流式细胞术分析外周血淋巴细胞亚在儿科的临床应用专家共识朔黄线
（2019版）
流式细胞术（flow cytometry,FCM）是一种对单细胞或生物颗粒进行多参数、定量分析的技术，具有速度快、精度高、准确性好等优点。目前FCM广泛应用于临床医学，在疾病的预防、诊断、及预后判断中具有重要作用。但是淋巴细胞亚在不同年龄阶段有不同的正常参考范围[1]，并且其结果受多种因素的影响，造成临床判读相对困难。为科学合理应用FCM协助诊治儿科疾病，"流式细胞术分析外周血淋巴细胞亚在儿科的临床应用共识"在多个学术组织的协作下于2016年正式发表[2]。该共识提高了医务工作者对FCM在儿科临床应用的认识，促进了临床诊疗水平的提高。医学技术飞速发展，FCM的应用也有了一定的进展。为适应医学发展和临床应用的需要，多个学术组织的专家讨论撰写了"流式细胞术分析外周血淋巴细胞亚在儿科的临床应用专家共识（2019版）"。
淋巴细胞亚分析是临床开展最多的FCM检测项目，是指借助各种荧光染料标记的单克隆抗体测定各类淋巴细胞胞膜或胞内独特的分化抗原（cluster of differentiation,CD），对淋巴细胞的各个亚进行分析。原国家卫生部发布的FCM检测外周血淋巴细胞亚指南（WS/T 360－
综述论文
2011）对于规范FCM在外周血淋巴细胞亚分析中的应用具有重要指导意义。检测过程需注意标本采集和运输、免疫荧光染、检测和分析、结果报告和审核等方面。 常规检测的淋巴细胞亚包括T细胞（CD3+）、B细胞（CD3－CD19+）和NK细胞（CD3－CD16+CD56+）；T细胞又分为2个亚：辅助性T细胞（CD3+CD4+）和杀伤性T细胞（CD3+CD8+）。淋巴细胞亚分析报告应提供各个亚细胞的相对计数（百分比）和绝对计数。FCM可以直接测得各淋巴细胞亚的相对计数。仅检测淋巴细胞亚相对计数，对于判断患儿免疫状态存在较大局限。有些疾病会导致T、B、NK 细胞同时增多或减少，如噬血细胞综合征可出现3种淋巴细胞同时减少，仅检测相对计数则无法发现异常；如对于地中海热患儿，评估其T细胞绝对计数，有助于判断疾病严重程度，仅检测相对计数则会影响判断[3]。
绝对计数有2种方法：（1）单平台法采用定量微球，直接获得淋巴细胞亚绝对计数；（2）双平台法采用FCM测定的淋巴细胞百分比，结合血常规中总淋巴细胞数量，计算得到各亚淋巴细胞的绝对计数。建议采用单平台方法进行绝对计数检测，以减少室间变异，并避免多台仪器间的系统误差。
二、标本采集和运输
首选乙二胺四乙酸盐抗凝管采集外周静脉血标本，肝素钠或枸橼酸钠抗凝血也可用于检测，但如标本同时进行白细胞计数分类，则应选择乙二胺四乙酸作为抗凝剂。标本采集后应立即检测，不能立即检
测的标本应置室温保存[4]，并在24 h内检测。
三、检测对象的选择
新密市人事劳动局
（一）明确存在免疫功能受损者——原发性免疫缺陷病（primary immunodeficiency diseases,PID）
PID是一组先天性或遗传性因素所致的免疫器官、组织、细胞或分子缺陷，导致机体免疫功能不全的疾病。2017年国际免疫学会联合会（international union of immunological societies，IUIS）将PID分为9类共354种疾病[5]。
PID常表现为婴儿期或儿童期频繁（反复）发生的特殊感染。大约80％的患儿发病年龄小于20岁，遗传方式常为X连锁，70％的患儿为男性。有临床表现的PID发病率总体上约为1/10 000。常见的是抗体缺陷为主的免疫缺陷病和联合免疫缺陷病。淋巴细胞亚分析是早期诊断PID的重
关节置换术
要手段，对于临床考虑PID或基因检测明确的PID患儿，应检测其淋巴细胞亚，评估其免疫状态。
（二）可能存在免疫功能受损者
1．免疫防御功能受损者：
此类患儿常见的临床特征为易发生感染，往往是反复、严重、多种病原体或特殊病原体的感染，以及常规效果不佳的感染。包括（1）反复感染，即明确为感染性疾病，感染次数和频率过高，超出正常人，因感染的部位不同，具体反复的次数或频率难以给出参考标准[6]。（2）严重感染，包括必须住院静脉使用抗感染药物的患儿以及需进行重症监护或抢救的感染患儿[7]。（3）多种病原体和（或）特殊病原体感染，发生细菌、真菌和（或）病毒等多种病原体感染者；低毒病原体如卡介苗[8]、脊髓灰质炎疫苗株等病原体感染者；对于新发现的病原体或病原体不清楚的感染者尤其应该进行淋巴细胞亚的检测。（4）常规效果不佳的感染，即按照诊疗常规或指南效果不佳的感染，除病原体耐药等原因外，还可能存在宿主免疫防御的受损，应及时进行淋巴细胞亚的检测。（5）感染本身导致宿主继发性免疫防御功能受损者，如EB病毒感染[9]、人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus,HIV）感染等。我爱下电影论坛
2．免疫自稳和耐受功能受损者：
此类患儿常见的临床表现为易发生自身免疫或自身免疫样疾病、过敏或过敏样疾病。（1）过敏性疾病，并非所有这类患儿都需要进行淋巴细胞亚的检测，对于伴有以下情况的过敏患儿应考虑淋巴细胞亚的检测，①婴幼儿时期全身严重湿疹样表现[10]；②嗜酸粒细胞显著增多[11]；
③血清IgE水平明显增高（IgE＞1 000 U/L）[12]；④伴有反复、严重感染的患儿；⑤常规效果不
壹周立波秀2011
佳者。（2）自身免疫和自身炎症性疾病，检测淋巴细胞亚有助于明确淋巴细胞各个亚可能存在的原发性或继
发性异常，有助于对患儿免疫状况及药物影响的评估。对于伴有以下情况的自身免疫和自身炎症性疾病患儿应考虑淋巴细胞亚的检测，①存在难以控制的自身免疫反应情况及出现明显的自身免疫性淋巴增殖情况[13]；②合并反复感染的患儿；③存在自身炎症反应；④长期免疫抑制药物、生物制剂使用前后[14]。
3．免疫监视功能受损者：
免疫监视功能受损主要引起机体易发生肿瘤性疾病。包括（1）血液系统肿瘤，为儿童时期最多见的肿瘤，应常规进行淋巴细胞亚检测。（2）
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