荧光分析法1荧光：物质分子接受光子能量被激发后，从激发态的最低振动能级返回基态时发射出的光。2荧光分析法是根据物质的荧光谱线位置及其强度进行物质鉴定和含量测定的方法。荧光分析法的优点：灵敏度高，选择性好，比紫外可见分光光度法低3个数量级以上。3振动弛豫：处于激发态各振动能级的分子通过与溶剂分子的碰撞而将部分振动能量传递给溶剂分子，其电子则返回到同一电子激发态的最低振动能级的过程。（非辐射跃迁） 4内部能量转换：简称内转换，是当两个电子激发态之间的能量相差较小以致其振动能级有重叠时，受激分子常由高电子能级以无辐射方式转移至低电子能级的过程。
5荧光发射：无论分子最初处于哪一个激发单重态，通过内转换及振动弛豫，均可返回到第一激发单重态的最低振动能级，然后再以辐射形式发射光量子而返回至基态的任一振动能级上，这时发射的光量子称为荧光。（辐射）
6外部能量转换：简称外转换，是溶液中的激发态分子与溶剂分子或与其他溶质分子之间互相碰撞而失去能量，并以热能的形式释放能量的过程。（非辐射)
7体系间跨越：是处于激发态分子的电子发生自旋反转而使分子的多重性发生变化的过程。（非辐射）
8磷光发射：经过体系间跨越的分子再通过振动弛豫降至激发三重态的最低振动能级，分子在激发三重态的最低振动能级可以存活一段时间，然后返回至基态的各个振动能级而发出光辐射，这种光辐射称为磷光。磷光的坡长比荧光更长。
9溶液荧光光谱的特征：①斯托克斯位移：荧光发射波长总是大于激发光波长。激发态分子通过内转换和振动弛豫过程而迅速到达第一激发单重态S1的最低振动能级。②荧光光谱的形状与激发波长无关，荧光发射光谱只有一个发射带。③荧光光谱与激发光谱的镜像关系。10影响荧光强度的外部因素：
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六陈滑县县志⑴温度（温度升高溶液中荧光物质的荧光效率和荧光强度将降低）；⑵溶剂（荧光波长随着溶剂极性的增强而长移，荧光强度也增强）；⑶酸度（每一种荧光物质都有它最适宜的发射荧光的存在形式，也就是它最适宜的PH范围）；⑷荧光熄灭剂（是指荧光物质分子与溶剂分子或其他溶质分子相互作用引起荧光强度降低的现象；荧光熄灭的原因：①因荧光物质分子和熄灭剂分子碰撞而损失能量；②荧光物质的分子与熄灭剂分子作用生成了本身
不发光的配位化合物；③溶解氧的存在，使荧光物质氧化，或是由于氧分子的顺磁性，促进了体系间跨越，使激发单重态的荧光分子转变至三重态；④浓度较大时，还发生自熄灭现象）
⒂散射光。瑞利光：光子和物质分子发生弹性碰撞时，不发生能量的交换，仅仅是光子运动方向发生改变。拉曼光：光子和物质分子发生非弹性碰撞时，在光子运动方向发生改变的同时，光子和物质分子发生能量的交换，光子把部分能量转移给物质分子或物质分子获得部分能量，而发射出比入射出比入射光稍长或稍短的光。
11荧光分光光度计的主要部件：激发光源、激发单器、发射单器、样品池及检测系统组成。
12荧光和磷光的区别在于荧光是从单线激发态开始的，磷光是由三线激发态开始的。13能够发射荧光的物质应具备的条件是：有强的紫外-可见吸收、有一定的荧光效率。14为什么荧光分析法的灵敏度比紫外分光光度法高？答：荧光分析法中与浓度相关的参数是荧光物质发射的荧光强度，测量的方式是在入射光的直角方向，即在黑暗背景下检测所发射光的强度信号，因此可采用增强入射光强度或增大检测信号的放大倍数来提高灵敏度。在分光
光度法中与浓度相关的参数是吸光度，而吸光度A=lgI0／I，如果增大入射光强度，相应也增大了透射光强度，所以其比值不会变化，如果增大检测器的发大倍数，检测到的入射光强度和透射光强度也同时增大，同样不能提高其比
值，也就不能达到提高灵敏度的目的。所以荧光分析法的灵敏度比紫外分光光度法高。15与紫外可见分子吸收光谱法不同，荧光样品池的四面均为磨光透明面，为什么？
答：为了消除入射光及散射光的影响，荧光的测定应在激发光呈直角方向上进行。因此荧光样品池的四面均为磨光透明面。中国医药指南
16物质的分子体系中存在电子能级、振动能级和转动能级，在室温时大多数分子处在电子基态的最低振动能级。
17激发光谱表示不同激发波长的辐射引起物质发射其中一波长荧光的相对效率。绘制激发光谱曲线时，固定发射单器在其中一波长，通过激发单器，以不同波长的入射光激发荧光物质，记录荧光强度（F）对激发波长（λe）的关系曲线，即激发光谱。
18荧光光谱：表示在所发射的荧光中各种波长组分的相对强度。绘制激发光谱时，使激发
光的波长和强度保持不变，通过发射单器扫描以检测各种波长下相应的荧光强度，记录荧光强度（F)对发射波长（λem）的关系曲线，即荧光光谱。
19荧光定量分析法：以荧光强度为纵坐标，对照品溶液浓度为横坐标绘制校正曲线。与紫外可见分光光度法不同的是，在绘制校正曲线时，常采用系列中其中一对照品溶液作为基准，将空白溶液的荧光强度读数调至0，将该对照品溶液的荧光强度读数调至100%或50%然后测定系列中其他各个对照品溶液的荧光强度。在实际工作中，当仪器调零之后，先测定空白溶液的荧光强度，然后测定对照品溶液的荧光强度，从后者中减去前者，得到的就是对照品溶液本身的荧光强度。在绘制校正曲线。
20融合区别荧光、磷光、瑞丽光和拉曼光？如何减少散射光对荧光测定的干扰？
答：荧光：是一些物质吸收一定的紫外或可见光后，基态分子跃迁到激发单线态的各个不同能级，然后经过振动弛豫回到第一激发态的最低振动能级，在发射光子后，分子跃迁回基态的各个不同振动能级，这时分子发射的光称为荧光。荧光的波长比原来照射的紫外光的波长更长。磷光：是有些物质的激发分子通过振动弛豫下降到第一激发态的最低振动能后，经过体系间跨越至激发三重态的高振动能层上，再通过振动弛豫降至三重态的最低振
动能层，然后发出光辐射跃迁至基态的各个振动能层，这种光辐射称为磷光。磷光的波长比荧光更长。瑞丽光：光和物质分子发生弹性碰撞时，不发生能量的交换，仅是光子运动的方向发生改变，这种散射光叫做瑞丽光，其波长和入射光相同。
第十一届全国人民代表大会第四次会议拉曼光：光和物质分子发生非弹性碰撞时，在光子运动方向发生改变的同时，光子无物质分子发生能量交换，使光子能量发生改变，当光子将全部能量转给物质分子时，光子能量减少，波长比入射光更长，当光子从物质分子得到能量时，光子能量增加，波长比入射光短，这两种光均称为拉曼光。
为了消除瑞利光散射的影响，荧光的测量通常在这与激发光成直角的方向上进行，并通过调节荧光计的狭缝宽度来消除。
解缙
为了消除拉曼光的影响可选择适当的溶剂和选用合适的激发光波长。21何为荧光效率？具有哪些分子结构的物质有较高的荧光效率？答：荧光效率又称为荧光量子效率，是物质发射荧光的量子数和所吸收的激发光量子数的比值，用Ψf表示。以下分子结构的物质有较高的荧光效率：
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