联合检测miR

㊃临床研究㊃
联合检测miR⁃195㊁SOCS3mRNA㊁miR⁃210对急性淋巴细胞性白血病的诊断价值分析
徐祖超1,刘艳冰2∗
(1.河南科技大学第一附属医院检验科,河南洛阳471003;2.洛阳市第三人民医院普外科,河南洛阳471002)
㊀㊀摘要㊀目的:研究联合检测微小核苷酸195(miR⁃195)㊁细胞因子信号转导抑制因子⁃3(SOCS3
mRNA)㊁微小核苷酸210(miR⁃210)在急性淋巴细胞性白血病(ALL)诊断及危险度评估中的价值㊂方法:选取2014年2月至2017年2月收治的120例ALL患者为研究对象,初诊患者74例㊁缓解组患者22例㊁复发患者24例,另选取健康体检的儿童120例作为对照组,分别对不同组别研究对象的miR⁃195㊁SOCS3mRNA㊁miR⁃210表达水平,初诊组患者不同危险度与miR⁃195㊁SOCS3mRNA㊁miR⁃210表达水平的相关性,初诊组患者危险度的危险因素以及单独检测和联合检测对ALL疾病的诊断效能进行分析㊂结果:对照组㊁缓解组㊁
复发组㊁初诊组以及不同危险度患者的miR⁃195㊁SOCS3mRNA㊁miR⁃210表达水平差异明显(P<0.05)㊂经两两比较,各组miR⁃195㊁miR⁃210表达水平从高到低依次为对照组㊁缓解组㊁初诊组㊁复发组以及标危组㊁中危组㊁高危组,SOCS3mRNA表达水平从高到低依次为复发组㊁初诊组㊁缓解组㊁对照组以及高危组㊁中危组和标危组(P<0.05)㊂患者的危险度与miR⁃195㊁miR⁃210表达水平呈现负相关,与SOCS3mRNA呈现正相关,联合检测灵敏度显著高于单独检测患者的miR⁃195㊁miR⁃210㊁SOCS3mRNA的标危㊁中危以及高危临界值分别为2.43㊁2.01㊁1.34;6.32㊁5.44㊁4.09;0.66㊁0.98㊁1.22㊂结论:联合检测miR⁃
195㊁SOCS3mRNA㊁miR⁃210在ALL患者诊断中灵敏度较高,且miR⁃195㊁SOCS3mRNA㊁miR⁃210表达水平与ALL患者危险度呈显著相关,建议在临床中推广㊂
关键词㊀急性白血病;淋巴细胞;联合检测;SOCS3;miR⁃210;miR⁃195
中图分类号:㊀R733.71文献标识码:A文章编号:2095⁃9664(2021)02⁃0054⁃07
DOI:10.3969/j.issn.2095⁃9664.2021.02.11
激发各类市场主体活力
通讯作者:Email:microorga@yeah.net
DiagnosticvalueofcombineddetectionofmiR⁃195,SOCS3mRNAandmiR⁃210inacutelymphocyticleukemia
XuZuchao1,LiuYanbing2∗
(1.DepartmentofLaboratoryMedicine,FirstAffiliatedHospitalofHenanUniversityofScienceandTechnology,Luoyang,Henan471003;2.DepartmentofGeneralSurgery,LuoyangThirdPeopleᶄsHospital,Luoyang,Henan471002,China)
Correspondingauthor:Email::microorga@yeah.net
Abstract㊀Objective:TodeterminethevalueofcombineddetectionofmicroRNA195(miR⁃195),
callerloc
suppressorofcytokinesignaling⁃3(SOCS3)mRNA,andmiR⁃210indiagnosisandriskassessmentofacutelymphocyticleukemia(ALL).Methods:Atotalof120ALLpatientswhostayedinourhospitalbetweenFebruary2014andFebruary2017wereincludedassubjects,comprising74innewlydiagnosedgroup,22inremissiongroup,and24inrelapsegroup.Inaddition,120childrenhealthcheckupsubjectsinourhospitalwereselectedas
controls.AllgroupswereexaminedfortheexpressionlevelsofmiR⁃195,SOCS3mRNA,andmiR⁃210.ThecorrelationbetweentheriskassessmentandtheexpressionofmiR⁃195,SOCS3mRNAandmiR⁃210innewlydiagnosedgroupwasdetermined.Riskfactorsoftheriskassessmentinnewlydiagnosedgroupwereanalyzed.Thediagnosticefficacyofindividualandcombinedt
estinginALLwasinvestigated.Results:Theexpressionlevelsof4
5第49卷第2期广州医科大学学报Vol.49No.2
2021年4月
ACADEMICJOURNALOFGUANGZHOUMEDICALUNIVERSITY
Apr.2021
miR⁃195,SOCS3mRNAandmiR⁃210differedsignificantlyamongthecontrolgroup,remissiongroup,relapsegroup,newlydiagnosedgroupandpatientswithdifferentriskassessment(P<0.05).PairwisecomparisonrevealedthatrankingofgroupswithexpressionlevelsofmiR⁃195andmiR⁃210fromhightolowwerecontrolgroup,remissiongroup,newlydiagnosedgroup,andrelapsegroup;orinthenewlydiagnosedpatie
nts,standard⁃riskgroup,medium⁃riskgroupandhigh⁃riskgroup.TherankingofgroupswithexpressionlevelofSOCS3mRNAfromhightolowwererelapsegroup,newlydiagnosedgroup,remissiongroup,controlgroup;orinthenewlydiagnosedpatients,high⁃riskgroup,medium⁃riskgroupandstandard⁃riskgroup(P<0.05).ThepatientsᶄriskassessmentwasnegativelycorrelatedwiththeexpressionlevelsofmiR⁃195andmiR⁃210,andpositivelycorrelatedwithSOCS3mRNA.Thecombineddetectionyieldedsignificantlyhighersensitivitythandidindividualdetectionofthemicro⁃RNA.ByROCcurveanalysis,thecut⁃offvaluesindeterminingthestandard,mediumandhighrisksforofmiR⁃195were2.43,2.01and1.34,formiR⁃210were6.32,5.44,and4.09,forSOCS3mRNAwere0.66,0.98,and1.22,respectively.Conclusion:CombineddetectionofmiR⁃195,SOCS3mRNA,andmiR⁃210ishighl
城市拆迁管理条例ysensitiveindiagnosingALL.TheexpressionlevelsofmiR⁃195,SOCS3mRNA,andmiR⁃210aresignificantlyrelatedtotheriskassessmentinALLpatients,andthereforearerecommendableforuseinclinicalsettings.Keywords㊀Acuteleukemia;lymphocytes;combineddetection;SOCS3;miR⁃210;microRNA⁃195
㊀㊀急性淋巴细胞性白血病(acutelymphoblasticleukemiaofchildhood,ALL)是临床最为常见的儿童肿瘤疾病,主要是由于机体B淋巴细胞发生克隆性异常增殖所致疾病[1],其病因包括环境因素㊁遗传性因素以及病毒感染所致的免疫缺陷等㊂流行病学资料显示,ALL疾病在所有儿童白血病中占比为15%,15岁以下儿童为ALL高发年龄,其中,2 5岁为ALL疾病发病高峰期[2,3]㊂非编码的微小RNA家族对于肿瘤性疾病的诊断具有积极的作用,其中,miR⁃195与肿瘤的发生发展以及侵袭转移具有重要意义[4],SOCS3mRNA是临床常见的肿瘤标靶性基因,miR⁃210则与肿瘤细胞的增殖和凋亡密切相关㊂本研究将通过对联合检测miR⁃195㊁SOCS3mRNA㊁miR⁃210在ALL患者诊断及危险度评估中的价值研究,为临床和效果评价提供科学依据㊂
1㊀资料与方法
1.1㊀一般资料
选取2014年2月至2017年2月在我院住院的120例ALL患者为研究对象,其中初诊患者74例㊁缓解患者22例㊁复发患者24例㊂初诊患者中,根据ALL诊断标准[5],白细胞计数在50ˑ109/L以下,泼尼松反应良好(第8天外周血白血病细胞<1ˑ109/L);非T⁃ALL;非成熟B⁃ALL;无t(9;22)或BCR/ABL融合基因;无t(4;11)或MLL/AF4融合基因;无t(1;19)或E2A/PBX1融合基因则为标危组㊂无t(9;22)或BCR/ABL融合基因;波尼松反应良好(第8天外周血白血病细胞<1ˑ109/L);标危诱导缓解第15天骨髓呈M3(原幼淋细胞>25%)或中危诱导缓解第15天骨髓呈M1/M2则为中危组㊂泼尼松反应不良(第8天外周血白血病细胞
>1ˑ109/L);t(9;22)或BCR/ABL融合基因阳性;t(4;11)或MLL/AF4融合基因阳性;中危诱导缓解第15天骨髓呈M3;第33天骨髓形态学未缓解(>5%),呈M2/M3则为高危组㊂标危患者23例㊁中危患者26例㊁高危患者25例,标危组男11例,女12例,平均年龄(4.23ʃ1.09)岁;中危组男14例,女12例,平均年龄(3.97ʃ1.00)岁;高危组男14例,女11例,平均年龄(5.11ʃ1.47)岁㊂另选取本院健康体检儿童120例作为对照组,两组患者的性别㊁年龄比较,差异无统计学意义(P>0.05)㊂所有患者的方案均为ALLICB⁃FM2002方案(泼尼松+柔红霉素+左旋门
冬酰胺+环磷酰胺)㊂所有研究对象家属签署知情同意书,并通过本院医学伦理委员会论证通过,伦理批件的标号为20140511㊂
纳入标准:①所有患者均符合ALL诊断标准[5];②均未有肿瘤远处转移;③已获得患者及家属知情同意㊂排除标准:①严重心脏㊁肝㊁肾功能障碍的患者;②对本研究药物过敏患者;③中途停止或者转院患者㊂
1.2㊀研究方法
所有患者于入组后清晨空腹抽取外周静脉血5mL,3000r/min离心10min取上清,将样品立即置于无DNA酶和RNA酶的灭菌采血真空管内,将所得样品在离心(3000r/min,20min)后,按照Trizol试剂(上海联硕生物科技有限公司)说明书提取血清总RNA,以5ᶄ⁃GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTGCACTGGATACGACTTCAGTT⁃3ᶄ为引物,采用
55
第2期㊀徐祖超,等.联合检测miR⁃195㊁SOCS3mRNA㊁miR⁃210对急性淋巴细胞性白血病的诊断价值分析
RT⁃PCR方法进行扩增,使用紫外吸收检测器进行miR⁃195浓度和纯度测定,使用5ᶄ⁃AGTCAGCCAC⁃3ᶄ为引物,采用上游引物为5ᶄ⁃ACTACAC⁃3ᶄ,下游引物为5ᶄGTCTGCGGCTCTTCCT⁃3ᶄ进行SOCS3mRNA扩增,使用紫外吸收检测器进行SOCS3mRNA浓度和纯度测定;使用反向引物5ᶄ⁃GUCCAG
UUUUCCCAGGAAUCCCU⁃3ᶄ进行扩增,使用紫外吸收检测器进行miR⁃210浓度和纯度测定㊂见表1㊂
表1㊀引物使用情况
指标上游引物下游引物
miR⁃1955ᶄ⁃GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTGCAC象征手法
TGGATACGACTTCAGTT⁃3ᶄ5ᶄ⁃AGTCAGCCAC⁃3ᶄ
SOCS3mRNA5ᶄ⁃ACTACAC⁃3ᶄ5ᶄGTCTGCGGCTCTTCCT⁃3
miR⁃2105ᶄ⁃GUCCAGUUUUCCCAGGAAUCCCU⁃3ᶄ5ᶄ⁃GUCCAGUUUUCCCAGGAAUCCCU⁃3ᶄ
1.3㊀观察指标
1.3.1㊀不同组别研究对象的miR⁃195㊁SOCS3mRNA㊁miR⁃210表达水平比较㊀分别对初诊组㊁复发组㊁缓解组以及对照组miR⁃195㊁SOCS3mRNA㊁miR⁃210表达水平进行对比分析㊂
1.3.2㊀初诊组患者不同危险度与miR⁃195㊁SOCS3mRNA㊁miR⁃210表达水平的相关性分析㊀对初诊患者的不同危险度与miR⁃195㊁SOCS3mRNA㊁miR⁃210表达水平展开spearman相关性分析㊂1.3.3㊀初诊组患者危险度的危险因素多因素分析分别对初诊组患者的危险因素进行logistic多因素分析㊂
1.3.4㊀单独检测和联合检测对ALL疾病的诊断效能分析㊀分别使用ROC曲线对单独检测和联合检测对ALL疾病的诊断效能进行对比观察㊂联合检测采用并联模式,即其中一项指标均为阳性则可进行诊断㊂
1.4㊀统计学方法
应用统计学SPSS16.0软件进行分析㊂计量资料以( xʃs)表示,组间比较采用t检验,计数资料以率表示,采用Pearsonχ2检验,对单因素分析有统计学意义的,进一步行Logistic回归分析,P<0.05为差异有统计学意义㊂
对流换热系数2㊀结㊀果
2.1㊀研究对象的一般资料比较
不同危险度㊁对照组㊁复发组㊁缓解组以及初诊组性别㊁年龄等一般资料比较,差异无统计学意义(P>0.05),见表2㊂
表2㊀各组研究对象的一般资料比较( xʃs)
组别年龄性别(男/女,例)对照组(n=120)4.88ʃ1.1355/65
缓解组(n=22)4.75ʃ1.6210/12
复发组(n=24)4.62ʃ1.1613/11
初诊组(n=74)4.39ʃ1.5539/35
标危组(n=23)4.23ʃ1.0911/12
中危组(n=26)3.97ʃ1.0014/12
高危组(n=25)5.11ʃ1.4714/11
F/χ2值0.1260.336
P值0.4450.3252.2㊀不同组别研究对象的miR⁃195㊁SOCS3mRNA㊁miR⁃210表达水平比较
㊀㊀通过对不同组别的miR⁃195㊁SOCS3mRNA㊁miR⁃210表达水平进行比较,对照组㊁缓解组㊁复发组以及初诊组miR⁃195㊁SOCS3mRNA㊁miR⁃210表达水平之间的差异明显(P<0.05);通过两两比较结果显示,各组miR⁃195㊁miR⁃210表达水平从高到低依次为对照组㊁缓解组㊁初诊组㊁复发组(P<0.05),SOCS3mRNA表达水平从高到低依次为复发组㊁初诊组㊁缓解组㊁对照组㊂通过对初诊组患者的miR⁃195㊁SOCS3mRNA㊁miR⁃210表达水平进行分析,不同危险度患者的miR⁃195㊁SOCS3mRNA㊁miR⁃210表达水平之间的差异明显(P<0.05);通过两两比较结果显示,各组miR⁃195㊁miR⁃210表达水平从高到低依次为标危组㊁中危组和高危组(P<0.05)㊂SOCS3mRNA表达水平从高到低依次为高危组㊁中危组和标危组㊂见表3,图1㊂
65
广州医科大学学报(JGZMU)㊀2021,49(2)
表3㊀不同组别研究对象的miR⁃195㊁SOCS3mRNA㊁miR⁃210表达水平比较
组别miR⁃195miR⁃210SOCS3mRNA对照组(n=120)4.88ʃ0.1114.02ʃ1.270.68ʃ0.33
缓解组(n=22)3.16ʃ0.149.25ʃ2.031.43ʃ0.22复发组(n=24)0.33ʃ0.163.02ʃ0.342.22ʃ0.39初诊组(n=74)2.39ʃ0.125.36ʃ0.981.50ʃ0.12标危组(n=23)2.63ʃ0.226.13ʃ1.451.22ʃ0.18中危组(n=26)2.16ʃ0.255.25ʃ1.321.55ʃ0.12
高危组(n=25)1.28ʃ0.114.02ʃ0.271.64ʃ0.22F值(对照vs缓解vs复发vs初诊)129.1924.30433.010P值0.0000.0000.000LSD⁃T(缓解vs对照)3.49410.93011.265P值0.0010.0000.000
LSD⁃T(复发vs对照)8.6379.06012.369P值0.0000.0000.000LSD⁃T(初诊vs对照)50.35241.33011.395P值0.0000.0000.000LSD⁃T(缓解vs初诊)7.3439.2368.798P值0.0000.0000.000LSD⁃t(缓解vs复发)48.95211.2519.600P值0.0000.0000.000LSD⁃t(复发vs初诊)9.4879.9698.561P值0.0000.0
000.000LSD⁃t(中危vs标危)11.3209.0029.761P值0.0000.0000.000LSD⁃t(高危vs标危)7.0919.00112.098P值0.0000.0000.000LSD⁃t(中危vs高危)11.89011.0039.033P值0.0000.0000.000
15
10
5
对照组(n=120)缓解组(n=22)复发组(n=24)初诊组(n=74)标危组(n=23)中危组(n=26)高危组(n=25)
m i R 195m i R 210S O C S3m R N A
图1㊀不同组别研究对象的miR⁃195㊁SOCS3mRNA㊁miR⁃210表达水平比较
2.2㊀初诊组患者不同危险度与miR⁃195㊁SOCS3mRNA㊁miR⁃210表达水平的相关性分析
㊀㊀通过对初诊患者的不同危险度与miR⁃195㊁SOCS3mRNA㊁miR⁃210表达水平的相关性分析,患者的危险度与miR⁃195㊁miR⁃210表达水平呈现负相关,与SOCS3mRNA呈现正相关(P<0.05)㊂见表4㊂表4㊀组患者不同危险度与miR⁃195㊁SOCS3mRNA㊁miR⁃210表达水平的相关性分析
项目miR⁃195SOCS3mRNAmiR⁃210r值-0.6990.782-0.356P值0.0060.0020.015
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第2期㊀徐祖超,等.联合检测miR⁃195㊁SOCS3mRNA㊁miR⁃210对急性淋巴细胞性白血病的诊断价值分析
2.3㊀初诊组患者危险度的危险因素多因素分析通过对初诊患者的危险度多因素logistic回归分析,血清miR⁃195㊁miR⁃210表达水平均可作为
ALL疾病的独立保护因素,且SOCS3mRNA表达水平可作为ALL疾病的危险因素㊂见表5㊂2.4㊀单独检测和联合检测对ALL疾病的诊断效能分析
通过初诊患者的单独检测和联合检测效能对比,标危组㊁中危组㊁高危组患者联合检测灵敏度显著高
于单独检测,差异存在统计学意义(P<0.05),且通过对患者的ROC曲线分析,患者的miR⁃195㊁
miR⁃210㊁SOCS3mRNA的标危㊁中危以及高危临界值分别为2.43㊁2㊁01㊁1.34;6.32㊁5.44㊁4.09;0.66㊁0.98㊁1.22㊂见表6㊂
表5㊀初诊组患者危险度的危险因素多因素分析
因素β值SE值Wald值P值OR值95%CI
海林市第一中学
miR⁃1951.0182.3611.3220.0011.0190.899-1.926SOCS3mRNA1.0623.2691.3330.0020.6321.331-2.320miR⁃2100.3694.1391.6910.0001.0890.632-2.065
表6㊀单独检测和联合检测对ALL疾病的诊断效能分析
分组诊断方法miR⁃195SOCS3mRNAmiR⁃210联合检测标危组真阳例数(n)12131516假阳例数(n)34353240
真阴例数(n)6665687
假阴例数(n)31302880
准确率(%)54.5554.5558.0416.08
灵敏度(%)15.3816.6718.0769.57
特异度(%)68.0468.4270.838.05
阳性预测值(%)27.9130.2334.8816.67
阴性预测值(%)66.0065.0068.0014.89
标准误0.0390.0360.030.02
AUC0.7750.6030.6920.721
AUC(95%CI)0.520 0.8720.600 0.7460.607 0.8160.639 0.918
P值㊀0.017㊀0.000㊀0.000㊀0.000中危组
真阳例数(n)10111319
假阳例数(n)35363342
真阴例数(n)6564678
假阴例数(n)36353377
准确率(%)51.3751.3754.7918.49
灵敏度(%)13.3314.6716.2570.37
特异度(%)64.3664.6567.009.41
阳性预测值(%)21.7423.9128.2619.79
阴性预测值(%)65.0064.0067.0016.00
标准误11.2319.2523.2225.333
AUC0.7710.7760.7730.81
AUC(95%CI)0.762 0.8640.602 0.8000.755 0.8520.752 0.876
P值㊀0.000㊀0.000㊀0.000㊀0.00085
广州医科大学学报(JGZMU)㊀2021,49(2)

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