选择考马斯亮蓝G-250染法的原因

一、选择考马斯亮蓝G-250染法的原因

钢管混凝土拱桥蛋白质测定方法主要有以下几种：凯氏定氮法、双缩脲法、福林-酚法、紫外分光光度法、考马斯亮蓝染法。在测定酱油中的蛋白质含量实验中，我们选择采用考马斯亮蓝染法。原因主要有以下几点：

1.凯氏定氮法

指路器（1）凯氏定氮法的原理是在样品中加入浓硫酸在一定条件下消化后，向消化液中加入氢氧化钠使氨气溢出，并用硼酸吸收，最后用盐酸滴定吸收液来计算蛋白质的含量。

桅杆风（2）由配料表可知，酱油中含氮化合物包括蛋白质、氨基酸、谷氨酸钠、呈味核苷酸二钠、肌苷酸二钠等化合物。可见含有非蛋白质氮的化合物种类多，含量高，不能忽略。此方法最主要的问题是对非蛋白质氮无法分辨，像氨基酸、谷氨酸钠、呈味核苷酸二钠、肌苷酸二钠均为干扰因素，导致结果误差比较大。

2.双缩脲法与福林-酚法

（1）双缩脲法的实验原理是铜离子与蛋白质肽键作用生成蛋白质-铜络合物，溶液紫红的深浅与蛋白质含量在一定范围内符合朗伯-比尔定律，再用分光光度计测吸光度确定蛋白质含量。福林-酚法在此基础上经过另一呈反应—酸性条件下蛋白质还原磷钼酸-磷钨酸试剂，产生深蓝的磷钼蓝和磷钨蓝混合

拉贝洛尔物，再用分光光度计测吸光度确定蛋白质含量。

针刺事件（2）双缩脲法灵敏度低，样品中含有不溶性成分，肽链中含有脯氨酸、糖类共存，会影响显效果，导致最后测量值偏低，不适合测定酱油中蛋白质含量。

（3）福林-酚法测定原理与双缩脲法类似，上述对双缩脲法有干扰的物质对福林-酚法的影响更大，且福林-酚法应用于水溶性蛋白质含量的测定，对于水不溶蛋白质无法检测。

3.紫外分光光度法

（1）蛋白质的20种氨基酸在远紫外区(<220nm)均有光吸收。在蛋白质浓度3~8mg/mL OD280nm光密度与其浓度呈正比关系，可作定量测定。

恶心现象背后的科学根据（2）非蛋白质成分在紫外区也有吸收以及光散射作用的干扰，在食品分析领域中的应用并不广泛，加之酱油中成分复杂，对结果影响大，不适合用于测定酱油中蛋白质含量。

4.考马斯亮蓝G-250染法

（1）该方法的原理是考马斯亮蓝与蛋白质通过范德华引力结合后变为青，蛋白质-素结合物在595nm波长下有最大光吸收，结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h内保持稳定。

（2）该方法的优点在于试剂配制简单，操作简便快捷，是目前灵敏度最高的蛋白质测定方法，也是一种常用微量蛋白质快速测定方法。

（3）选择此方法的主要原因是抗干扰强，酱油中不存在此方法的干扰物质，酱油中含有的游离氨基酸和糖类均不会对结果产生干扰。

（4）该方法的缺点在于线性关系较差，在蛋白质含量很高时线性偏低。为减少此误差，我们通过调整样品稀释比例来减小误差。

本文发布于:2024-09-22 14:37:19，感谢您对本站的认可！

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