过氧化物酶（HRP）偶联抗体流程—钟鼎生物

过氧化物酶（HRP）偶联抗体流程—钟⿍⽣物

将⼀些既易测定⼜具有⾼度敏感性的物质如HRP，FITC，Biotin等标记到特异性抗体分⼦上，可以通过这些标记物的增强放⼤效应来显⽰或定量反应系统中抗原或抗体的性质与含量。本⽂介绍了过氧化物酶（HRP）标记抗体的实验流程。

材料

湖北农业科学试剂和耗材

50%(V/V)⼄醇10 mmol/L NaHCO3

1 mmol/L EDTA0.1 mol/L磷酸钠缓冲液，pH 6.8

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叠氮钠1 mg/ml抗体溶液

辣根过氧化酶(HRP; Sigma TypeVI)0.1 mol/L碳酸盐缓冲液，pH 9.2

0.1 mol/L碳酸盐缓冲液，pH 9.21.71 mg/ ml NaIO4新配制

葡聚糖凝胶G-25，中等凝胶介质5 mg/ml NaBH4于0.1 mmol/L NaOH新配制

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饱和硫酸铵 (SAS)溶液TEN缓冲液，pH 7.2鱼算法

⽜⾎清清蛋⽩(BSA)⽢油

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透析膜玻璃棉

HRP标记抗体步骤

1)透析膜依次浸泡于50%⼄醇1h，10 mmol/L NaHCO31h, 1 mmol/L EDTA 1 h，在蒸馏⽔中洗两次并放于含0.01% (m/V)叠氮钠的0. 1

mol/L磷酸钠缓冲液，于4℃保存。

2)≥1 mg/ml抗体溶液(A280=1. 44 mg IgG/ml)对2L 0.1 mol/L pH 6.8的磷酸钠缓冲液透析，于4℃缓慢搅动下过夜。

3)10mgHRP溶解于1ml0.1mol/LpH9.2的碳酸盐缓冲液，取0.25ml加⼊0.25ml新配制的1.71 mg/ml NaIO4溶液中，盖紧混匀，于室温下避光放置2h。

二苯并菲4)取1ml透析后的抗体溶液和0.25g SephadexG-25加⾄0.5mlHRP/NaIO4混合液中。⽤玻璃棉塞紧巴

斯德吸管管尖并⽤Parafilm封⼝膜封好。将抗体/葡聚糖凝胶/HRP混合物加⼈巴斯德吸管，室温下避光放置3h。

5)柱⼦⽤0.75ml碳酸盐缓冲液洗脱偶联物。加38μl5mg/mlNaBH4溶液⾄洗脱物中，室温下避光孵育30min。再加112μl 5mg/ml NaBH4溶液继续孵育60min。

6)加0.9ml饱和硫酸铵溶液，于4℃下温和搅拌30min。于4℃，10000g离⼼15min。

7)弃上清。沉淀重溶于0.75 ml TEN缓冲液中，装⼈透析袋于4℃对2 L TEN缓冲液透析过夜。更换TEN缓冲液再继续透析4h。

8)从透析袋中取出偶联物，加BSA⾄20mg/ml。加等体积⽢油，于-20℃保存。

本文发布于:2024-09-25 17:20:24，感谢您对本站的认可！

标签：抗体标记缓冲液

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