8 Experimental research | 试验研究
选址问题0 引言
在我国养殖业和野生动物保护范围中，水禽占有重要的一席之地，通常运用传代细胞系研究病毒感染并制作抗体或疫苗。在水禽方面，相关论文较为稀少，在养殖鹅的疾病中，特别是星状病毒所引起的禽类痛风[1]上还没有较为成熟的研究。大部分病毒都会有其特定的亲和的组织部位，每种病原对不同生物的组织亲和性也不同，禽类中目前研究较为完善的鸡细胞系与鹅类疾病的研究并不适配，同时由于没有SPF 鹅胚导致分离病毒时总会被母源抗体影响难以进一步分离病毒，是研发疫苗的一道难关。 利用SV40-LT 质粒转导细胞，SV40病毒即为猿猴空泡病毒40，源于恒河猿猴的肾脏细胞，人们发现sv40病毒是一种小DNA 肿瘤病毒，根据相关文献介绍，SV40病毒可转化细胞的功能，即进入到细胞中可使细胞转化并使增殖能力加强，部分细胞获得无限增殖[2]。相关研究表明，SV40病毒的细胞转化特性主要与早期蛋白T 抗原有关，SV40-LT 抗原通过与肿瘤抑制基因的产物相结合使其失活来介导细胞的永生化[3]，因此SV40LT 抗原被广泛用于肿瘤发病机制的研究和转基因动物模型的建立，且由于其具有较强的细胞转化功能，常被用来建立永生化细胞系[4-5]。研究将SV40-LT 抗原基因转导进入
基金项目：利用SV40-LT 载体构建水禽肾或胚胎成纤维细胞系，项目编号：202010225017作者简介：李清欣（1997-），女，山东菏泽人，在读硕士研究生，研究方向：野生动物传染病。通信作者：张彦龙
荣乌高速车祸（1968-），男，吉林长春人，副教授，博士，研究方向：野生动物传染病。
利用SV40-LT载体构建鹅肾细胞系
李清欣，颜安，苏明欣，况思溶，张彦龙
（东北林业大学，哈尔滨 150040）
摘要：近年我国的水禽养殖业迅速发展，但对于鸭鹅等水禽的疾病防控主要专注于禽流感、新城疫等疾病。自2017年起于我国养鹅场突然爆发的雏鹅痛风至死亡等的疾病，由于缺乏适宜的实验室宿主系统，对病毒的分离鉴定及后续疫苗的开发产生深远影响。因此为便于日后的病毒扩增及深入研究，将原代鹅肾细胞进行永生化培养。研究主要针对鹅构建永生化细胞系，使用22日龄左右鹅胚，处理组织剪碎消化，采用组织块贴壁法培养原代细胞。经感受态细胞扩增PcDNASV40-LT 质粒载体，设定引物并用PCR 对质粒DNA 进行验证，证明质粒扩增表达成功后转染原代培养的鹅肾组织细胞。通过直接接触法进行细胞转染，随后采用抗生素筛选出获得SV40-LT 基因表达的阳性细胞，挑取单一转化灶经过多次传代培养，成功建立鹅肾细胞系。
关键词：鹅；肾细胞；永生化
中图分类号：S858.33 文献标识码：B doi：10.3969/j.issn.2096-3637.2021.07.003
Construction of Goose Kidney Cell Line Using SV40-LT Vector
Li Qingxin ，Yan An ，Su Mingxin ，Kuang Sirong ，Zhang Yanlong逸珑8133
（Northeast Forestry University ，Harbin 150040，China ）
Abstract ：In recent years ，China's waterfowl breeding industry has developed rapidly ，but the prevention and control of waterfowls such as ducks and geese mainly focus on avian influenza ，Newcastle disease and other diseases ．Since 2017，there has been a sudden outbreak of gosling gout and death in goose farms in China ．Due to the lack of a suitable laboratory host system ，the virus isolation and identification and subsequent vaccine development have had a far-reaching impact ．Therefore ，in order to facilitate the further study and amplification of the virus ，the primary goose kidney cells were immortalized in culture ．In this study ，immortalized cell lines were constructed for geese ．The 22-day-old embryos were used to cut and digest the tissues ．PcDNASV40-LT plasmid vector was amplified by Natural competence ，primers were set and PCR was used to verify the plasmid DNA ．It was proved that Pcdnasv40-lt plasmid vector was successfully amplified and expressed and then transfected into primary cultured goose kidney tissue cells ．The positive cells with Sv40-lt gene expression were obtained by direct contact method ，an
d then the single transformed focus was selected and subcultured for several times to establish goose kidney cell line ．Key words ：goose ，Kidney cell ，immortalization
图1 SV40-LT质粒酶切后电泳
细胞永生化结果
鹅肾细胞在导入PcDNASV40-LT质粒载体后，经抗生素筛选后培养出现转化灶。见图2。
Experimental research | 试验研究
3 鹅肾细胞系建立的意义
当今水禽养殖已成为不少人发家致富的法宝，而鹅养殖因为投入成本低，收益高，更是成为水禽养殖业的首选。鹅身上存在很多传染病，给人们的养殖效益带来很大损失。中国畜牧兽医学会兽医公共卫生分会研讨会议就曾讨论过鹅肾致病型星状病毒[10]。鹅星状病毒主要感染22日龄左右的鹅胚[11]，会导致鹅致死性肝炎、肠炎死亡综合症及内脏痛风综合症等，给养殖业带来巨大困难，也带来一定的公共卫生问题。且星状病毒难以在实验室培养，缺乏适当的实验室宿主系统，实验鹅肾细胞系的建立为之后某些病毒的分离培养鉴定提供了具有可行性的实验室宿主系统。 4 结束语
SV40-LT是最可靠和简单的基因，用于建立永生化细胞。利用SV40-LT载体构建鹅肾细胞系，建立后的永生化细胞可以用于鹅肾致病性病毒的分离培养，从微观上对这些病毒进行进一步的研究，有助于后续进一步了解其致病机制及影响因素。还有助于制备相关疫苗或者性的抗体，增加养殖效益，推动社会经济发展，为该疾病的防治及易感组织为鹅肾的病毒的防治提供一些思路与帮助。
参考文献
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一株紫丁香教学设计全国畜牧总站召开2021年畜牧行业年报数据预审会
为加强年报数据审核，提升年报数据质量，2021年3月24日，全国畜牧总站在江苏苏州召开了2021年畜牧行业年报数据预审会。此次会议内容主要是审核各省上报的行业年报数据，并就年报数据采集层级下沉和统计员技能大赛等年内重点工作进行研讨。全国畜牧总站统计信息处处长杨红杰、副处长张利宇，江苏省畜牧总站站长潘雨来、副站长王勇以及来自全国11名畜牧统计员等17人参加了预审会。
预审会议上统计信息处处长杨红杰肯定了近年来统计监测工作取得的成绩，并对2021年畜牧行业年报数据预审工作提出了要求，要求统计员要充分认识畜牧行业年报工作的重要性，充分认识当前畜牧行业年报统计工作的优势与短板，要求各级统计员增强工作责任感，积极探索数据采集机制，加强统计队伍建设，提升统计队伍专业水平，做好新形势下的畜牧行业年报统计工作。
（全国畜牧总站统计信息处） 行业简讯
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