甲胎蛋白异质体（Variants of AFP or molecular heterogenetic of AFP ）是一种单链糖蛋白，含糖量约为4％左右。不同组织细胞合成的AFP，其糖链结构有所不同，对植物凝集素的结合能力也不相同，此种糖链结构不同的AFP称为AFP的亚型或变异体，也称为AFP分子异质体。近年来对AFP异质进行了电泳、糖链结构及与植物凝集素结合能力等方面进行了深入研究。有资料表明，AFP异质体存在着分子大小和电荷量的差异。淀粉胶电泳将人肝癌血清AFP分为4种亚型；用SDS聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳发现AFP可分为分子量72kD和kD两种成分；等电聚焦结合交叉免疫电泳可使胎儿AFP分成10种等电点不同的异质体。这表明AFP异质体存在着电泳不无一性，这与其一级结构差异有关。其C－末端结构基本相同，N末端至少有3种不同结构，这能否产生AFP电泳异质性有待于证实。AFP结构中的糖链主要由甘露糖、半乳糖、N－乙酰葡萄糖和唾液酸，并以寡糖单位的形式组成。AFP异质体糖链结构的差异主要表现在分支结构的不同，刀豆素A（ConA）结合型和非结合型AFP异质体的糖链结构模型差异表现在一个分支中有无－GLcNAc-Gal-NeuNAc结构。对人肝癌AFP糖链结构电泳研究发现，其寡糖分为中性（N）、酸性（A1，A2）三种成分。进一步研究证实N两分支末端均由半乳糖组成，A1两分支末端分别为半乳糖和N－乙酰神经氨酸，A2则均为N－乙酰神经 氨酸。卵黄囊肿瘤的AFP其ConA亲和性组占50％左右，肝癌腹水中与LCA结合的AFP糖链中具有与Asn连接的N－乙酰基葡萄糖胺残基，而在非结合型异质体的糖链中无此成分。
根据AFP与外源性凝集素（Lectin）结合能力的差异，可分为不同的变异体。采用扁豆凝集素（LCA）／刀豆素A亲和电泳或层析技术能将AFP分为LCA／ConA非结合型AFP（AFP－N－L／AFP－N－C）和LCA／ConA结合型AFP（AFP－R－L／AFP－R－C）两种。新的Lectin的应用，使AFP在糖链结构上异质体达9种之多。AFP异质体的命名方法为：从阴极开始在LCA亲和电泳上AFP的条带依次为L1、L2008中秋晚会2、L3；在E－PHA亲和电泳上AFP的条带依次为P1、P2、P3、P4卢发兴、P5；用ConA时按AFPC1、C2命名；alloA时按AFPA1、A2、A3命名。AFPL2、L3完全不能分离，存在中间成分时按AFPL2、L3命名，AFPP4、P5分离不充分时命名为AFP－P4＋AFP－P5。因此，AFP对不同的Lectin反应所表现的异质体不同，故可用于疾病的鉴别诊断。
AFP异质体亲和交叉免疫电泳检测法
【原理】
根据AFP对刀豆素（ConA）或小扁豆凝集素（LCA）结合能力的不同，可区别原发性肝细胞癌与非原发性肝癌引起的AFP升高，提高AFP对肝癌的诊断价值。此法原理是将检样于含LCA的琼脂糖凝胶中电泳，与LCA结合型AFP在电泳时被阻留，而非结合型AFP则向阳极侧泳动。然后，与首次电泳的方向垂直，在含抗AFP的琼脂糖胶中作第二次电泳。此时被首次电泳分离的AFP异质体，将分别于含抗AFP的凝胶板中形成沉淀峰,根据峰的大小即可了解结合型或非结合型AFP所占的比例。
【试剂】
1．小扁豆凝集素（LCA）。
2．抗AFP血清：同ELISA法。
3．10.0g/L琼脂糖：琼脂糖1.0g加0.25mol/L pH8.6缓冲液100ml，沸水浴中使溶，加入NaN3使达1.0g/L，按需要量分装后密塞，4℃保存。
4．125I－AFP。
【试剂】
1．小扁豆凝集素（LCA）。
2．抗AFP血清：同ELISA法。
3．10.0g/L琼脂糖：琼脂糖1.0g加0.25mol/L pH 8.6缓冲液100ml，沸水浴中使溶，加入NaN3使达1.0g/L，按需要量分装后密塞，4℃保存。
4．125hipihiI－AFP。
【操作】
1．将10.0g/L琼脂糖融化后，在6cm×12cm洁净玻板之一侧浇注2cm×12cm（厚1.6cm）凝胶条（约需3.84ml凝胶液），凝固后于距内缘2～3mm处切割一0.5cm×10cm的槽。
2．用缓冲液将LCA稀释成2mg/ml（－20℃可保存1个月），取80μl加入冷至56℃的已融化琼脂糖凝胶1ml中，混匀后浇注于上述槽中。待凝固后，于此胶条上距阴极端0.5cm处打一直径0.2～0.3cm的孔，距此孔4.5cm处打第二个孔（第二份检样）。
3．两孔内各加一份待测血清，加样量5～10μl。以1.0g/L溴酚蓝为指示剂，10V／cm稳压
电泳，至白蛋白泳出4cm时关闭电源。
4．将抗AFP血清按效价与融化并冷至56℃的琼脂糖胶液混合（琼脂糖最终浓度为9.0g/L，抗AFP达最适浓度），并浇注玻板的其余部分（4cm×12cm），约需含抗血清胶液7.68ml，使凝固。
5．于LCA胶条下1.5mm处空白凝胶内切割一0.2cm×10cm的细槽，槽内注入混有1.0g/L溴酚蓝5μl的125I－AFP 20μl（约6万～7万cpm）。如混入0.35ml融化的10.0g/L琼脂糖胶液中浇注更好。10V／cm稳压电泳，电泳方向与第一次电泳垂直。至白蛋白泳出4cm时终止。
6．电泳结束后，用滤纸覆盖于凝胶板表面，置37℃干燥后，于暗室覆盖X光底片，室温曝光48h，显影，定影后观察。
踏雪而归【结果判断】
将X光胶片置坐标纸上，以峰两侧水平线作基线，峰形下总面积（小格数）为100％，各所占面积（小格数）与总面积的百分比即AFP异质体的百分比。
AFP异质体亲和电泳免疫印迹法
异端的权利
【原理】
将含AFP的待检血清置于含LCA的琼脂糖凝胶中电泳。LCA结合型AFP泳动速度慢，而CA非结合型AFP泳动速度快，形成前后2条区带。用吸附有抗人AFP抗体的硝酸纤维素（NC）膜进行免疫印迹，再依次与酶标记抗人AFP抗体和酶底物反应则显。NC膜上可呈现2条着区带，透明后用光密度计扫描，得出结合型与非结合型AFP所占百分比。
【试剂】
1．小扁豆凝集素（LCA）。
2．马抗人AFP抗体。
3．兔抗人AFP－HRP。
4．结合马抗人AFP抗体的硝酸纤维素膜（简称马抗人AFP－NC膜）；将NC膜剪裁成与凝胶板相同大小，浸于最适稀释浓度的马抗人AFP抗体溶液中，5min后取出，电吹风吹干，
4℃保存，4周内稳定。
5．洗涤液：150mmol/L NaCl溶液，含0.05% Tween-20。
【操作】
1．用25mmol/L Tris-缓冲液（pH 8.6）配制10g/L琼脂糖凝胶（内含2.0g/L LCA），浇注玻板。凝胶厚度为1.0mm，长8cm，宽度视标本数而定，一般为1cm宽／每份标本。在负极侧0.5cm处，切一条7mm长、1mm宽的加样槽，槽内加待检血清4μl。电压15V／cm，电泳45min。电泳毕，取下琼脂糖凝胶板。
2．将马抗人AFP－NC膜先用蒸馏水浸湿，仔细地覆盖于琼脂凝胶板上，再在NC膜上加数层滤纸，上面置10g/cm2的重物。约经30min，凝胶板上AFP电泳区带即转印至NC膜上。
3．将免疫印迹的NC膜浸入用20g/L牛白蛋白溶液最佳稀释的兔抗人AFP－HRP溶液中，37℃，经1h后取出。NC膜用洗涤液洗3次。最后将NC膜浸入酶底物溶液（DAB＋H2地球物理勘探技术O2）中，待显现出二条棕黄区带后，用蒸馏水冲洗数次，终止反应。
4．在阴极侧的区带为LCA结合型AFP；阳极侧的区带为LCA非结合型AFP，NC膜在空气中干燥后，用十氢萘透明，用光密度计在波长490nm扫描，打印出二条区带的百分数。
【参考值】
阴性
【临床意义】
1．AFP是一种糖蛋白，其寡糖链有多样性，AFPV与植物血凝素中的小扁豆以集素（Lens culinaris agglutinin, LCA）亲和力不同，而分为LCA亲和的（LCA－R）和与LCA非亲和（LCA－N）的两部分，原发性肝癌的AFP糖链中存有异质体。
2．AFPV检测能鉴别良恶性肝病，如LCR－R≥25％者多数（80％以上）为原发性肝癌。LCA－N高者为良性肝病，如急慢性肝炎，肝硬化等。
3．对病程预后的判断：如肝癌切除后，AFPV随AFP转阴而消失，若AFP未转正常，但甲胎异质体含量明显下降的患者复发的危险性少，而AFP含量下降，AFPV含量相对恒定者，则术后容易复发。
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