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述了破骨细胞外泌体中miRNA对于成骨细胞的影响。如果大家想报名文献精读春季班的话，可以直接点击底部的“阅读原文”。
这篇Cell Discovery上的骨科文章，Cell Discovery是2014年自然出版集团（NPG）与中科院上海生命科学研究院合作的新期刊，今年影响因子估计在7、8分左右。首先来看下今天的文章题目：
当心生活中的核辐射
其中有四个关键字：成骨细胞、破骨细胞、外泌体、miRNA，四部分连起来这篇文章也就是研究源自破骨细胞的外泌体中miRNA能够抑制成骨细胞的活性，来看看具体是怎么做的。
一、实验假说
弹道学报
科学研究第一步就是提出假说，然后再开始证明，这也是核心的科学思想。本文的假说如下图所示：
这里面有三个核心内容，支撑起这篇文章：
1、从破骨细胞来源外泌体能够被成骨细胞摄取并影响其成骨功能——阐释模型
2、进一步研究发现，在破骨细胞外泌体高表达miR-214，能够负调节ATF4，抑制成骨效应——提出分子
市场潜力3、破骨细胞外泌体依赖于ephrinA2- EphA2信号途径影响下游效应——解释机制
研究的逻辑链就是：
二、结果解读
本文用七张大图来呈现研究的数据，可以分为四部分：汪天云
1、Fig1交代了分子的来源，并进行了对miRNA的筛选，选择了此次研究的对象miR-214；
2、Fig2-Fig4是通过了离体实验验证了外泌体以及ephrinA2- EphA2信号的生物学功能；
3、Fig5-Fig7是在动物模型中对外泌体miR-214做了功能鉴定，尤其是Fig7是对于策略进一步深入的研究。
Fig1作者是要鉴定破骨细胞来源外泌体及miRNA，那首先就要做一个破骨细胞的模型。作者选了经典的小鼠RAW264.7做为前体细胞，之后加入RANKL（NF-κB受体活化因子配体）诱导2天，基本骨科做破骨细胞模型的都是这么做的。
对于外泌体的观察，作者除了用常见的电镜技术外，还用了动态光散射技术（DLS）来检测培养上清中颗粒粒径分布。两者都证明了有外泌体的存在。电镜图基本也是外泌体文章的标配。
当然，光看形态还不够，接下来还用Western做了外泌体表达的Marker蛋白鉴定，有一些Marker是非常特异的，只在外泌体中表达。这篇文章选了HSP70、TSG101、CD63（荧光标记），除此以外为了证明是外泌体，还检测了核蛋白标记，因为外泌体是没有细胞核的（可以看到Western上的空缺），这里选择了TFIIB、LaminA/C。
确定了是外泌体后，作者开始对其中的内容物进行了分析，这里用了Bioanalyzer进行片段长度的分析，在18-24 nt 处发现了丰堵富集。
接下来开始了文章的重头戏，通过高通量测序筛选比较RAW264.7和RANKL诱导的RAW264.7的外泌体miRNA，并通过查文献得知13个差异表达miRNA与骨代谢相关， qPCR验证得到9个上调的和4个下调的miRNA。
楚辞 招魂
作者选择了miR-214-3p做研究对象，是一个显著表达上调的miRNA。之所以选这个miRNA，因为作者在文献中发现了这个miRNA能靶向ATF4来抑制成骨功能。这是一种略为保守的研究方案，降低了本文的学术创新，如果选一条全新的miRNA并出靶向基因介导成骨细胞，那这篇文章的影响因子还能再高。
然后作者还非常严谨通过RNase降解实验验证了miR-214是来自于外泌体而不是凋亡小体和微泡的。这时候作者还不放心，又做了人的细胞模型，CD14+的人外周血单核细胞分选后加入macrophage colony- stimulating factor (M-CSF) 和 RANKL诱导，又做了一遍了形态学和Western检验，证实了诱导成功，当然也没放过miR-214。这就是套路，告诉了我们最完整的外泌体miRNA检测要做哪些。
沈钧儒
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