域（ｒｅｂｅｒｓ＆ｒｉｄｄｉｆｏｒｄｃｏｎｓｅｎｓｕｓ）的ＣＰＲ
家族数量多、分布广，是迄今为止表皮蛋白家族中含量最丰富的一个家族。根据Ｒ＆Ｒ结构域的保守型序列，ＣＰＲ家族又可细分为ＲＲ－１、ＲＲ－２和ＲＲ－３等３个亚家族。其中，ＲＲ－１亚族主要存分布于柔软的未钙化表皮；而ＲＲ－２亚族主要存在于坚硬的钙化表皮；ＲＲ－３家族数量最少，其分布特
征还不太明确［６－７］
。值得注意的是，在克氏原螯虾
（Ｐｒｏｃａｍｂａｒｕｓｃｌａｒｋｉｉ）中发现的一种特殊的钙相关蛋白ＣＡＰ－１和ＣＡＰ－２，序列分析发现其属于ＣＰＲ家族，同时具有几丁质结合能力和抑制碳酸钙沉淀
的能力，这种具有多重功能的表皮蛋白是现在研究的重点。
中华绒螯蟹（Ｅｒｉｏｃｈｅｉｒｓｉｎｅｎｓｉｓ）又称河蟹，是重要的经济养殖蟹类，广泛分布于我国东南沿海以及长江、瓯江、辽河水域。江苏是长江流域中华绒螯蟹的发源地和故乡，跨江临海，水网密布，河湖众多，有着得天独厚的发展河蟹繁育与养殖的自然条件。２０１８年，江苏河蟹养殖面积２６６６．６７ｋｍ２，年产量３２万ｔ，总产值２７０亿元，总产量和总产值均占全国总量的１／２，河蟹养殖业成为江苏渔业的优势产业［８］。目前，有关甲壳类表皮蛋白的研究主要集
中在虾类和鳌虾类上，有关短尾派中华绒螯蟹Ｒ＆Ｒ型表皮蛋白还鲜有报道。本试验通过转录组结合分子克隆获得中华绒螯蟹表皮蛋白ＣＡＰ（ｃａｌｃｉｆｉｃａｔｉｏｎ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｐｅｐｔｉｄｅ）ｃＤＮＡ序列，命名为ＥｓＣＡＰ，采用定量ＰＣＲ检测ＥｓＣＡＰ在不同组织的分布，分析ＥｓＣＡＰ在不同发育阶段以及蜕皮周期的表达规律，为后续进一步研究其在蜕皮生长中的功能作用奠定了基础。
１ 材料与方法
１．１ 研究对象
２０１９年４月从江苏省淡水水产研究所扬中基地挑取健康中华绒螯蟹１龄幼蟹作为试验样本，运至江苏省淡水水产研究所实验室室温下暂养并开展后续试验，水深５０ｃｍ，使用空气泵不间断通氧，确保养殖时箱内水体溶氧。试验开展期间采用人工饲料饲喂，每晚喂食，早上对水族箱底部污物进行及时的清理，保证养殖水环境清洁。
１．２ 主要试剂
ＴｏｔａｌＲＮＡ提取试剂盒和反转录试剂盒购自ＴａＫａＲａ公司，ＰＣＲ试剂购自生工生物（上海）股份有限公司，ｑＰＣＲ试剂（ＳＹＢＲＰｒｅｍｉｘＥｘＴａｑＴＭⅡ和荧光染料ＲＯＸ）购
自宝生物工程（大连）有限公司，ＤＮＡｍａｒｋｅｒ、ＰＵＣｍ－Ｔ载体、琼脂糖凝胶回收试剂盒等购自南京诺唯赞生物科技股份有限公司，其他试剂为国产分析纯。
１．３ 组织样品的收集
参考甲壳类分期方法，根据中华绒螯蟹壳与硬度等形态学特征分为蜕皮前期（Ｄ）、蜕皮后期（Ａ、Ｂ期）、蜕皮间期（Ｃ期）４个蜕皮时期。蜕皮前期（Ｄ），外表皮内陷，新的外表皮建逐渐形成，新生刚毛逐步从旧刚毛中分离；蜕皮后期（Ａ期），中华绒螯蟹刚刚从老旧的壳中挣脱出来，新生壳柔软黑亮而有弹性；蜕皮后期（Ｂ期），新生表皮开始钙化，新壳逐渐硬化，体长固定；蜕皮间期（Ｃ期），新表皮钙化完成，中华绒螯蟹开始大量摄食，进行营养积累，为下次蜕皮做准备。分别采集中华绒螯蟹蜕皮间期与蜕皮后期（Ｂ期）表皮、肝胰腺、肌肉、鳃、眼柄、附肢、心脏、肠道、胃、血淋巴共１０个组织样本。在解剖样品前先对样品进行清洗并用冰袋降低中华绒螯蟹的活跃度。采集中华绒螯蟹受精卵、蟤１期（Ｚ
Ⅰ
）、蟤３期（Ｚ
Ⅲ
）
、蟤５期（Ｚ
Ⅴ
）、大眼幼体和仔蟹１期６个不同发育阶段的个体样本。所有收集样本经液氮冷却后放在－８０℃冰箱保存备用。
１．４ 总ＲＮＡ的提取与ｃＤＮＡ的逆转录
用ＴａＫａＲａＭｉｎｉＢＥＳＴＵｎｉｖｅｒｓａｌＲＮＡＥｘｔｒａｃｔｉｏｎＫｉｔ试剂盒提取中华绒螯蟹各组织、不同蜕皮时期表皮和不同发育阶段个体总ＲＮＡ。提取出的总ＲＮＡ用１％琼脂糖凝胶电泳检测其质量，并用紫外分光光度计检测其浓度，测完后立即置于－８０℃保存备用。逆转录反应按照ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭＲＴｒｅａｇｅｎｔＫｉｔｗｉｔｈｇＤＮＡＥｒａｓｅｒ（ＰｅｒｆｅｃｔＲｅａｌＴｉｍｅ）试剂说明书进行，获得第１链ｃＤＮＡ，用于ＲＴ－ｑＰＣＲ反应，合成之后置于－２０℃保存备用。
１．５ 设计引物
利用在线设计引物软件Ｐｒｉｍｅｒ３ｉｎｐｕｔ设计引物，扩增全长引物ＥｓＣＡＰＦ１／Ｒ１，由表１可知ＰＣＲ反应条件为：９４℃３０ｓ；５５℃３０ｓ，７２℃１ｍｉｎ，３０个循环；７２
℃延伸１０ｍｉｎ。配制１％琼脂糖凝胶对ＰＣＲ产物进行检测，回收所需ＤＮＡ片段，之后按照ＦａｓｔＰｕｒｅ ＧｅｌＤＮＡＥｘｔｒａｃｔｉｏｎＭｉｎｉＫｉｔ试剂盒进行纯化操作。纯化后的产物与ＰＵＣｍ－Ｔ载体结合，将结合产物导入感受态细胞中进行蓝白斑筛选，挑取目的菌落。经ＰＣＲ筛选后送到生工生物（上海）股份有限公司测序。获得ＥｓＣＡＰ开放阅读框（ＯＲＦ）后，再设计定量引物ＲＴ－ＥｓＣＡＰＦ２／Ｒ２并用以进行ＲＴ－ｑＰＣＲ。
１．６ ＲＴ－ｑＰＣＲ检测
以β－ａｃｔｉｎ基因为内参基因，无菌超纯水为阴性对照，采用ＲＴ－ｑＰＣＲ（ＳＹＢＲＧｒｅｅｎ）检测表皮蛋白ＣＡＰ在不同组织、不同蜕皮时期和不同发育阶段的表达量。ＲＴ－ｑＰＣＲ反应程序：９５℃预变性５ｍｉｎ，１次循环；ＰＣＲ反应９５℃３０ｓ，６０℃２０ｓ，４０个循环。反应结束后获得扩增曲线。反应在ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ４８０荧光定量ＰＣＲ仪上进行，设ｃＤＮＡ样
表１ 中华绒螯蟹表皮蛋白ＥｓＣＡＰ基因扩增引物
基因引物名称引物序列（５′→３′）应用ＥｓＣＡＰ
ＥｓＣＡＰＦ１ＧＴＴＴＴＧＣＴＧＧＴＣＴＣＧＣＴＣＴＧＥｓＣＡＰ序列全长扩增
ＥｓＣＡＰＲ１ＣＧＴＣＧＴＣＧＴＴＴＡＣＴＴＧＴＣＧＴＥｓＣＡＰ序列全长扩增ＲＴ－ＥｓＣＡＰ
ＲＴ－ＥｓＣＡＰＦ２ＧＧＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＥｓＣＡＰ定量扩增
ＲＴ－ＥｓＣＡＰＲ２ＴＧＴＣＧＴＣＴＴＣＣＴＣＧＣＴＡＴＣＣＥｓＣＡＰ定量扩增
β－ａｃｔｉｎ
β－ａｃｔｉｎＦＧＣＡＴＣＣＡＣＧＡＧＡＣＣＡＣＴＴＡＣＡ内参β－ａｃｔｉｏｎ扩增
β－ａｃｔｉｎＲＣＴＣＣＴＧＣＴＴＧＣＴＧＡＴＣＣＡＣＡＴＣ内参β－ａｃｔｉｏｎ扩增
品３次重复，反应结束后采集目标基因的Ｃ
Ｔ
值（Ｃ
表示循环数；Ｔ表示荧光阈值）和内参基因的Ｃ
Ｔ负折射
值，ｑＲＴ－ＰＣＲ结果采用２－ΔΔＣＴ法分析，数据处理和作图使用Ｅｘｃｅｌ和ＳｉｇｍａＰｏｌｔ１４．０软件，结果均以“ｘ±ｓ”表示。采用ＳＰＳＳ软件的邓肯法分析ＥｓＣＡＰ表达量是否具有显著差异。
１．７ 生物信息学分析
南方cass
用ＤＮＡＭＡＮ软件将所得的ＤＮＡ序列翻译成蛋白序列，用Ｅｄｉｔｓｅｑ软件对蛋白序列理化性质和相对分子质量进行预测，用ＮＣＢＩ在线工具ＯＲＦｆｉｎｄｅｒ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｇｏｒｆ／ｇｏｒｆ．ｈｔｍｌ）搜索ＥｓＣＡＰ开放阅读框；从ＮＣＢＩ数据库中用ＢＬＡＳＴＰ程序检索氨基酸同源性序列，并用Ｃｌｕｓｔａｌｗ２和Ｇｅｎｅｄｏｃ软件对中华绒螯蟹表皮蛋白ＥｓＣＡＰ基因和检索出的氨基酸序列进行同源性比对，用ＭＥＧＡ６．０软件构建进化树，用ＤＮＡＭＡＮ对其进行序列一致性分析，使用在线软件ＳＭＡＲＴ（ｈｔｔｐ：／／ｓｍａｒｔ．ｅｍｂｌ－ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ．ｄｅ／）进行氨基酸序列的结构域分析，使用ｃｕｔｉｃｌｅＤＢ（ｈｔｔｐ：／／ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ２．ｂｉｏｌ．ｕｏａ．ｇｒ／ｃｕｔｉｃｌｅＤＢ／ｉｎｄｅｘ．ｊｓｐ）在线分析Ｒ＆Ｒ序列。
２ 结果与分析
２．１ 中华绒螯蟹表皮蛋白基因ＥｓＣＡＰｃＤＮＡ的序列分析
序列结果显示，中华绒螯蟹表皮蛋白基因ＥｓＣＡＰｃＤＮＡ序列全长３８０ｂｐ，其中包括２９ｂｐ的５′端非编码区、４５ｂｐ３′端非编码区和３０６ｂｐ的开放阅读框，共编码１０１个氨基酸残基（ＧｅｎＢａｎｋ登陆号为ＭＴ７７１６４７）。编码蛋白的理化性质分析预测该蛋白的相对分子质量为１０．９ｋｕ，理论等电点为３ ８７。蛋白质结构预测分析结果（图１）表明，中华绒螯蟹ＥｓＣＡＰ氨基酸序列主要有１个信号肽、１个几丁质结合域ＣｈｔＢＤ４和１个低复杂度区域。其中，几丁质结合域包含Ｒ＆Ｒ保守序列Ｇｘ８Ｇｘ６ＹｘＡｘＥｘＧＹｘ７Ｐ（其中ｘ表示多个氨基酸占据的位置，数字表示氨基酸的数目），表明ＥｓＣＡＰ属于ＲＲ１亚族。此外，ＥｓＣＡＰ氨基酸序列Ｃ端富含天冬氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸，
属于典型酸性蛋白。
２．２ 中华绒螯蟹表皮蛋白ＥｓＣＡＰ的同源性分析
由图２可知，与其他甲壳类表皮蛋白基因序列比较发现，中华绒螯蟹表皮蛋白ＥｓＣＡＰ氨基酸序列与蓝蟹（Ｃａｌｌｉｎｅｃｔｅｓｓａｐｉｄｕｓ）、南美白对虾、克氏原螯虾（Ｐ．ｃｌａｒｋｉｉ）、远海梭子蟹（Ｐｏｒｔｕｎｕｓｐｅｌａｇｉｃｕｓ）的表皮蛋白相似度在４
０．６％～５９．５％间。其中，中华绒螯蟹ＥｓＣＡＰ与克氏原螯虾ＣＡＰ２氨基酸序列同源性最高，为５９．５％。采用Ｍｅｇａ６．０软件对包括中华
绒螯蟹表皮蛋白ＥｓＣＡＰ在内的１２组表皮蛋白序列进行系统进化树的构建。使用软件中的Ｎｅｉｇｈｂｏｒ－Ｊｏｉｎｉｎｇ（ＮＪ）方法，进行１０００次独立分析。系统进化树分析结果（图３）表明，中华绒螯蟹表皮蛋白ＥｓＣＡＰ与其他虾蟹类酸性表皮蛋白聚类为一支，而昆虫类表皮蛋白聚为另一支，系统进化树表明ＥｓＣＡＰ与虾蟹类ＣＡＰ
类表皮蛋白同源性较高。
２．３ 中华绒螯蟹表皮蛋白ＥｓＣＡＰ在不同组织中的表达
由图４可知，以中华绒螯蟹肌球蛋白β－ａｃｔｉｎ
为内参对照，通过ＲＴ－ｑＰＣＲ方法检测中华绒螯蟹表皮蛋白ＥｓＣＡＰ的组织分布情况。结果表明，ＥｓＣＡＰ在蜕皮间期不表达，主要在蜕皮后期的表皮组织中表达。
２．４ 中华绒螯蟹表皮蛋白ＥｓＣＡＰ在不同蜕皮时期的表达
选取中华绒螯蟹蜕皮前期（Ｄ）、蜕皮后期（Ａ、Ｂ）、蜕皮间期（Ｃ）的表皮组织，以中华绒螯蟹肌球蛋白基因β－ａｃｔｉｏｎ为内参对照，通过ＲＴ－ｑＰＣＲ方法检测中华绒螯蟹表皮蛋白ＥｓＣＡＰ基因在不同蜕皮时期的表达。由图５可知，中华绒螯蟹表皮蛋白
ＥｓＣＡＰ进入到蜕皮前期（Ｄ）表达量较低，到蜕皮后期（Ａ、Ｂ）高表达，在蜕皮间期（Ｃ）不表达。中华绒螯蟹表皮蛋白Ｅ
ｓＣＡＰ在蜕皮时期的表达趋势与表
皮形成及钙化时间相一致。
２．５ 中华绒螯蟹表皮蛋白ＥｓＣＡＰ在不同发育时期的表达
选取中华绒螯蟹受精卵、蟤１期（ＺⅠ）、蟤３期（ＺⅢ）、蟤５期（ＺⅤ）、大眼幼体和仔蟹１期共６个不同发育时期个体，以中华绒螯蟹肌球蛋白β－ａｃｔｉｎ
作为内参对照，通过ＲＴ－ｑＰＣＲ方法来检测ＥｓＣＡＰ基因的表达趋势。由图６可知，表皮蛋白ＥｓＣＡＰ基因在受精卵时期表达最低，进入到蟤状幼体时期与大眼幼体时期表达量有所升高，到仔蟹１期表达量明显升高，
ＥｓＣＡＰ的表达量随着中华绒螯蟹发育阶段的推进而产生变化，总体呈升高的趋势。３ 讨论与结论
表皮蛋白与几丁质结合构成支撑机体抵御外界不良环境的外骨骼，在甲壳类的生长发育及蜕皮
硬化中具有重要的作用［３］。甲壳类表皮蛋白数量
庞大，根据其保守序列的不同，可分为ＣＰＲ、ＣＰＡＰ、Ｃｒｕｓｔ－１８、ｐｏｓｔｍｏｌｔ－１８等家族，其中具有Ｒ＆Ｒ
保守
结构域序列的ＣＰＲ家族分布最为广泛，在甲壳类与
昆虫中均存在［９－１０］
。本研究克隆获得的中华绒螯
蟹表皮蛋白ＥｓＣＡＰ含有与几丁质结合的Ｒ＆Ｒ结构
域，属于ＣＲＰ家族中ＲＲ－１亚类，对中华绒螯蟹表皮的形成是至关重要的。ＥｓＣＡＰ蛋白的Ｎ端与Ｃ端富含亲水氨基酸，如丙氨酸、缬氨酸、脯氨酸和甘氨酸，亲水性强，主要分布于未钙化的表皮，通过Ｒ＆Ｒ结构域与几丁质相结合，多肽Ｎ端和Ｃ端区域延伸至纤维间隙，形成水填充的非共价键网络，对
超级解霸3500保持表皮的柔韧性不可或缺［
５］
。此外ＥｓＣＡＰ蛋白的Ｃ端富含天冬氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸，等电点为３
．８７，是个典型的酸性分子。酸性大分子在表皮的硬化过程中起着至关重要的作用［
１１－１２］
。在日本对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｊａｐｏｎｉｃｕｓ）蜕皮后期尾扇表皮组织中克隆获得ＤＤ４（后来命名为Ｃｒｕｓｔｏｃａｌｃｉｎ）和ＤＤ５
酸性表皮蛋白，具有钙结合能力［１３－１４］
。从克氏原螯
虾表皮基质中分离纯化出２种钙化相关肽ＣＡＰ－１
智勇大冲关2009
和ＣＡＰ－２，富含酸性氨基酸［１５－１６］。其中，ＣＡＰ－１
的钙结合能力明显大于ＣＡＰ－２，这与ＣＡＰ－１酸性氨基酸的数量多，在Ｃ末端分布更为集中有
关［１５－１６］。中华绒螯蟹ＥｓＣＡＰ氨基酸残基结构和分
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议