范国权; 喻江; 白艳菊; 高艳玲; 张威; 张抒; 申宇; 邱彩玲; 胡林双; 孙妍
【期刊名称】《《中国马铃薯》》
【年(卷),期】2019(033)004
【总页数】10页(P227-236)
【关键词】杭州科技信息网马铃薯; 病虫害; 标准; 检测技术
【作 者】范国权; 喻江; 白艳菊; 高艳玲; 张威; 张抒; 申宇; 邱彩玲; 胡林双; 孙妍
【作者单位】黑龙江省农业科学院植物脱毒苗木研究所 黑龙江 哈尔滨 150086; 哈尔滨商业大学 黑龙江 哈尔滨 150028; 农业农村部工程建设服务中心 北京 100000
【正文语种】中 文
日用化工品【中图分类】S532
马铃薯是一种营养体无性繁殖植物，植株和块茎都易感病，侵染马铃薯的病虫害有几十种，主要包括真菌、细菌、病毒、类病毒、甲虫、线虫等。这些病虫害可以随种薯传播，其中，细菌、病毒和类病毒病害还可以通过种苗传播，造成病害大面积扩散，严重影响马铃薯的产量和质量。病虫害一般可造成马铃薯减产10%～30%，严重情况下减产可达70%以上，是影响马铃薯产业发展的瓶颈之一。因此，在马铃薯生产中病虫害检测工作极为重要，及时发现并确认病虫害，有利于其有效防控，可以防止大面积扩散，降低产量和质量损失。 现有28个病虫害检测标准，其中涉及马铃薯细菌检测标准4个，病毒检测标准10个，类病毒检测标准4个，真菌检测标准7个，甲虫检测标准1个和线虫检测标准2个。从检测病虫害种类看，可检测病虫害包括细菌性病害青枯病[Ralstonia solanacearum（Smith）] 和 环 腐 病（Clavibacter michiganensis subsp.sepedonicus）；病毒病有马铃薯卷叶病毒（Potato leaf roll virus，PLRV）、马铃薯Y 病毒（Potato virus Y，PVY）、马铃薯X 病毒（Potato virus X，PVX）、马铃薯A 病毒（Potato virus A，PVA）、马铃薯M 病毒（Potato virus M，PVM）、马铃薯S 病毒（Potato virus S，PVS）、马铃薯V 病毒（Potato virus V，PVV）、马铃薯帚顶病毒（Potato mop-top virus，PMTV）和马铃薯黄
化矮缩病毒（Potato yellow dwarf virus，PYDV）；类病毒有马铃薯纺锤块茎类病毒（Potato spindle tuber viroid，PSTVd）；真菌病害包括马铃薯银屑病（Helminthosporium solani Durieu et Mont.）、马铃薯黑粉病[Thecaphora solani（Thirumalachar & O.Brien）Mordue]、马 铃 薯 坏 疽 病（Phoma exigua var.foveata）、 马 铃 薯 绯 腐 病（Phytophthora erythroseptica Pethybridge）、马铃薯病[Colletotrichum coccodes（Wallr.）Hughes]、 马 铃 薯 皮 斑 病[Polyscytalum pustulans（M. N. Owen et Wakef.）M. B. Ellis]和马铃薯 癌 肿 病[Synchytrium endobiticum（Schilberszky）Percival]； 马 铃 薯 甲 虫（Colorado potato beetle）[Leptinotarsa decemlineata（Say）]；线虫包括马铃薯白线虫（White potato cyst nematode）[Globodera pallida（Stone）Behrens]和马铃薯金线虫（Golden potato cyst nematode）[Globodera rostochiensis（Wollenweber）Behrens]，总计22种病虫害。
2012年中秋晚会1 马铃薯病害检测技术及特点
目前，马铃薯病害检测最常用的技术有生物学检 测 法（Biology detection）、 电 镜 检 测 技 术（Technology of electron microscopy）、血清学方法（Serological detection assay）和分子生物学检测法。 1.1 生物学检测法
生物学检测法是最直观的一种检测技术，属于最基本的检查方法，根据植物发病症状进行病害诊断，适用于所有类型的病害。传统生物学检测技术检测马铃薯病毒病直观、容易操作、价钱便宜，除检测病毒外，还可以在形态学上提供病毒毒理指标[1]（表1）。但是，生物学检测技术鉴定周期长，需要特定的指示植物，同时需要严格控制环境条件，现已不能适应生产上快速检测的需要。
1.2 电子显微镜检测
金华职业技术学院图书馆电子显微镜特有的高分辨率特性，在马铃薯病害检测、超微结构及形态观察中发挥了重要作用。目前常用的有透射电子显微镜、扫描电子显微镜、环境扫描电子显微镜、扫描隧道显微镜及原子力显微镜等新型电镜。电子显微镜可以清晰地看到微小的病毒粒体，病原微生物侵染植物的过程，还可以直接观察到细胞结构和细胞器被破坏的过程。
1.3 血清学检测方法
血清学方法是病毒诊断和鉴定的基础方法，用于植物病毒检测的血清学方法主要包括酶联
免疫吸附法、斑点免疫结合测定法、免疫扩散、免疫电泳、荧光免疫等。目前，应用最为广泛的是酶联免疫吸附法、斑点免疫结合测定法、免疫胶体金技术。在马铃薯病害检测中，最常用的是双抗体夹心法（Double antibody sandwich enzyme-link immunoassay，DAS-ELISA）。
1.4 分子生物学检测方法
马铃薯病虫害检测常用的分子生物学方法有聚合酶链式反应（Polymerase chain reaction，PCR）、反转录酶-聚合酶链锁反应（Reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR）方法、实时定量PCR（Quantitative real-time polymerase chain reaction，qPCR）方法和实时定量RT-PCR（Quantitative real-time reverse transcription-polymerase chain reaction，qRT-PCR）方法、核酸杂交检测技术（Nucleic acid spot hybridization， NASH）和免疫荧光检测技术（Immunofluorescence，IF）等。分子生物学方法对于常规方法研究较困难的植物病毒、类病毒，以及专性寄生病原菌的检测，显示了较强的优越性，技术灵敏度高，操作简便。其中，核酸杂交检测技术是目前马铃薯类病毒检测主要采用的技术，而免疫荧光检测技术在马铃薯细菌性病害检测中广泛应用。
表1 马铃薯病毒的鉴别寄主及症状Table 1 Host plants and symptoms of potato viruses马铃薯病毒病Potato virus接种方式Inoculation mode摩擦Rub PVY PVX摩擦或（桃蚜）Rub or peach aphid PVS 摩擦Rub PLRV 桃蚜Peach aphid PVM 摩擦Rub指示植物Indicator plant毛曼陀罗（Datura metel）千日红（Gomphrena globosa）白花刺果曼陀罗（Datura stramonium）指尖椒（Capsicum annum）普通烟草（Nicotiana tabacum）洋酸浆（Physalls floridana）枸杞（Lycium chinense）A6千日红（Gomphrena globosa）苋黎（Chenopodium amaranticolor）德伯尼烟（N.debneyi）洋酸浆（Physdis floridana）白花刺果曼陀罗（Datura stramonium）千日红（Gomphrena globosa）毛曼陀罗（Datura metel）德伯尼烟（N.debneyi）症状Symptom汁液摩擦接种，在20 ℃条件下，接种10 d后接种叶片出现局部病斑心叶花叶。汁液磨擦接种5～7 d，在接种叶片出现紫红环枯斑。接种后10 d心叶出现花叶症状。接种10～12 d接种叶片出现坏死斑点，以后系统发病。汁液接种7～10 d感病初期叶片明脉，后期是沿脉绿状。汁液磨擦接种后，在室温16～18 ℃条件下，经10～15 d，在接种叶片上出现黄褐不规则的枯斑，以后落叶。接种10 d左右，接种叶片产生模糊不清的褐局部病斑。接种5～10 d接种叶片出现褐球状坏死枯斑。初浸染时呈绿圆环斑，逐渐坏死。汁液摩擦接种14～25 d，接种叶片出现红小斑点，略 ERP系统设计与开发微凸出的圆环小斑点。接种20～25 d叶片出现局部黄斑点。初期明脉以后是暗绿块斑花叶。蚜虫接种，温度24 ℃条件下，接种6～8 d开始出现系统卷叶失绿、生长表现抑郁。蚜虫接种后，表现系统卷叶。接种15～20 d，接种叶片沿叶脉周围出现紫红斑点。接种10 d后，接种叶片出现失绿小圆斑至褐枯斑，以后系统发病。接种10 d后接种叶片出现局部病斑。
2 28个病害检测技术标准
2.1 马铃薯类病毒检测标准
大叶黄杨白粉病涉及马铃薯类病毒检测技术标准共有5 项（表2）。《马铃薯纺锤块茎类病毒检疫鉴定方法》（GB/T 31790-2015）[2]和《马铃薯纺锤块茎类病毒检疫鉴定方法》（SN/T 3437-2012）[3]均由全国植物检疫标准化技术委员会提出。马铃薯类病毒作为国家检疫性病害，2 个标准中规定的检测方法包括生物学方法、往复聚丙烯酰胺凝胶电泳法（Return-polyacrylamide gel electrophoresis，R-PAGE）、
RT-PCR方法和qRT-PCR方法。标准中规定生物学症状明显的样品，通过标准中一种方法
检测为阳性，即可判断为样品携带PSTVd，如果未发现生物学症状，则需要通过不同原理的2 种方法进行检测，均为阳性的样品，判定样品携带PSTVd。从检疫角度出发，标准中规定的结果判定方法符合国际检疫性病害判定方法，结果严谨准确。
表2 马铃薯类病毒检测标准Table 2 Detection standard of potato spindle tuber viroid标准名称Standard name 检测方法Method生物学R-PAGE RT-PCR qRT-PCR R-PAGE RT-PCR标准代码Standard code马铃薯纺锤块茎类病毒检疫鉴定方法Detection and identification of potato spindle tuber viroid GB/T 31790-2015马铃薯纺锤块茎类病毒检测Detection of potato spindle tuber viroid(PSTVd)马铃薯纺锤块茎类病毒检测核酸斑点杂交法Detection of potato spindle tuber viroid(PSTVd)-Nucleic acid spot hybridization(NASH)NY/T 1962-2010 NASH NY/T 2744-2015马铃薯纺锤块茎类病毒检疫鉴定方法Detection and identification of potato spindle tuber viroid脱毒马铃薯种薯（苗）病毒检测技术规程Rules for virus detection of virus-free seed(seedling)potatoes生物学R-PAGE RT-PCR qRT-PCR R-PAGE RT-PCR SN/T 3437-2012 NY/T 401-2000
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