间硝基苯胺
猪细小病毒（Porcine parvovirus，PPV）是一类小DNA病毒，是引起猪繁殖障碍的主要病原之一，其危害主要表现为受感染的母猪，特别是初产母猪及血清学阴性经产母猪发生流产、不孕、产死胎、畸形胎、木乃伊胎及弱仔等。该病毒对理化因素有很强的抵抗力，广泛分布于世界各地并在大多数猪场呈地方性流行，严重地影响着养猪
业的发展，该病的严重危害受到了国内外许多学者的关注，对PPV诊断方法及免疫防制的研究成为了热点之一。猪细小病毒感染可依据临床症状和流行病学作出初步诊断，一般认为，如果仅妊娠猪发生流产、死胎、木乃伊胎、胎儿发育异常，同时有证据表明是传染性疾病时，则应考虑到PPV感染的可能，但进一步确诊必须进行实验室诊断。自1967年，Cartwright等首次报道PPV病以来，有关该病诊断方法的研究报告较多，从最初的病毒分离鉴定，到血凝及血凝抑制试验、酶联免疫吸附试验等免疫学方法，直到核酸探针、聚合酶链式反应等分子生物学技术应用到PPV病的诊断中。 羞耻心中小企业人力资源管理病毒分离和鉴定用于诊断PPV感染的最大优点是结果准确可靠，可以作为最后确诊。用于分离PPV的病料，一般为流产或死产胎儿的脑、肾、肝、肺、睾丸、胎盘及肠系膜淋巴结等，其中以肠系膜淋巴结和肝脏的分离率最高。。虽然此方法是最准确的诊断方法，但是其费时
费力，并且需要一定的技术条件和设备，另外，其感染力会随着胎儿死亡时间而降低从而限制了临床应用；红细胞凝集试验(HA)操作简便易行，且能进行快速、大量的诊断，但是其灵敏度低、特异性不强，只能作为辅助诊断方法。
血凝抑制(HI)试验是检测PPV抗体最常用的经典方法，一般采用试管法和微量法。利用HI试验检测人工感染PPV的猪，发现感染后5d即可检测到相应抗体，12~14d 抗体滴度高达1024~4096，并能持续多年检出抗体。待检血清进行HI试验时需要首先进行热灭活处理，然后再用红细胞吸附，以除去血清中的非特异性血凝素，进一步用高岭土吸附以除去或减少血清中非特异性抑制因子。目前，该方法在国内外已得到广泛应用。血清中和试验(SN)也是检测PPV抗体的方法之一，其原理是利用被检血清的抗体中和PPV，然后根据培养细胞的病变情况来计算血清抗体的滴度。SN的特异性比HI高，但是SN的操作较为复杂，首先要进行病毒感染力的测定，而PPV在低剂量时并不引起细胞病变，从而限制了该方法的使用。1988年，Hohdatsu等率先建立了PPV的ELISA诊断方法并用于检测PPV的血清抗体，我国姜永厚等(1997)建立了双抗体夹心ELISA用于检测PPV的抗原，可建立的ELISA诊断方法非特异性较强。邵振华、田海燕(中国兽药监察所)用滤纸采集猪血样，加入到预先用PPV抗原处理的微孔板小孔内，进行免疫间接过氧化物酶染试验检测PPV抗体，在2-3 h内即可观察结果。对比试验证实比HI敏感(高7.4%)，特异性更强。就操作过程而言，该方法比HI要简单，且具有采血方式新颖、送样方便以及抗原软板可随意剪取、不需要特殊的仪器设备等优点，但该方法中抗原的保存时间有限，因此限制了该方法的普及应用。王川庆(1996)等利用对流免疫电泳技术检测PPV抗原和抗体，在pH8.6、离子浓度为0.1mol/L、电流4mA的条件下，1~2h便可得出结果，而且抗原和血清不需做特殊处理，使用的是普通电泳仪和常规试剂，因此有一定的推广价值，但是与HA或HI相比，其敏感度偏低。何启盖等(1999)将在IBRS-2细胞上同步培养增殖的PPV经甲醛灭活后，用经硫酸铵沉淀、透析浓缩后的病毒液致敏乳胶建立了检测PPV抗体的乳胶凝集试验诊断方法。致敏的乳胶抗原与PPV阳性血清反应出现肉眼可见的凝集颗粒，而且与生理盐水、PBS、犊牛血清、猪瘟、衣原体、口蹄疫、伪狂犬病、弓形虫病及萎缩性鼻炎等阳性血清不出现凝集现象。用LAT和HI同时对203份血清进行检测，结果发现二者的阳性符合率为93.16%。乳胶凝集试验与HI相比，具有简便、快速、经济等优点，尤其适合于临床上的现场检测，被许多学者誉为“傻瓜技术”，因此具有良好的推广应用前景。该方法的不足之处在于它所检测的抗体主要是IgM，因此只能用于疾病的定性诊断，不能进行血清抗体滴度的监测。Rivera等(1986)利用固相免疫荧光技术(IBA)检测PPV的抗原和抗体获得成功，其具有特异、敏感、快速、检出率高的特点，是实验室进行病毒分离鉴定常用的方法。
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baoba单克隆抗体具有特异性强，效价高并可在体外大量制备等特点，已成功地用于许多疾病的诊断和。Mengeling等1984年就研制出PPV的McAb并用于临床诊断。国内俞太尉和丘惠深(1993)用PPV7909株免疫Balb/c小鼠，融合其脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞，筛选出4株分泌抗PPV单克隆抗体的杂交瘤细胞系(F1、E6、G9、D4)，用D4株分泌的单克隆抗体建立的ELISA和HI同时对70份血清进行检测，阳性符合率为97.5%。但二者相比，因该ELISA具有从加样到结果判定均可自动化，不需对被检血清进行处理，样本容量大等特点而更适合于PPV病的早期诊断和流行病学调查。而核酸探针技术是一种分子水平的检测技术，具有快速、敏感、特异性强等特点，特别适用于疾病的早期诊断和类症鉴别诊断，是近二十年来应用较多的一项诊断技术。Krell等(1988)率先将核酸探针技术应用于PPV的诊断，他们将以PPV RF DNA酶切得来的3.0kb的DNA片段用放射性同位素标记后作为探针通过打点杂交检测培养细胞中的PPV。结果发现最低可检测0.1pg DNA。与HA的比较结果表明，该方法比HA敏感100倍以上。国内吴保成等(1992)对PPV RF DNA的Hind III和Pst I片段，进行生物素标记后用作探针进行斑点杂交。结果发现，该探针能检测到约100pg的PPV DNA。侯喜林等(1997)同样利用PPV DNA的Hind III和Pst I片段进行标记后用作探针检测PPV DNA，结果能与其自行分离的7株PPV毒株的DNA杂交，最低检出限量为
40pg DNA。之后，他们又将该探针用于临床检测PPV感染获得成功(侯喜林等，1998)。标记探针与放射性标记探针相比具有相同的敏感性，并且克服了生物素标记探针敏感性差、背景深的特点，因此是探针标记中较为理想的方法。核酸探针技术用于PPV抗原的检测比HA试验敏感、特异性强，适宜于实验室进行PPV感染的诊断，但该方法的技术含量高，只能在专业实验室应用，不适合大面积临床诊断和现场应用。
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