LB液体培养基的制备: 酵母粉 5g
蛋白胨 10 g
NaCl 10 g
LB平板: 酵母粉 5g Amp+抗性按1000:1的比例加Amp 蛋白胨 10 g Kana+抗性按2000:1的比例加Kana
NaCl 10 g
琼脂 15g
ddH20 定容至1L (4度保存)
Amp+(50mg/mL): Amp+粉末 50mg(抽滤,-20度保存,约1 mL
每管分装保存,保质期1年)
ddH20 1 mL
Kana+(50mg/mL): Kana+粉末 50mg(同上)
ddH20 1 mL
陈家案CaCl2(110.99,配0.1M): CaCl2粉末 11.1g
dH20 定容至1L
IPTG(200ug/mL) IPTG 2g(-20度,约1 mL每管分装保存,保质期半年)
dH20 定容至10mL (IPTG必须用0.22nm过滤膜过滤)
(10Х)TBS: NaCl 80.0g(常温保存)
Tris粉末 24.2
ddH20 定容至1L
TBST(洗膜用): TBS(1Х) 500Ml
吐温 500uL
NaCl 8g
KCl 0.2g
Na2HPO4 1.44g(十二水合3.6g)
KH2PO4 0.24g
加800 mLddH2O,根据开始的pH用NaOH 或HCL调pH到7.4,调好pH再定容到1升。
PBST的配制:
1L PBS+1 mL Tween20
loading buffer(5×)(样品:loading buffer=4:1)
电泳缓冲液(10×): 甘氨酸 144g (常温保存)
(running buffer) Tris粉末 30.3g
SDS 10g
ddH20 定容至1L
转移缓冲液(10×): 甘氨酸 144g
(transfer buffer) Tris粉末 30.3g
(常温保存) ddH20 定容至1L
使用时: 甲醇 200mL
转移缓冲液(10×) 100 mL
ddH20 700 mL
胶的制备:(溶质的质量分数=(溶质质量/溶液质量)×100%) 8.8Buffer: Tris 18.17g (4度保存)
10%SDS 4mL(10gSDS定容到100 mL,因为难溶,可以37度水浴一小时)
三界演义 ddH20 定容至100mL
6.8 Buffer: Tris 6.06g (4度保存)
多能干细胞 10%SDS 4 mL
ddH20 定容至100mL
10%APS: 10gAPS定容到100 mL (最好是1g定容到mL,用锡纸包好4度避光,尽快用完)
5%浓缩胶(4 mL):d H20 2.3 mL
6.8 Buffer 1 mL
30%Arc-Bis 660uL
10%APS 40uL (10gAPS定容到100 mL)
TEMED 4 uL(4度保存)
分离胶配方(8 mL)
| 阴阳鱼8% | 10% | 12% | 15% |
d H20 | 3.792 mL | 3.28 mL | 2.72 mL | 1.92 mL |
8.8 Buffer | 2 mL CHINESEGEY霸道太子 | 2 mL | 2 mL | 2 mL |
30%Arc-Bis | 2.128 mL | 2.64 mL | 3.2 mL | 4 mL |
10%APS | 80 uL | 80 uL洪福子 | 80 uL | 80 uL |
TEMED | 6.4 uL | 6.4 uL | 6.4 uL | 6.4 uL |
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注:APS要现配现用,配好要在一个星期内用完
染液: 甲醇 500mL 100
(室温) 乙酸 100 mL 20
R250 0.5g( R250考马斯亮蓝) 0.1
H20 400 mL 80
脱液: 甲醇 165mL 99 mL
(室温) 乙酸 50 mL 30 mL
H20 785 mL 471 mL
封闭液: 奶粉 5g
现配 叠氮钠 0.02g(防腐) 只用于封闭和一抗,二抗不用叠氮钠 PBS 定容到100mL