凌育赵;刘经亮
【摘 要】Total flavonoids was extracted from Ardisia mamillata successfully by using the method of Soxhlet reflux and solvent extraction,and its structure was identified. The content of total flavonoids in the extract of Ardisia mamillata was determined by IR. The content of total flavonoids in the extract was 19. 47 mg · g-1 which was consistent with that obtained using UV-Vis spectrophotometry. The RSD(n = 6)was 2. 09%,recoveries was 93. 54%-104. 35% ,and the average recovery was 98. 72%.%采用索氏回流法及溶剂萃取法成功地提取了虎舌红中的总黄酮,并对其结构进行了鉴定,采用红外光谱法对提取物中总黄酮的含量进行了测定.结果表明,虎舌红提取物中总黄酮含量为19.47 mg·g-1,与紫外可见分光光度法测定结果基本一致；相对标准偏差(RSD)为2.09％(n=6),加标回收率为93.54％～104.35％,平均回收率为98.72％. 【期刊名称】《化学与生物工程》
【年(卷),期】2011(028)012
贾伯斯传
【总页数】3页(P92-94)
【关键词】虎舌红;黄酮类化合物;红外光谱
【作 者】凌育赵;刘经亮
【作者单位】仲恺农业工程学院化学化工学院,广东广州510225;广东食品药品职业学院,广东广州510520
【正文语种】中 文
汉德森【中图分类】O657.33;R284.1
虎舌红(Ardisia mamillata)，又名红毛毡、宝鼎红、天仙红衣、毛凉伞、金丝红珠等，为紫金牛科紫金牛属[1]，具有清热利湿、活血止血、去腐生肌等功效，对跌打损伤、风湿骨痛、肺痨咳嗽、疳积肝炎等均有疗效[2]。黄酮类化合物是紫金牛属植物的主要活性成分之一[3]，用于防治皮肤疾病、增强免疫力和预防心血管疾病等方面[4]，具有抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、降血脂等广泛的生物活性与功效[5]。
目前，国内对虎舌红活性成分的研究，主要集中在挥发油、生物碱及多糖类[6～8]，而对虎舌红黄酮类成分的研究尚未见相关报道。作者在前期研究的基础上，采用索氏回流法及溶剂萃取法，成功地提取了虎舌红中的总黄酮，并以芦丁为标准品，应用红外光谱仪对提取物中总黄酮的含量进行了测定。
1 实验
1.1 材料、试剂与仪器安兵基
虎舌红全草由广东省农科院芳村花卉基地提供，经仲恺农业工程学院植物研究室鉴定为紫金牛科(Myrsinacese)紫金牛属(Ardisia)虎舌红。
芦丁标准品，中国药品生物制品检定所；溴化钾、盐酸、乙醇、石油醚、乙酸乙酯、镁粉等，均为分析纯。
IRPrestige21型傅立叶变换红外光谱仪，美国NICOLET公司；752C型紫外可见分光光度计，上海第三分析仪器厂；KQ3200DE型数控超声波清洗器，苏州江东精密仪器有限公司；FA-1004型电子天平，上海精密科学仪器有限公司；RE-52型旋转蒸发仪，上海亚荣
公司。
1.2 虎舌红总黄酮的提取与鉴定
1.2.1 虎舌红总黄酮的提取
称取粉碎过筛的虎舌红粉末20.0 g，置于烧瓶中，加入8 BV 75%(体积分数，下同)的乙醇，于80 ℃下索氏回流提取5次，每次2.5 h。抽滤，收集滤液，减压回收乙醇溶剂，挥干，浓缩得浸膏0.45 g。用适量热水溶解浸膏，趁热过滤除去不溶物，然后加入1/3体积的石油醚(脱脂，并除去部分素)，振荡静置分层；弃去石油醚溶解物，在萃取后的水溶液中加入1/3体积的乙酸乙酯萃取4次，收集乙酸乙酯相，旋转蒸发仪挥去溶剂得总黄酮0.38 g，收率1.90%。
1.2.2 虎舌红总黄酮的鉴定
(1)HCl-镁粉反应。取上述提取物少许，置于试管中，加75%乙醇 2 mL，在水浴中加热溶解，滴加浓盐酸2滴，再加镁粉约 0.50 g，即发生剧烈反应，生成的泡沫呈明显红，溶液颜逐渐由黄变为橙红。据此鉴定提取物为黄酮类物质。
(2)红外光谱鉴定。取烘干后的芦丁少许，加入一定量的溴化钾，制成固体压片，用傅立叶变换红外光谱仪在扫描范围 4000～400 cm-1、分辨率 4 cm-1、扫描次数为 4的条件下绘制红外光谱图；同法绘制精制虎舌红提取物的红外光谱图，对比鉴定。
DIGITAL GAP
2 结果与讨论
2.1 虎舌红总黄酮的红外光谱分析(图1)
A.芦丁标准品 B.虎舌红提取物图1 芦丁标准品和虎舌红提取物的红外光谱Fig.1 IR Spectra of rutin and extract from Ardisia mamillata
由图1可知，芦丁标准品和虎舌红提取物的红外光谱分别在3296.90～3425.78 cm-1左右均出现宽而强的吸收峰，是-OH的伸缩振动峰，表明存在酚羟基或糖上的羟基，且数目较大；在2973.34 cm-1处出现弱吸收峰，是碳氢键的伸缩振动峰，说明饱和碳上的氢较少；在1655.80 cm-1、1662.15 cm-1处出现 C=O的伸缩振动中强峰，两者位置和峰型一样，说明提取物是黄酮类物质；在1614.50 cm-1、1505.81 cm-1处出现强吸收峰，是芳环中C=C的伸缩振动吸收峰，也是黄酮的特征吸收峰；在 1093.21 cm-1左右出现较强吸收峰，是C- O的伸缩振动峰；在1355.60 cm-1、1143.25 cm-1处出现羟基的弯曲振动峰；在 807.28 cm-1处出现苯环邻位氢引起的吸收峰；在 1000～600 cm-1处出现苯环上取代基位置引起的吸收峰，但峰位置不同，说明提取物与芦丁的羟基取代位置不同；其它位置的吸收峰基本一致。这些表明，提取物中含有羟基、羰基、碳氧单键以及不同位置取代的苯环等官能团，特征吸收峰一致。因此可确定提取物是黄酮类化合物。
2.2 紫外可见分光光度法测定虎舌红中总黄酮含量
以芦丁为对照品，采用NaNO2-AlCl3比法测定总黄酮含量[6]。
2.2.1 标准曲线的绘制
准确移取40 μg·mL-1芦丁标准溶液0.00 mL、2.00 mL、4.00 mL、6.00 mL、8.00 mL、10.00 mL于50 mL容量瓶中，加入0.50 mol·L-1 NaNO2溶液1.00 mL，摇匀，静置5 min；加入0.30 mol·L-1 AlCl3溶液1.00 mL，摇匀；加入1.00 mol·L-1 NaOH溶液5.00 mL、50%乙醇定容至刻度，放置15 min，于410 nm处测定吸光度。以吸光度(A)对浓度(c)进行线性回归，得回归方程为A=0.4275c+0.0003，R=0.9987，芦丁在0.080～0.400 mg·mL-1范围内呈良好线性关系。
2.2.2 含量测定
取适量样品溶液，按2.2.1方法测定吸光度，据回归方程计算得总黄酮含量为19.54 mg·g-1。
2.3 红外光谱法测定虎舌红中总黄酮含量
2.3.1 标准曲线与检出限
黄酮类化合物4-位大多数有羰基，这是黄酮类化合物分子结构特征。红外光谱图中，在 1662.15～1505.81 cm-1范围内羰基有较强的吸收，其吸收强度与含量有关，且不易受其它峰的影响，因此选择羰基峰为定量峰，红外定量峰面积由两侧的峰谷确定。
在定量程序中建立标准品的红外光谱图，以1662.15～1505.81 cm-1范围内吸光度(A)的面积值作为定量值，用傅立叶变换红外光谱仪的朗伯-比耳定量程序建立标准曲线。以芦丁质量(M，mg)对峰面积(S)进行线性回归，得到：M=0.0359S-0.3547，相关系数为0.9803。本方法的检出限为0.04 mg。
2.3.2 含量测定
非煤矿山六大系统
准确称取样品溶液6份，称取相应的溴化钾使质量总和在0.0850～0.0860 g之间。按2.3.1方法绘制红外光谱图，应用朗伯-比耳定量程序计算，结果见表1。梦醒五棵柳
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