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ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ
Ｖｏｌ．２８牞Ｎｏ．７牞Ａｐｒｉｌ５牞２０１９
第一作者：黄海燕，女，壮族，硕士研究生，副主任药师，研究方向为药品检验及质量标准，（）３４６７８０９６１３＠ｑｑ．ｃｏｍ 。△通信作者：钟建理，男，大学本科，副主任药师，研究方向为食品药品检验及质量标准，（）１１８６４２１２８２＠ｑｑ．ｃｏｍ
。·检验检测·
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６－４９３１．２０１９．０７．００９
黄海燕，饶伟文，钟建理△
（广西桂林市食品药品检验所，广西桂林
５４１００１
）摘要：目的建立消肿片中枫香脂定性鉴别的薄层谱（ＴＬＣ）法及测定松香酸含量的高效液相－二极管阵列（ＨＰＬＣ－ＤＡＤ
）法。方法采用ＴＬＣ法对枫香脂进行定性鉴别。谱柱为ＡｇｉｌｅｎｔＺＯＲＢＡＸＳＢ－Ｃ１８柱牗２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ牘，流动相为乙腈－０．１％甲酸溶液牗１８∶８２牘，流速为１．０ｍＬ／ｍｉｎ，柱温为３５℃，检测波长为２４１ｎｍ，并同时采集２００～４００ｎｍ波长的光谱图， 对消肿片中是否含有松香酸进行定性、定量分析。结果５批消肿片（５个生产厂家）有４批ＴＬＣ鉴别未检出枫香脂，而在ＨＰＬＣ－ＤＡＤ法中检出了松香酸。结论该方法准确可靠，操作简单，可用于消肿片中枫香脂的鉴别和松香酸的定性、定量分析。关键词：消肿片；枫香脂；松香酸；薄层谱法；高效液相－二极管阵列法
中图分类号：Ｒ９３２；Ｒ２８４．１；Ｒ２８６．０
文献标识码：Ａ
文章编号：１００６－４９３１牗２０１９牘０７－００３０－０３
ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＬｉｑｕｉｄａｍｂａｒｉｓＲｅｓｉｎａａｎｄＩｎｓｐｅｃｔｉｏｎｏｆＡｂｉｅｔｉｃＡｃｉｄｉｎＸｉａｏｚｈｏｎｇＴａｂｌｅｔｓ
ＨＵＡＮＧＨａｉｙａｎ牞ＲＡＯＷｅｉｗｅｎ牞ＺＨＯＮＧＪｉａｎｌｉ
牗ＧｕａｎｇｘｉＧｕｉｌｉｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＦｏｏｄａｎｄＤｒｕｇＣｏｎｔｒｏｌ牞Ｇｕｉｌｉｎ牞Ｇｕａｎｇｘｉ牞Ｃｈｉｎａ５４１００１
牘Ａｂｓｔｒａｃｔ牶ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａＴＬＣｍｅｔｈｏｄｆｏｒｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｌｉｑｕｉｄｄａｍｂａｒｉｓｒｅｓｉｎａａｎｄａｎＨＰＬＣ－ＤＡＤｍｅｔｈｏｄｆｏｒｃｏｎｔｅｎｔｄｅ ｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆａｂｉｅｔｉｃａｃｉｄｉｎＸｉａｏｚｈｏｎｇＴａｂｌｅｔｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＴＬＣｍｅｔｈｏｄｗａｓｕｓｅｄｆｏｒｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｆｏｒＬｉｑｕｉｄｄａｍｂａｒｉｓｒｅｓｉｎａ．ＴｈｅａｂｉｅｔｉｃａｃｉｄｉｎＸｉａｏｚｈｏｎｇＴａｂｌｅｔｓｗａｓｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅｌｙａｎｄｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｌｙａｎａｌｙｚｅｄｗｉｔｈｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｃｏｌｕｍｎｏｆＡｇｉｌｅｎｔＺＯＲＢＡＸ
ＳＢ－Ｃ１８ｃｏｌｕｍｎ牗２５０ｍｍ×４．６ｍｍ牞５μｍ牘牞ｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｏｆａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ－０．１％ｆｏｒｍｉｃａｃｉｄ牗１８∶８２牘牞ｔｈｅｆｌｏｗｒ
ａｔｅｏｆ１．０ｍＬ／ｍｉｎ牞ｔｈｅｃｏｌｕｍｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｏｆ３５℃ａｎｄｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｏｆ２４１ｎｍ牞ａｎｄｔｈｅｓｐｅｃｔｒｕｍａｔｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｏｆ２００－４００ｎｍｗａｓ
ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙｃｏｌｌｅｃｔｅｄ．ＲｅｓｕｌｔｓＡｍｏｎｇｔｈｅ５ｂａｔｃｈｅｓｏｆＸｉａｏｚｈｏｎｇＴａｂｌｅｔｓ牗５ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅｒｓ牘牞ｌｉｑｕｉｄｄａｍｂａｒｉｓｒｅｓｉｎａｗｅｒｅｎｏｔｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｉｎ４ｂａｔｃｈｅｓ牞ａｎｄａｂｉｅｔｉｃａｃｉｄｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＨＰＬＣ－ＤＡＤｉｎｔｈｅｓａｍｅ４ｂａｔｃｈｅｓｏｆＸｉａｏｚｈｏｎｇＴａｂｌｅｔｓ．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＴｈｅｍｅｔｈｏｄｓａｒｅａｃｃｕｒａｔｅ牞ｒｅｌｉａｂｌｅａｎｄｓｉｍｐｌｅ牞ｗｈｉｃｈｃａｎｂｅｕｓｅｄｆｏｒｔｈｅｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｌｉｑｕｉｄｄａｍｂａｒｉｓｒｅｓｉｎａａｎｄｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅａｎｄｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆａｂｉｅｔｉｃａｃｉｄｉｎＸｉａｏｚｈｏｎｇＴａｂｌｅｔｓ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ牶ＸｉａｏｚｈｏｎｇＴａｂｌｅｔｓ牷ｌｉｑｕｉｄｄａｍｂａｒｉｓｒｅｓｉｎａ牷ａｂｉｅｔｉｃａｃｉｄ牷ＴＬＣ牷ＨＰＬＣ－ＤＡＤ
消肿片收载于《卫生部药品标准·中药成方制剂
牗第七册牘》，由枫香脂、没药、当归、制草乌、地龙、乳香、马钱子、香墨和五灵脂９味中药组方，具有消肿拔毒功
效，用于瘰疬痰核、流注、乳房肿块、阴疽肿毒等犤１犦。方中枫香脂、乳香、没药均为树脂类原料药，且枫香脂为君药，用量比较大。枫香脂质量参差不齐，市场掺杂、掺假现象严重，而乳香和没药为进口药材，来源有限，价格较
贵，市场上常有伪劣品出现犤２－３
犦。伪劣枫香脂、乳香、没
药药材多为用松香掺假，含有松香酸，如误用于中成药生产中，将严重影响中成药的质量。本研究中采用高效slie
液相－二极管阵列（ＨＰＬＣ－ＤＡＤ）法检测５个厂家的５批消肿片样品，结果检出有松香酸的４批；同时，枫香脂
薄层谱（ＴＬＣ）法鉴别试验发现，结果仅有１批检出枫香脂，其余４批未检出。现报道如下。１仪器与试药
１．１仪器
Ｗａｔｅｒｓ２６９５型高效液相谱仪（分离单元－Ｗａｔｅｒｓ
２９９８ＰＡＤ检测器，
Ｗａｔｅｒｓ公司）；ＸＳ２０５ＤＵ型电子分析天平（梅特勒－托利多公司）；ＫＱ－６００Ｅ型超声仪（
昆山市超声仪器有限公司）；ＣＡＭＡＧＡＵＴＯＭＡＴＩＣＴＬＣＳＡＭＰＬＥＲ４全自动点样仪，
ＣＡＭＡＧＴＬＣＶｉｓｕａｌｉｚｅｒ薄层谱照相仪，均购于ＣＡＭＡＧ公司。１．２试药
松香酸对照品牗批号为１１１９３８－２０１２０１
牘，枫香脂对照药材牗批号为１２１６３７－２０１２０１牘，均购于中国食品药品检定研究院；乙腈、甲酸为谱纯，其余试剂均为分
析纯，水为高纯水；硅胶ＧＦ２５４预制薄层板（青岛鼎康硅胶有限公司）；消肿片（市售品，５批）。２方法与结果
２．１枫香脂ＴＬＣ法鉴别
取本品２片，研细，加甲醇２０ｍＬ，超声处理２０ｍｉｎ，滤过，滤液浓缩至２ｍＬ，作为供试品溶液。按消肿片处方比例，制备不含枫香脂的阴性样品，同法制成阴性对照品溶液。另取枫香脂对照药材０．２ｇ，加甲醇１０ｍＬ，超声处理２０ｍｉｎ，取上清液作为对照药材溶液。照ＴＬＣ法试验，吸取上述３种溶液各１μＬ
，分别点于同一硅胶ＧＦ２５４薄层板上，以石油醚牗６０～９０℃牘－乙酸乙酯－冰醋酸牗９∶１∶０．１
牘为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光ＤｒｕｇＲｅｓｅａｒｃｈ
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ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ
Ｖｏｌ．２８牞
Ｎｏ．７牞Ａｐｒｉｌ５牞２０１９
ＡＵｔ／ｍｉｎ
０
琉璃砂５１０１５
２０
Ｃ
０．３２０．２４
０．１６０．０８
０
ｔ／ｍｉｎ
０
５
１０１５
２０
Ｂ
０．０８０．０６０．０４０．０２
０
ＡＵＡＵｔ／ｍｉｎ
０
５
１０
１５２０
Ａ
０．０１２０．００８０．００４
０－０．００４
１．松香酸Ａ．
对照品溶液Ｂ．
供试品溶液（阳性）Ｃ．供试品溶液（
阴性）图２高效液相谱图
ｔ／ｍｉｎ
２４１．１
ＡＵ
０．０１２０．００８０．００４
０
２００２６０３２０３８０
Ａ
ｔ／ｍｉｎ
２４１．１
ＡＵ２００
２６０３２０３８０
Ｂ
０．０１２０．００８０．００４
０
Ａ．
对照品溶液Ｂ．供试品溶液（
阳性）图３松香酸二极管阵列吸收图
１
１
１２３４５６７
１．阴性对照品溶液２－６．供试品溶液７．对照品溶液
图１枫香脂薄层谱图
灯牗２５４ｎｍ牘下检视。供试品溶液谱中，在与对照药材溶液谱相应位置上显相同颜的斑点，表明阴性对照无干扰。详见图１。２．２松香酸含量测定２．２．１谱条件
谱柱：ＡｇｉｌｅｎｔＺＯＲＢＡＸＳＢ－Ｃ１８柱牗
２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ牘；流动相：乙腈－０．１％甲酸溶液牗
８２∶１８牘；检测波长：２４１ｎｍ，ＤＡＤ检测器采集２００～４００ｎｍ光谱图；柱温：３５℃；流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
。２．２．２溶液制备
取松香酸对照品约１０ｍｇ，精密称定，置１００ｍＬ容量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，精密量取１ｍＬ置２０ｍＬ容量瓶中，加乙醇至刻度，制成每１ｍＬ含５μｇ的对照品溶液。取本品研细，取约０．２ｇ，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇２０ｍＬ，称定质量，超声处理２０ｍｉｎ，放冷，称定质量，用乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，即得。
２．２．３测定方法
精密吸取对照品溶液、供试品溶液各１０μＬ，注入液相谱仪，以谱峰的保留时间及ＤＡＤ的紫外吸收图谱进行定性鉴别。供试品溶液谱中，在与对照品溶液谱峰相应位置上不得出现相同的谱峰，若出现保留时间相同的谱峰，采用二极管阵列检测器比较相应谱峰的紫外－可见吸收光谱，吸收光谱应不同；若吸收光谱相同，则视为检出松香酸。如检出，则以外标法计算样品中松香酸的含量。谱图见图２和图３。
２．２．４方法学考察
精密度试验：取松香酸对照品溶液，连续进样５次。
结果松香酸峰面积的ＲＳＤ为０．８６％牗ｎ＝５
牘，表明仪器精密度良好。
线性关系考察：取质量浓度为５．０５３６μｇ／ｍＬ的松
香酸对照品溶液，分别进样１，２，５，１０，２０，５０μＬ测定。
以峰面积（Ｙ）为纵坐标、进样量牗Ｘ，μｇ牘为横坐标进行线性回归，得回归方程Ｙ＝２．３０４９Ｘ－１．３０７１，ｒ＝０．９９９９牗ｎ＝６牘。结果表明，松香酸进样量在５．０５３６～２５２．６８００
现金支票用途填写区域自动气象站μｇ范围内与峰面积线性关系良好。空白试验：按处方自制消肿片样品，按２．２．３项下方法测定。结果未检出松香酸，表明该方法无干扰。
稳定性试验：取供试品溶液１份，分别于０，２，４，８
，１２，２４ｈ时测定，记录峰面积。结果的ＲＳＤ为０．３４％
牗ｎ＝６牘，表明供试品溶液在２４ｈ内稳定性良好。重复性试验：称取同一批牗１号牘
样品６份，分别测定松香酸含量。结果平均含量为１．６２４４ｍｇ／ｇ，ＲＳＤ为
０．７７％牗ｎ＝６
牘，表明方法重复性良好。加样回收试验：取已知松香酸含量的消肿片样品
ＤｒｕｇＲｅｓｅａｒｃｈ
ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓＶｏｌ．２８牞Ｎｏ．７牞Ａｐｒｉｌ５牞２０１９表１松香酸加样回收试验结果牗ｎ＝９牘
取样量牗ｇ牘０．１０１７０．１０３３０．１０１５０．１００６０．１０１７０．１０６７０．１０３４０．１０１６０．１００７样品含量
牗ｍｇ牘
０．１６５２
０．１６７８
０．１６４９
０．１６３４
０．１６５２
０．１７３３
０．１６８０
０．１６５０
０．１６３６
加入量
牗ｍｇ牘
０．０７５８
０．０７５８
０．０７５８
０．１５１６
０．１５１６
０．１５１６
０．２５２７
０．２５２７DANCE ME TO THE END OF LOVE
０．２５２７
测得量
牗ｍｇ牘
０．２４２８
０．２４３３
０．２４１７
０．３１５１
０．３１８３
０．３２４７
０．４２３６
０．４２３４
０．４１８０
回收率
牗％牘
１０２．３７
９９．６０
１０１．３２
１００．０７
１００．９９
９９．８７
１０１．１５
１０２．２６
１００．６７
Ｘ
牗％牘
１００．９２
ＲＳＤ
牗％牘
０．９８表２５批样品松香酸含量检测结果
序号１２３４５
厂家
江苏某药业有限公司
陕西某药业有限公司
江西某药业有限公司
青海省某药业有限公司
江苏某制药有限公司
批号
１６０３０１
１６０６０１
２０１７０７０１
１７０５３０３
１７１００１
枫香脂
－
－
－
－
检出
松香酸
检出
检出
检出
检出
－
松香酸含量牗ｍｇ／ｇ牘
１．６allyes
１．１
１５．９
５．３
牗松香酸含量为１．６２４４ｍｇ／ｇ牘约０．１ｇ，共９份，分别加质量浓度为０．０５１８ｇ／
Ｌ的对照品溶液３ｍＬ，为０．１０３６ｇ／Ｌ的３ｍＬ，为０．０５１８ｇ／Ｌ的１０ｍＬ，再分别精密加入乙醇２０，２０，１０ｍＬ，称定质量，依法制备供试品溶液，测定松香酸的含量，计算回收率。结果见表１。
检出限和定量限测定：分别精密量取质量浓度为０．００５０５４ｇ／Ｌ和０．０５０５４０ｇ／Ｌ的松香酸对照品溶液各２ｍＬ置锥形瓶中，再分别加入自制消肿片样品０．２０３３，０．２０２６ｇ，依法制备供试品溶液，测定。结果松香酸谱峰的信噪比牗Ｓ／Ｎ牘分别为４和１３，方法的检出限为０．０５ｍｇ／ｇ，定量限为０．５０ｍｇ／ｇ。
耐用性试验：曾试验不同谱柱犤ＤＩＫＭＡＩｎｅｒｔｓｉｌＯＤＳ－３柱牗２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ牘，资生堂ＣＡＰＣＥＬＬＰＡＫＣ１８ＭＧ柱牗２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ牘犦，以及液相谱仪Ａｇｉｌｅｎｔ１２６０型液相谱仪牗ＤＡＤ检测器牘，其测定结果均一致。
２．２．５样品含量测定
取不同厂家的样品，依法制备供试品溶液，测定，按外标法计算含量。结果５批消肿片中有４批未鉴别出枫香脂却检出了松香酸，只有１批鉴别出枫香脂而且未检出松香酸。详见表２。
３讨论
３．１展开剂选择
曾比较了中国药典中枫香脂鉴别项的展开剂正己烷－石油醚牗６０～９０℃牘－乙酸乙酯－冰醋酸牗６∶２∶３∶０．２牘，但枫香脂的主斑点Ｒｆ值偏高，故采用原国家食品药品监督管理总局药品检验补充检验方法和检验项目批准件牗批准件编号为２０１６００５牘中相关枫香脂中松香酸检查项补充检验方法的展开剂石油醚牗６０～９０℃牘－乙酸乙酯－冰醋酸牗９∶１∶０．１牘犤４犦；同时，枫香脂的主斑点Ｒｆ值约为０．６，展开效果较理想，且阴性无干扰。３．２流动相选择
曾参照枫香脂中松香酸检查项补充检验方法试验流动相乙腈－四氢呋喃－０．１％甲酸溶液牗３５∶２５∶４０牘，但枫香脂在松香酸谱峰相近保留时间处出现干扰峰，不易分离。
３．３检测指标选择
现已有很多对处方中含有乳香和没药等树脂类原料药的中成药进行松香酸检查犤４－８犦和补充方法如聂俭林等犤９犦进行了消肿片的质量标准研究，对当归、地龙、五灵脂进行鉴别，对进行限量检查，对进行含量测定，但尚无对消肿片进行松香酸检查和枫香脂鉴别研究的文献报道。本研究中收集５个厂家的５批消肿片，结果４个厂家的４批检出了不该有的松香酸，应为枫香脂、乳香、没药原料药带入，同时这４批却未检出处方中为君药的枫香脂，说明生产时未投料枫香脂或使用了假枫香脂。４批样品中松香酸的含量测定结果相差也很大，说明其原料的掺假程度也各不相同。可
见，消肿片生产厂家未能有效控制原料药质量，市场上消肿片的质量参差不齐。本方法简单、可靠，可用于提高消肿片的质量标准。
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牗收稿日期：２０１８－０９－１０牘
注：－为未检出。ＤｒｕｇＲｅｓｅａｒｃｈ
３２
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