凝胶⾊谱法⼜称分⼦排阻⾊谱法。凝胶⾊谱法主要⽤于⾼聚物的相对分⼦质量分级分析以及相对分⼦质量分布测试。根据分离的对象是⽔溶性的化合物还是有机溶剂可溶物，⼜可分为凝胶过滤⾊谱（GFC）和凝胶渗透⾊谱（GPC）。 凝胶⾊谱法分类
根据分离的对象是⽔溶性的化合物还是有机溶剂可溶物，⼜可分为凝胶过滤⾊谱（GFC）和凝胶渗透⾊谱（GPC）。
凝胶过滤⾊谱：
凝胶过滤⾊谱⼀般⽤于分离⽔溶性的⼤分⼦，如多糖类化合物。凝胶的代表是葡萄糖系列，洗脱溶剂主要是⽔。
凝胶渗透⾊谱：
凝胶渗透⾊谱法主要⽤于有机溶剂中可溶的⾼聚物(聚苯⼄烯、聚氯已烯、聚⼄烯、聚甲基丙烯酸甲酯等)相对分⼦质量分布分析及分离，常⽤的凝胶为交联聚苯⼄烯凝胶，洗脱溶剂为四氢呋喃等有机溶剂。
凝胶⾊谱不但可以⽤于分离测定⾼聚物的相对分⼦质量和相对分⼦质量分布，同时根据所⽤凝胶填料不同，可分离油溶性和⽔溶性物质，分离相对分⼦质量的范围从⼏百万到100以下。 近年来，凝胶⾊谱也⼴泛⽤于分离⼩分⼦化合物。化学结构不同但相对分⼦质量相近的物质，不可能通过凝胶⾊谱法达到完全的分离纯化的⽬的。
凝胶⾊谱法原理
凝胶⾊谱法⼜称体积排阻⾊谱法，使⽤⽔溶液流动相的称为凝胶过滤⾊谱，使⽤有机溶剂流动相的称为凝胶渗透⾊谱。凝胶⾊谱的固定相是多孔物质，如多孔凝胶、交联聚苯⼄烯、多孔玻璃及多孔硅胶等。试样是按照其中各组分分⼦⼤⼩的不同⽽分离的。⼤于填料微孔的分⼦，由于不能进⼊填料微孔，⽽直接通过柱⼦，Z先流出柱外，在⾊谱图上Z早出现，⼩于填料微孔的组分分⼦，可以渗透到微孔中不同的深度，相对分⼦质量Z⼩的组分，保留时间Z长。
凝胶⾊谱与凝胶层析是否⼀样？
基本上是⼀致的只是固定相存在差异。凝胶⾊谱法⼜称分⼦排阻⾊谱法。凝胶⾊谱主要⽤于⾼聚物的相对分⼦质量分级分析以及相对分⼦质量分布测试。
凝胶层析⼜称分⼦筛过滤、排阻层析，操作条件⽐较温和，可在相当⼴的温度范围下进⾏，并且对分
离成分理化性质的保持有独到之处。
两者的共同点是都不需要有机溶剂。凝胶⾊谱⾊谱⼀般⽤在HPLC等分析场合。⽽凝胶层析⼀般⽤在制备的时候。
原理是⼀回事，都是排阻⾊谱。但是前者是制备柱，对⼤量样品进⾏分离，柱⼦⼝径⼤，⼀般要有切割承样的尾接装置；后者是分析柱，主要⽬的是对⼩量样品进⾏分析，柱⼦直径⼩，⼀般还有柱温箱，对泵的稳定性要求⾼，必须接检测器。
凝胶种类及性质
1、Sephadex G
交联葡聚糖的商品名为Sephadex，不同规格型号的葡聚糖⽤英⽂字母G表⽰，G后⾯的阿拉伯数为凝胶得⽔值的10倍。例如，G-25为每克凝胶膨胀时吸⽔2.5克，同样G-200克每克⼲胶吸⽔20克。交联葡聚糖凝胶的种类有G-10，G-15，G-25，G-50，G-75，G-100，G-150，和G-200。因此，“G”反映，凝胶的交联程度，膨胀程度及分部范围。
2、Sephadex LH-20
Sephadex LH-20是─Sephadex G-25的羧丙基衍⽣物，能溶于⽔及亲脂溶剂，⽤于分离不溶于⽔的物质。交联葡聚糖和琼脂糖都是多糖类物质，防⽌微⽣物的⽣长，在凝胶层析中⼗分重要，常⽤的抑菌剂有：
（1）叠氨钠（NaN3）
在凝胶层析中只要⽤0.02%叠氮钠已⾜够防⽌微⽣物的⽣长，叠氮钠易溶⼀⽔，在20℃时约为40%；它不与蛋⽩质或碳⽔化合物相互作⽤，因此叠氮钠不影响抗体活⼒；不会改变蛋⽩质和碳⽔化合物的层析我特性。叠氮钠可⼲扰荧光标记蛋⽩质。
（2）可乐酮[Cl3C-C(OH)(CH3)2]
在凝胶层析中使⽤浓度为0.01-0.02%。在微酸性溶液中它的杀菌效果Z佳，在强碱性溶液中或温度⾼于60℃时易引起分解⽽失效。
（3）⼄基汞代巯基⽔杨酸钠
在凝胶层析中作为抑菌剂使⽤浓度为0.05-0. 01%。在微酸性溶液中Z为有效。重⾦属离⼦可使⼄基代巯基的物质结合，因⽽包含疏基的蛋⽩质可在不同程度上降低它的抑菌效果。
（4）苯基汞代盐
在凝胶层析中使⽤浓度为0.001-0.01%。在微碱性溶液中抑效果Z佳，长时间放置时可与卤素、硝酸根离⼦作⽤⽽产⽣沉淀；还原剂可引起此化合物分解；含疏基的物质亦可降低或抑制它的抑菌作⽤。
焊后热处理使⽤凝胶⾊谱仪的注意事项
溶剂准备：使⽤HPLC纯溶剂，如有必要，进⾏过滤。保证溶剂的相溶性，避免使⽤对不锈钢有腐蚀性的溶剂。
溶剂脱⽓：超声脱⽓。
样品准备：过滤样品，确保样品中不含固体颗粒，⽤流动相溶解样品。
⾊谱柱的保护
1、防⽌⽓体进⼊⾊谱柱。凝胶柱是不允许⽓泡进⼊的，否则将会使柱效降低甚⾄形成微⼩的难以驱除的⽓室。因此，为了防⽌⽓泡进⼊⾊谱柱，⼀定要使⽤经过脱⽓的流动相，并且要严格按照下列步骤来安装⾊谱柱。
a.拆卸下⾊谱柱⼊⼝处的密封螺丝，观察是否有溶剂渗出；
b.如有溶剂渗出，即可将⾊谱柱接到管路上，以避免⽓泡的进⼊；
c.如⽆溶剂渗出时，表明⾊谱柱的此端已经进去空⽓了，此时，可将⾊谱柱的出⼝端接到进样阀上，
以流动相来反⽅向冲洗⾊谱柱，以便将柱内的空⽓排除。最好以0.2ml/min的⼩流量来冲⾊谱柱，如果溶剂的流速太快或者是压⼒突然的上升都将会导致柱性能的降低；
d.如果流出的溶剂⾥不含有⽓泡，说明柱内的⽓体已经被排出了，再将⾊谱柱以正确的⽅向接好，这样⽓泡就进不到⾊谱柱⾥⾯了。
2、⾊谱柱的清洗
为了不使被测物质和杂质停留在⾊谱柱中，在每次的样品分析⼯作完成之后，都应及时地清洗⾊谱柱。⾸先要⽤对被测样品洗脱能⼒强的溶剂来洗脱⾊谱柱，以分析⼯作中常⽤的反相⾊谱分析法为例，因其先流出的物质是极性⼤的物质，此时应⽤100%的甲醇或使⽤异丙纯、四氢呋喃等极性稍弱的溶剂将吸附在柱内的极性⼩的物质洗脱下来，洗脱液的⽤量⼀般为柱体积的20倍即可。如果流动相是缓冲溶液，则应先⽤蒸馏⽔来冲洗⾊谱柱，以冲掉柱内的盐，然后再⽤合适的溶剂来冲洗。都市艳情
凝胶滤过⾊谱法(Gel Filtration Chromatography)中所使⽤的凝胶柱常⽤缓冲溶液做流动相，⽤完之后当然要⽤蒸馏⽔来冲洗。如果是连续操作，可以将缓冲溶液置于柱内过夜，但最好是维持⼩流速(＜0.5ml/min)以防⽌缓冲盐的析出，如果流动相中含有卤化物，即使是停⼀夜，也必须要⽤蒸馏⽔将⾊谱柱冲洗⼲净，以防⽌它们对柱体的腐蚀。
3、⾊谱柱的存放
谢希德如果⾊谱柱暂时不⽤，存放时要注意以下⼏点：
a.⼏天之内的短期放置，凝胶柱则⽤蒸馏⽔来冲洗，再把⾊谱柱的两头⽤密封螺丝密封好即可。
b.如果⾊谱柱长期不⽤，仅⽤上述⽅法来处理就不⾏了，这时应使⽤⾊谱柱使⽤说明书中所指明的溶剂来充满⾊谱柱，凝胶柱则不能⽤⽔了，因柱内如果有微⽣物的⽣长则会使柱效降低，此时应⽤0.05%的NaNs⽔溶液(防腐剂)来冲洗⾊谱柱，再将⾊谱柱封严。⾊谱柱长期放置时，⼀定要将⾊谱柱的两端封严，以防⽌由于溶剂挥发⽽造成的柱填料⼲缩现象，因这可导致柱效的严重降低。远程教育论坛
c.⾊谱柱应贮存在室温下，如果放置于0℃以下的环境⾥，柱内就会结冰，这也将导致柱效的降低。
4、不要⾼温使⽤
珀尔5、不要⾼压冲洗柱⼦
6、对仪器的维护和保养进⾏记录
（来源：互联⽹综合整理）
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