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国家自然科学基金
申 请 书
国家自然科学基金委员会
基本信息
姓名
宋有涛
性别男 出生
年月
1973年3月 民族 满族 学位 博士
职称
教授
微生物分子生物学与生物化学
电话 024-******** ysong@lnu.edu
传
真 024-********
个人网页
www.lnu.edu/szdw/jsjj_z y.jsp?id=1958
工作单位 辽宁大学 /生命科学系 申 请 者 信 息 在研项目批准号
名称
辽宁大学
代 码
11003601
联系人 潘平 scdep@lnu.edu 依托单位信息
电
话 024-********
网站地址
www.lnu.edu
单 位 名 称
代 码
沈阳药科大学
11001503 合作单位信息
[在此录入修改]
项目名称
资助类别 面上项目 亚类说明青年科学基金项目mpr121
附注说明
申请代码 C0104：生物化学和分子生物学 C010107：病毒学
基地类别
预计研究年限 2007年1月 — 2009年12月
研究属性 应用基础研究
项 目 基 本 信 息
摘
要
(限400字)：构建一种简单、安全、高效的抗朊病毒药物筛选细胞模型是解决当前国际上流行的疯牛病
、克雅氏病等朊病毒疾病防治的瓶颈与难点。本项目是基于目前酵母细胞可取代哺乳动物细胞进行抗朊病毒药物筛选的理论研究基础，针对野生型酵母细胞对药物敏感性低以及无法在活体细胞内实时定量检测药效的缺陷，利用酵母朊病毒与动物存在着严格种间屏障的优点，采用分子生物学基因重组技术改造酵母细胞，构建含有可用于实时定量追踪检测的荧光蛋白标记和高药物敏感性分子伴侣基因突变型的酵母细胞，并进一步利用独创的SDS-Agarose/Western Blot 技术作为分子水平的定量检测手段，建立一个具有国际水平、自主创新的药物筛选细胞模型，进行抗朊病毒药物筛选的研究。本研究可解决目前抗朊病毒药物筛选效率低及安全性差的关键技术问题，不仅能为今后的抗朊病毒药物筛选产业化研究提供关键参数，并且为解决我国重大传染病防治的可持续性研究提供相关科学依据。
关 键 词(用分号分开，最多5个) 朊病毒；酵母细胞；荧光蛋白；分子伴侣；抗朊病毒药物
第 3 页 版本1.000.000
项目组主要成员（注: 项目组主要成员不包括项目申请者，国家杰出青年科学基金类项目不填写此栏。）
编号 姓 名 出生年月 性别职 称 学 位 单位名称
电话
项目分工
每年工作时间（月） 1 徐威1963-7-11 女 副教授 博士 沈阳药科大学 024-********
shxuwei8720@sina
药物筛选及纯化策略 4 2 惠秀娟1961-9-27 女 副教授 硕士 辽宁大学 024-********
jennyhuixy@hotmail
重组基因载
体的构建 4 3 张慧丽1970-10-27 女 讲师 硕士 辽宁大学 024-********厦门px事件
hlzh999@yahoo
药物筛选及
检测
4 4 回晶1977-10-20 女 讲师 硕士 辽宁大学 024-********
blessgirl196@163
模型的生化
指标检测 4 5 刘剑利1980-2-10 男 助教 硕士 辽宁大学 024-********
liujianli119@163
药物成分纯
化
4 6 李辉1981-1-1
5 男 助理实验
师学士 辽宁大学 024-********
huben12@163
酵母的发酵
培养技术 5 7 孙世林1982-2-25 女 硕士生 学士 辽宁大学 024-********
sunshilin379@163
模型的生化
指标检测 9 8 游园园1983-3-21 女 硕士生 学士 辽宁大学 024-********
酵母活细胞
的荧光测定
9 9
赵葳葳
1982-6-13
产业结构调整指导目录 2011年本女
硕士生
学士
辽宁大学
024-********
hgzww-2001@163 重组基因载
体的构建
9
总人数 高级 中级 初级 博士后 博士生 硕士生 10 3
2
2
3
说明: 高级、中级、初级、博士后、博士生、硕士生人员数由申请者负责填报（含申请者），总人数自动生成。
灵媒百科
经费申请表 （金额单位：万元）
科目
申请经费
备注（计算依据与说明）
一.研究经费 23.8000 1.科研业务费
11.3000
（1）测试/计算/分析费 5.7000激光共聚焦显微镜分析，DNA 测序 （2）能源/动力费 1.2000培养和测试过程中的能源动力消耗
（3）会议费/差旅费
1.5000国内实验室合作交流，参加2-3次国内外学术会议（4）出版物/文献/信息传播费
航空动力学报
2.9000在国内外刊物上发表8-9篇论文以及资料费等 （5）其它 0.0000 2.实验材料费
11.0000
喷雾干燥塔（1）原材料/试剂/药品购置费 11.0000普通常规生化试剂，分子生物学药品，酶和试剂盒（2）其它 3.仪器设备费 1.5000
（1）购置 1.2000增购大型水平电泳装置及蛋白质转印装置各一台 （2）试制 0.3000制备人性化微生物接种装置一套 4.实验室改装费 0.0000 5.协作费
0.0000 二.国际合作与交流费 2.5000
1.项目组成员出国合作交流 1.5000前往美国国家卫生研究院（NIH）Masison DC 实验室合作交流
2.专家来华合作交流 1.0000邀请爱尔兰国立大学生物系Jones G 博士来华合作交流
三.劳务费 1.2500研究生人员及其它工作人员的劳务补贴 四.管理费
1.4500按相关规定5%计算 合 计
29.0000
国家其他计划资助经费
其他经费资助（含部门匹配）
与本项目相关的 其他经费来源
其他经费来源合计
0.0000
查看报告正文撰写提纲报告正文
（一）立项依据与研究内容
1.项目的立项依据
1.1.研究意义和社会应用前景
朊病毒（prion，又称为朊蛋白）是一类能在动物和人中引起可传染性脑病（包括疯牛病、羊搔痒症、库鲁病、克雅氏病等）的病原体[1, 2]。它们是一类高度保守的糖蛋白（大约250个氨基酸，分子量在27～30 kDa），其广泛存在于哺乳动物中，是通过人或动物单拷贝染体基因的单一外显子编码，并通过C末端糖基磷酸酰肌醇锚定在细胞膜上的富含胆固醇、鞘脂和糖脂的去污剂抗性微区，从而使朊病毒可以从一个细胞移位到另一个细胞，在细胞间形成传播[3]。朊病毒不含有核酸成分，对热、酸碱、紫外线、离子辐射、乙醇、超声波等均能使普通病毒或细菌灭活的理化因子具有很强的抗性，因此具有极强的传染性[4, 5, 6]。
朊病毒的高度传染性和致死性对整个社会造成了极大的危害。例如疯牛病，20世纪80年代中期至90年代中期是其暴发流行期，截至2004年，仅英国已经确诊的病牛就有177962头，涉及35181个农场，共屠宰和焚烧病牛1100多万头，经济损失达数百亿英镑[7]。二十多年来，疯牛病就已扩散到了欧洲、美洲和亚洲的31个国家，受到疯牛病牵连的国家有一百多个，造成了巨大的经济损失和社会恐慌。另一类由朊病毒引起的常见的人类早老性痴呆症，即克雅氏病，也呈全球性分布状态，感染朊病毒后其潜伏期可从15个月长达至30年以上，患者在出现临床症状后一般在一两年内死亡，剖检所见病灶组织与疯牛病类似[8, 9]。虽然动物朊病毒存在种属屏障，但其限制并不严格，将疯牛病病牛脑组织匀浆接种给绒猴或猿等灵长类动物，可使之发生神经症状，大脑病变呈海绵状[10]。近年来克雅氏病在欧洲发
病率比过去几十年增长了10倍以上，这种增长目前被高度怀疑为是由接触或食用朊病毒感染的牛内脏所引起的（由疯牛病所引起的克雅氏病在医学上被称为新型克雅氏病）[10, 11]。另据科学推测，疯牛病的发源国英国已约有50万人潜在感染新型克雅氏病，这些人可能都处于长短不同的潜伏期中，如果处理不当，到2020年以后新型克雅氏病将成为比艾滋病还要可怕的世界性的特殊传染病[12]。
迄今为止，虽然在中国尚未出现较大范围朊病毒引发的疾病的报道，但是随着在各个领域中的国际交流与合作的与日俱增，中国存在着极大的感染外来朊病毒的潜在威胁。届时一旦感染，必将极度冲荡中国的社会稳定和经济发展。例如2003年非典病毒的流行与蔓延在中国造成了巨大的损失，2005年至今禽流感病毒又在中国的许多地区发生，对国民的安全和中国经济的发展造成了巨大威胁。朊病毒与上述两类病毒的相似之处在于都是起源于动物（特别是人类食用的动物），这些病毒首先在动物物种内传播，在人类对动物生长自然环境进行了长期累积的非合理性改造后，进而通过基因突变等方式打破种间屏障，形成能够感染人体的变种病毒，最终对人类的生命健康造成巨大的威胁。因此，不仅要在科学的基础上制定合理的法规和制度隔离朊病毒的传染源以及控制其传播途径，更需要我们通过寻求经济、简单、安全、高效的抗朊病毒药物筛选模型进一步建立具有国际水平的国有自主知识产权的高通量的抗朊病毒药物筛选平台，从而尽快研发出预防和朊病毒引发疾病的药物，这将具有重大的科学意义和实用价值。
项目主持人这次申请的利用基因重组技术建立细胞水平高灵敏度抗朊病毒药物筛选模型的研究项目是
一项国际前沿的生命科学领域的研究，它对于在此方向上与国际最前端科学研究同步起到至关重要的作用，其成果在国际上的专利申报将会填补国内研究在这一领域的空白，提高我国在朊病毒研究领域的国际地位。这种利用基因重组技术建
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