IgG是免疫球蛋白（简称IgG）的主要成分之一，分子量约为15万～16万。IgG是动物和人体血浆的重要成分之一。血浆蛋白质的成分多达70余种，要从血浆中分离出IgG，首先要进行尽可能除去其他蛋白质成分的粗分离程序，使IgG在样品中比例大为增高，然后再纯化而获得IgG。盐析法是粗分离蛋白质的重要方法之一，是利用各种蛋白质所带电荷不同、相对分子质量不同，致使在高浓度的盐溶液中溶解度就不同，因此一个含有几种蛋白质的混合液，就可用不同浓度的中性盐来使其中各种蛋白质先后分别沉析下来，达到分离纯化的目的，这种方法称为分级盐析。其中最常用的盐析剂是硫酸铵，本实训任务利用硫酸铵饱和溶液沉淀并分离目的蛋白质。 ［任务实施］
1.建立工作小组，制定工作计划，确定具体任务，任务分工到个人，并记录到工作表。
2.收集硫酸铵盐析血浆中的IgG工作中的必须信息，掌握相关知识及操作要点，与指导教师共同确定出一种最佳的工作方案。
3.完成任务单中实际操作前的各项准备工作。
（1）材料准备 新鲜动物血清
（2）试剂 饱和硫酸铵溶液：取化学纯（NH4）2SO4800g，加蒸馏水1000ml，不断搅拌下加热至50小型计算机～60℃，并保持数分钟，趁热过滤，滤液在室温中过夜，有结晶析出，即达到100％饱和度，使用时用浓NH频偏4OH调至PH7.0。
0.2mol/L pH7.2的磷酸盐缓冲液（PBS）其配制方法如下：配A液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液（称取磷酸氢二钠5.37g加去离子水定容至100mL）配B液：0.2mol/L磷酸二氢钠溶液（称取磷酸二氢钠3.12g加去离子水定容至100mL）取A液约72mL，取B液约28mL，然后将这两种溶液边混合边用高精度pH试纸检测，调配成约100mL浓度为0.2mol/L pH7.2的磷酸盐缓冲液备用。
（3）器具 离心机、烧杯（500mL和250mL）、高精度pH试纸、大容量瓶、移液管、玻璃
棒等。
中兴u980二、操作步骤
1.在烧杯中加入10ml血清和10ml 0.2mol/L，PH7.2磷酸盐缓冲液，混匀。用胶头滴管吸取饱和硫酸铵溶液，边滴加边搅拌于血清混合溶液中，使溶液的最终饱和度为20%。然后以3000r/min离心10min。弃去沉淀（沉淀为纤维蛋白原），在上清液中为清蛋白、球蛋白。
广丰县教育局
2.量取上清液的体积，置于另一离心管中，用滴管继续在上清液中滴加饱和硫酸铵溶液，使溶液的饱和度达到50%（计算出应加入饱和硫酸铵溶液的体积）。加完后在4℃花腔女高音放15min，以3000r/min离心10min，清蛋白在上清液中，沉淀为球蛋白。弃去上清液，留下沉淀部分。
3.将所得的沉淀再溶于10ml0.2mol/L，PH7.2磷酸盐缓冲液中。滴加饱和硫酸铵溶液，使溶液的饱和度达35%（计算出应加入饱和硫酸铵溶液的体积）。加完后4℃放置20min， 3000r/min离心15min，α，β球蛋白在上清液中，沉淀为IgG。弃去上清液，即获得粗制的IgG沉淀。
4.测定IgG粗品的含量
取上述IgG粗制品，加10ml生理盐水溶解。紫外分光光度计上测A280nm，按公式：c=A/E
式中c为IgG的浓度；A为测的A280nm；E为E1%280nm(表示浓度为1%的IgG，在280nm处用1cm吸收池测得的光吸收值，值为13）。
三、结束工作
1.填好所有操作记录、任务单、各种评价表。
2.检查设备仪表是否洁净完好。
3.检查工作场地及环境卫生。
4.进行任务总结。
［工作反思］
1.如何继续分离纯化上清液中球蛋白？
大同大学工学院2.如何加磷酸盐缓冲液？
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